Os autores têm sem agradecimentos.

O protocolo segue as diretrizes da Comissão de ética de pesquisa humana a University Hospital Zurich.
1. diagnósticos de Neuromata e seleção dos pacientes
<ol><li>Realize pré-operatório bloqueios proximais para o neuroma para confirmar o diagnóstico. Avaliar os blocos no terço médio do antebraço e excluir disparadores potenciais das áreas sobrepostas inervação do SBRN, tais como o nervo cutâneo lateral antebraquial (LACN), nervo interósseo posterior (PIN) e um ramo dorsal do nervo ulnar 10.</li>
	<li>Realizar a cirurgia apenas em pacientes com dor considerável redução (pelo menos 5 pontos na escala de analógica Visual (VAS) para dor)11.</li>
</ol>2. cirúrgica preparação
<ol><li>O paciente não permita qualquer ingestão de alimento ou líquido 6 h antes da cirurgia.</li>
	<li>Coloca o paciente no meio da sala de cirurgia em uma tabela universal operativa em uma posição de cadeira de praia.</li>
	<li>Coloque a braço ou a mão afetada em um descanso de braço.</li>
	<li>Pergunte as anestesistas para realizar anestesia endotraqueal (fentanil 2 µ g/kg, rocurônio 0,6 mg/kg, propofol 150-250 mg).</li>
	<li>Desinfecte a pele com iodopovidona em área de lipoaspiração (por exemplo, parte interna da coxa e/ou abdômen superior/inferior) e no site da excisão de neuroma.</li>
	<li>Cobrir o paciente com cortinas cirúrgicos estéril, deixando exposto o local da lipoaspiração e do sítio cirúrgico.</li>
</ol>3. tumescente
<ol><li>Fazer várias pequenas (punção) incisões de cerca de 3-5 mm de diâmetro com um bisturi de lâmina 11 # na área da lipoaspiração. Incise tanto quanto a camada subcutânea é alcançada.</li>
	<li>Injetar a solução tumescente contendo um diluído de lidocaína e epinefrina (solução de lactato de Ringer 500 mL, 20 mL de lidocaína a 1% e epinefrina 1 mg) via o infiltrador de 14 mm (infiltrando cânula) na camada de gordura subcutânea (3 mm de profundidade) na região de colheita gordo.</li>
	<li>Aguarde pelo menos 20 min, permitindo que a solução tumescente sejam efetivadas.</li>
	<li>Cânula de gancho a 3 mm de coleta (diâmetro externo de 3 mm, comprimento 26 cm) com uma seringa de 60 mL Toomey e começar a colheita adiposo através de incisões. Nota: A mão nondominant controla continuamente colocação e curso da cânula.</li>
	<li>Puxar o êmbolo da seringa Toomey para a marca de 60 mL e coloque uma pinça mosquito junto o êmbolo retirado a fim de manter a pressão negativa na seringa e evitar uma contínua criação de vácuo pela mão dominante.</li>
	<li>Colheita de um mínimo de 220 mL de tecido adiposo, posicionando-as seringas Toomey na posição vertical no stand seringa Toomey fornecido; Isto permite a sedimentação da gordura e separação do líquido.</li>
	<li>Tome especial cuidado para obter um enxerto de gordura de boa qualidade sem quantidade substancial de sangue. Nota: Altere a região de lipoaspiração quando sangue aumentada conteúdo é notado.</li>
	<li>Suturar as incisões com pontos simples e aplicar pressão conforme necessário (por exemplo, compressiva correia).</li>
	<li>Transferi o lipoaspirate para um conjunto descartável estéril de uso único do sistema de isolamento.</li>
	<li>Manter uma seringa Toomey com lipoaspirate no suporte fornecido a fim de obter a fração de gordura para posterior lipofilling.</li>
</ol>4. tecido adiposo processamento
<ol><li>Feche o conjunto de consumíveis estéril. Nota: O sistema de isolamento (ver Tabela de materiais) confirma a integralidade através da realização de um teste molhado.</li>
	<li>Siga as instruções no visor. Nota: O processo é na maior parte software controlado e requer apenas a confirmação manual para as etapas listadas abaixo pressionando os botões "próxima" ou "voltar" no painel de controle. O lipoaspirate é transferida para o reservatório de coleta de tecido. No recipiente de coleta do tecido, a lipoaspirate pesar e automaticamente limpo com solução de lactato de Ringer, a fim de remover a solução de umectação e glóbulos residuais.</li>
	<li>Se necessário, adicione mais gordura. Nota: Dependendo do peso da colheita de tecido adiposo o sistema de isolamento pede ao usuário para adicionar mais gordura ou ele calcula a quantidade de reagente de enzima adicionais para adicionar.</li>
	<li>Adicione a quantidade necessária de reagente enzimático quando solicitado pelo sistema de isolamento. Nota: Durante o processo de digestão enzimática, separação dos lipídios e o SVF é alcançada. Desse modo, o tecido é em movimento de oscilação. Depois de concluída a digestão enzimática, o SVF é transferido automaticamente para a câmara de centrífuga para a concentração de células. Na câmara de centrifugação, o SVF é concentrado para um centrifugado (velocidade de centrifugação é aproximadamente 3.000 x g). Finalmente, o centrifugado sofre uma série de lavagens com solução de lactato de Ringer para reduzir os níveis de enzima residual na saída. Quando o processo estiver concluído, 5 mL de líquido claro (SVF) é obtido.</li>
</ol>5. ato cirúrgico
<ol><li>Para aproximar o neuroma, faça uma incisão de pele sobre o local previamente diagnosticado neuroma no terço distal do antebraço.</li>
	<li>Sob o uso de óculos de lupa cirúrgica Lupas Binoculares (2.5-3.5. X), continue a dissecar o tecido subcutâneo e identificar o nervo envolvido proximal para o neuroma.<ol>
<li>Posteriormente, siga o nervo distalmente e identificar o neuroma (com base na inspeção visual).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Uma vez que a extensão completa do neuroma é claro, começa a impostos especiais de consumo o neuroma por um corte de tesoura reta trans-neural. Se nenhum neuroma é identificado, apenas neurólise do nervo é executada.</li>
	<li>Continue com a neurólise do nervo coto restante até 3 cm proximal ao pulso. Nota: O fim do coto do nervo deve ser localizado no meio da incisão principal.</li>
	<li>Organize duas a quatro pequenas perfurações (stab) incisões (1 mm de diâmetro) com um bisturi através de cutânea epidérmica e dérmica em torno da abordagem principal.</li>
	<li>Colocar cânulas sem corte de dois a quatro (comprimento de calibre 16, 9cm) através da facada incisões perineural para o coto. Nota: A ponta das cânulas deve ser dirigida para o coto do nervo.</li>
	<li>Fixe as cânulas no lugar pelo curativo adesivo.</li>
	<li>Coloque os pontos ao redor as cânulas e deixar o material de sutura no local sem fixar o nó.</li>
	<li>Sutura da incisão principal firmemente para evitar a saída de enxertia. Nota: Certifique-se que as cânulas permanecem em situ.</li>
</ol>6. aplicação do enxerto gordura enriquecido SVF
Nota: Depois de aproximadamente 1,5 h de processamento, a 5 mL do SVF transformado está pronto para utilização posterior.
<ol><li>Aspire 5 mL de SVF em uma seringa de 10 mL se comunicando.</li>
	<li>Da mesma forma, Aspire 2 mL da fração lipídica sedimentada na seringa de 10 mL a adversária.</li>
	<li>Misture os 5 mL de SVF com a 2 mL da fração lipídica sedimentada alternando-se puxar o êmbolo de uma seringa e puxando para baixo o êmbolo da seringa se comunicando, opondo-se até à obtenção de mistura suficiente.</li>
	<li>Divida o enxerto de gordura enriquecido SVF igualmente em seringas de 10 mL de dois a quatro.</li>
	<li>Distribua o enxerto preparado de gordura SVF-enriquecido, um após o outro igualmente em torno do nervo stump conectando as seringas para as cânulas sem corte. Nota: Antes de aplicar o enxerto, certifique-se que as cânulas são fixadas na posição correta e tenha cuidado para não deslocar as cânulas e aplicando o enxerto de gordura.</li>
	<li>Remova as cânulas com cuidado.</li>
	<li>Em seguida, tape as punção pequenas incisões com steri-strips.</li>
	<li>Imobilize a mão através da aplicação de uma tala no intrínseco além de posição (articulações metacarpofalangeanas (MCP) em 60-70° de flexão, as articulações interfalangeanas de (IP) totalmente estendidas, polegar na projeção do punho, punho em flexão dorsal de 25°). Se apenas neurólise do nervo é executada, sem tala é necessária e braço e do pulso estão enfaixados por 10 dias.</li>
</ol>7. no pós-operatório mobilização de doentes
<ol><li>Transferir o paciente para o pós-operatório de unidade de recuperação pós-anestesia e permitir a monitorização suficientes na ala.</li>
	<li>Continue imobilizar o pulso por 10 dias após a cirurgia.</li>
	<li>Realizar a primeira mudança de curativos após a pós-cirurgia 48 h e continuar a intervalos regulares (ou seja, cada segundo dia até quitação).</li>
	<li>Remova as suturas de 12-14 dias no pós-operatório.</li>
	<li>Realize avaliação clínica da dor durante o seguimento em 2, 6, 12 e 36 meses.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Mackinnon, S. E., Dellon, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+treatment+of+recurrent+dorsoradial+wrist+neuromas.">Results of treatment of recurrent dorsoradial wrist neuromas.</a> Ann Plast Surg. 19 (1), 54-61 (1987).</li><li>Hazari, A., Elliot, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+end-neuromas,+neuromas-in-continuity+and+scarred+nerves+of+the+digits+by+proximal+relocation.">Treatment of end-neuromas, neuromas-in-continuity and scarred nerves of the digits by proximal relocation.</a> J Hand Surg Br. 29 (4), 338-350 (2004).</li><li>Goldstein, S. A., Sturim, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraosseous+nerve+transposition+for+treatment+of+painful+neuromas.">Intraosseous nerve transposition for treatment of painful neuromas.</a> J Hand Surg Am. 10 (2), 270-274 (1985).</li><li>Koch, H., Haas, F., Hubmer, M., Rappl, T., Scharnagl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+painful+neuroma+by+resection+and+nerve+stump+transplantation+into+a+vein.">Treatment of painful neuroma by resection and nerve stump transplantation into a vein.</a> Ann Plast Surg. 51 (1), 45-50 (2003).</li><li>Vaienti, L., Merle, M., Battiston, B., Villani, F., Gazzola, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perineural+fat+grafting+in+the+treatment+of+painful+end-neuromas+of+the+upper+limb:+a+pilot+study.">Perineural fat grafting in the treatment of painful end-neuromas of the upper limb: a pilot study.</a> J Hand Surg Eur. 38 (1), 36-42 (2013).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilineage+cells+from+human+adipose+tissue:+implications+for+cell-based+therapies.">Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Eng. 7 (2), 211-228 (2001).</li><li>Fraser, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Celution+System:+Automated+Processing+of+Adipose-Derived+Regenerative+Cells+in+a+Functionally+Closed+System.">The Celution System: Automated Processing of Adipose-Derived Regenerative Cells in a Functionally Closed System.</a> Adv Wound Care (New Rochelle). 3 (1), 38-45 (2014).</li><li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+vascular+fraction:+A+regenerative+reality?+Part+2:+Mechanisms+of+regenerative+action.">Stromal vascular fraction: A regenerative reality? Part 2: Mechanisms of regenerative action.</a> J Plast Reconstr Aesthet Surg. 69 (2), 180-188 (2015).</li><li>Lutz, B. S., Ma, S. F., Chuang, D. C., Chan, K. H., Wei, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interposition+of+a+pedicle+fat+flap+significantly+improves+specificity+of+reinnervation+and+motor+recovery+after+repair+of+transected+nerves+in+adjacency+in+rats.">Interposition of a pedicle fat flap significantly improves specificity of reinnervation and motor recovery after repair of transected nerves in adjacency in rats.</a> Plast Reconstr Surg. 107 (1), 116-123 (2001).</li><li>Calcagni, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+novel+treatment+of+SVF-enriched+fat+grafting+for+painful+end-neuromas+of+superficial+radial+nerve.">The novel treatment of SVF-enriched fat grafting for painful end-neuromas of superficial radial nerve.</a> Microsurgery. , (2016).</li><li>Hawker, G. A., Mian, S., Kendzerska, T., French, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measures+of+adult+pain:+Visual+Analog+Scale+for+Pain+(VAS+Pain),+Numeric+Rating+Scale+for+Pain+(NRS+Pain),+McGill+Pain+Questionnaire+(MPQ),+Short-Form+McGill+Pain+Questionnaire+(SF-MPQ),+Chronic+Pain+Grade+Scale+(CPGS),+Short+Form-36+Bodily+Pain+Scale+(SF-36+BPS),+and+Measure+of+Intermittent+and+Constant+Osteoarthritis+Pain+(ICOAP).">Measures of adult pain: Visual Analog Scale for Pain (VAS Pain), Numeric Rating Scale for Pain (NRS Pain), McGill Pain Questionnaire (MPQ), Short-Form McGill Pain Questionnaire (SF-MPQ), Chronic Pain Grade Scale (CPGS), Short Form-36 Bodily Pain Scale (SF-36 BPS), and Measure of Intermittent and Constant Osteoarthritis Pain (ICOAP).</a> Arthritis Care Res (Hoboken). 63 Suppl. 63, S240-S252 (2011).</li><li>Stokvis, A., van der Avoort, D. J., van Neck, J. W., Hovius, S. E., Coert, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+management+of+neuroma+pain:+a+prospective+follow-up+study.">Surgical management of neuroma pain: a prospective follow-up study.</a> Pain. 151 (3), 862-869 (2010).</li><li>Kolle, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+autologous+fat+grafts+with+ex-vivo+expanded+adipose+tissue-derived+stem+cells+for+graft+survival:+a+randomised+placebo-controlled+trial.">Enrichment of autologous fat grafts with ex-vivo expanded adipose tissue-derived stem cells for graft survival: a randomised placebo-controlled trial.</a> Lancet. 382 (9898), 1113-1120 (2013).</li><li>Zhu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+regeneration+after+free+fat+transplantation:+promotion+by+stromal+vascular+fraction+cells.">Adipocyte regeneration after free fat transplantation: promotion by stromal vascular fraction cells.</a> Cell Transplant. 24 (1), 49-62 (2015).</li><li>Eto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+adipose+tissue-resident+hematopoietic+cell+populations+reveals+a+novel+macrophage+subpopulation+with+CD34+expression+and+mesenchymal+multipotency.">Characterization of human adipose tissue-resident hematopoietic cell populations reveals a novel macrophage subpopulation with CD34 expression and mesenchymal multipotency.</a> Stem Cells Dev. 22 (6), 985-997 (2013).</li><li>Premaratne, G. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+vascular+fraction+transplantation+as+an+alternative+therapy+for+ischemic+heart+failure:+anti-inflammatory+role.">Stromal vascular fraction transplantation as an alternative therapy for ischemic heart failure: anti-inflammatory role.</a> J Cardiothorac Surg. 6, 43 (2011).</li><li>Paik, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+in+Fat+Grafting:+Part+V.+Cell-Assisted+Lipotransfer+to+Enhance+Fat+Graft+Retention+Is+Dose+Dependent.">Studies in Fat Grafting: Part V. Cell-Assisted Lipotransfer to Enhance Fat Graft Retention Is Dose Dependent.</a> Plast Reconstr Surg. 136 (1), 67-75 (2015).</li></ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

O objetivo do presente estudo é ilustrar metodicamente os aspectos técnicos do SVF enriquecido enxerto de gordura como um tratamento inovador para sintomático final-neuromata.
Neuromata do SBRN está associado a uma taxa de sucesso cirúrgico de apenas 33%12. Vaienti et al apresentou uma série de resultados favoráveis no início acompanhamento usando perineural lipoenxertia (PFG) sem adicionar o SVF em 8 pacientes com neuromata dolorosa do...

A gestão de sintomático final-neuromata do SBRN permanece desafiante com uma infinidade de tratamentos cirúrgicos existentes. Principalmente, o neuroma é extirpado e o coto restante do nervo é realocado em estruturas vizinhas, tais como músculos1,2, osso3ou veias4. Isso presume-se para evitar o out-surgimento dos regeneração neurais fascículos, imitando a ambiência de um órgão-fim. No entanto, nenhuma destas técnicas provou ser superior, como altas taxas de recidiva da dor e redução da dor insuficiente observaram-se muitas vezes.
Recentemente, enxerto de gordura ao redor do coto de nervo restantes produziu resultados promissores e foi defendida como uma nova opção de tratamento para o doloroso fim-neuromata do membro superior5. Além de atuar como uma barreira mecânica para evitar o movimento contínuo e toque em dor, o aspecto benéfico do enxerto de gordura bastante é atribuído ao nível celular. Tecido adiposo humano contém vários tipos de células, incluindo preadipocytes, mastócitos, pericitos, células endoteliais, células de músculo liso vascular, fibroblastos, e adiposo derivadas de células-tronco (ADSCs) juntamente com células-tronco hematopoiéticas6. Esta população celular heterogênea é conhecida como células de regeneração de Adipose-Derived (ADRCs) ou SVF e pode ser obtida o lipoaspirate por um sistema de isolamento (ver A tabela de materiais) e reagente enzimático aplicada (ver tabela de materiais de )7. O mecanismo exato de ação é ainda não totalmente compreendido; no entanto, SVF tem sido associada com melhorias na angiogênese, imunomodulação, diferenciação e secreção de matriz extracelular8.
A população concentrada de células do SVF é adicionada ao enxerto de gordura com a finalidade de reduzir a taxa de reabsorção e aumentar o potencial regenerativo do enxerto gordo, como estudos recentes revelaram dor recaída após 12 meses com enxerto de gordura sem SVF adicionado 5. Além disso, a ação biológica também oferece efeitos benéficos sobre o nervo propriamente dito, reduzindo a brotação axonal desorganizada do coto9 e aderências de cicatriz subsequente que podem resultar na compressão do nervo.
O primeiro estudo clínico para descrever SVF enriquecido a enxerto de gordura como uma romance opção cirúrgica para o tratamento de fim-neuromata sintomático da SBRN foi recentemente publicado10. Em geral, a técnica pode ser aplicada a qualquer neuroma ocorram após lesão do nervo acidental ou iatrogênica. O objetivo do presente estudo subsequente é metodicamente ilustrar os aspectos técnicos deste procedimento.

<table><tbody><tr><td>Cytori Celution System</td><td>Cytori</td><td></td><td>isolation system</td></tr><tr><td>Celase</td><td>Cytori</td><td></td><td>enyzme reagent</td></tr><tr><td>liposuction system</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>tumescent solution (500 ml Lactated Ringers, 20 ml of 1% lidocaine and 1 mg epinephrine)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>14-gauge infiltrator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3 mm-collecting cannula (15, 26, 32 cm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>60 mL Tommey syringes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>mosquito clamp</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Toomey syringe stand</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 cannulas (fat injecting cannulas 1.5 mm, syringe NO.2, 90 mm)</td><td>Chalybs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 mL syringes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>connecting device for syringes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>#11- and #15-blade scalpel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>stevens scissors</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pins pincette</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>bipolar electrocautery</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>suture material</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>adhesive dressing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>binocular loupes magnifier glasses (2.5-3.5x)</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Statistical Package for Social Sciences, version 22</td><td>IBM</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

stromal vascular fraction-enriched fat grafting for the treatment of symptomatic end-neuromata

O objetivo deste estudo foi metodicamente ilustrar e destacar os passos cruciais da fração vascular do estroma (SVF)-enriquecido de enxerto de gordura como um romance tratamento sintomático final-neuromata de nervos sensoriais periféricos e neste estudo, especificamente de o ramo superficial do nervo radial (SBRN). Apesar de uma infinidade de tratamentos existentes, dor pós-operatória persistente e recidiva de dor comum são ainda muito comum, independente do processo de avaliação. O neuroma é protocolo conformemente para padronizada hipoglossal extirpado. Em vez da deslocalização do coto nervo regenerar na vizinha estruturas anatômicas, tais como músculo ou osso, um enxerto de gordura é aplicada perifocally e age como uma barreira mecânica. A fim de reduzir a taxa de reabsorção de gordura e aumentar o potencial regenerativo do enxerto, o SVF altamente concentrado é integrado no enxerto. O SVF é isolado da gordura subcutânea por separação enzimática e mecânica da lipoaspirate por um sistema de isolamento comercial específica. O enxerto de gordura enriquecido SVF fornece uma barreira mecânica e vários efeitos biológicos a nível celular, incluindo a melhoria da angiogênese, inflamação e fibrose. Mecânicos e biológicos efeitos ajudam a reduzir a consequência axonal desorganizada do coto nervoso durante a regeneração do nervo e, consequentemente, prevenir a recorrência de doloroso fim-neuromata.

Os dados foram analisados utilizando o software estatístico e apresentados como média ± desvios-padrão. O teste de Kolmogorov-Smirnov foi aplicado para verificar a distribuição não-paramétrico da população estudada e confirmada uma distribuição empírica negativa. Teste o de Wilcoxon para amostras relacionadas baseadas na natureza não paramétrico da população estudada, foi empregado para comparar resultados de pré-operatórios e pós-operatórios. Significância estatíst...

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Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

Do estroma Vascular fração enriquecida enxerto de gordura para o tratamento sintomático final-neuromata

O objetivo do estudo é ilustrar o procedimento técnico da fração vascular do estroma (SVF)-enriquecido de enxerto de gordura como um romance tratamento sintomático final-neuromata. Esta técnica oferece vantagens de ambos a barreira mecânica e a ação biológica a nível celular pelo SVF transformado e concentrada.

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

stromal-vascular-fraction-enriched-fat-grafting-for-treatment

Research

JoVE Journal

Medicine

7.6K visualizações.  University Hospital Zurich. O objetivo do estudo é ilustrar o procedimento técnico da fração vascular do estroma (SVF)-enriquecido de enxerto de gordura como um romance tratamento sintomático final-neuromata. Esta técnica oferece vantagens de ambos a barreira mecânica e a ação biológica a nível celular pelo SVF transformado e concentrada.

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A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper vessel development and homeostasis. However, studies on endothelial lineage hierarchy remain elusive due to the lack of tools to gain access as well as to directly evaluate their behavior in vivo. To address this shortcoming, a new tissue model to study angiogenesis using the mammary fat pad has been developed. The mammary gland develops mostly in the postnatal stages, including puberty and pregnancy, during which robust epithelium proliferation is accompanied by extensive vascular remodeling. Mammary fat pads provide space, matrix, and rich angiogenic stimuli from the growing mammary epithelium. Furthermore, mammary fat pads are located outside the peritoneal cavity, making them an easily accessible grafting site for assessing the angiogenic potential of exogenous cells. This work also describes an efficient tracing approach using fluorescent reporter mice to specifically label the targeted population of vascular endothelial stem cells (VESCs) in vivo. This lineage tracing method, coupled with subsequent tissue whole-mount microscopy, enable the direct visualization of targeted cells and their descendants, through which the proliferation capability can be quantified and the differentiation commitment can be fate-mapped. Using these methods, a population of bipotent protein C receptor (Procr) expressing VESCs has recently been identified in multiple vascular systems. Procr+ VESCs, giving rise to both new ECs and pericytes, actively contribute to angiogenesis during development, homeostasis, and injury repair. Overall, this manuscript describes a new mammary fat pad transplantation and in vivo lineage tracing techniques that can be used to evaluate the stem cell properties of VESCs.

This work demonstrates a novel approach to assess the proliferation, differentiation, and vessel-forming potential of vascular endothelial stem cells (VESCs) through mammary fat pad transplantation followed by whole-mount tissue preparation for microscopic observation. A lineage tracing strategy to investigate the behavior of VESCs in vivo is also presented.

Uma nova técnica de transplante de almofada de gordura mamária para visualizar a geração de vasos de células vasculares endoteliais vasculares

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Biologia do Desenvolvimento

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

Avaliação da viabilidade de gordura humana injecção em ratinhos nu com Micro-Tomografia Computadorizada

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Medicina

A Patient-Derived Xenograft Model for Venous Malformation

Venous malformation (VM) is a vascular anomaly that arises from impaired development of the venous network resulting in dilated and often dysfunctional veins. The purpose of this article is to carefully describe the establishment of a murine xenograft model that mimics human VM and is able to reflect patient heterogeneity. Hyper-activating non-inherited (somatic) TEK (TIE2) and PIK3CA mutations in endothelial cells (EC) have been identified as the main drivers of pathological vessel enlargement in VM. The following protocol describes the isolation, purification and expansion of patient-derived EC expressing mutant TIE2 and/or PIK3CA. These EC are injected subcutaneously into the back of immunodeficient athymic mice to generate ectatic vascular channels. Lesions generated with TIE2 or PIK3CA-mutant EC are visibly vascularized within 7&#8210;9 days of injection and recapitulate histopathological features of VM patient tissue. This VM xenograft model provides a reliable platform to investigate the cellular and molecular mechanisms driving VM formation and expansion. In addition, this model will be instrumental for translational studies testing the efficacy of novel drug candidates in preventing the abnormal vessel enlargement seen in human VM.

We present a detailed protocol to generate a murine xenograft model of venous malformation. This model is based on the subcutaneous injection of patient-derived endothelial cells containing hyper-activating TIE2 and/or PIK3CA gene mutations. Xenograft lesions closely recapitulate the histopathological features of VM patient tissue.

Um modelo de xenoenxerto derivado do paciente para malformação venosa

Venous malformation (VM) is a vascular anomaly that arises from impaired development of the venous network resulting in dilated and often dysfunctional ...

Isolation of Murine Adipose Tissue-derived Microvascular Fragments as Vascularization Units for Tissue Engineering

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several angiogenic and prevascularization strategies have been established. However, most cell-based approaches include time-consuming in vitro steps for the formation of a microvascular network. Hence, they are not suitable for intraoperative one-step procedures. Adipose tissue-derived microvascular fragments (ad-MVF) represent promising vascularization units. They can be easily isolated from fat tissue and exhibit a functional microvessel morphology. Moreover, they rapidly reassemble into new microvascular networks after in vivo implantation. In addition, ad-MVF have been shown to induce lymphangiogenesis. Finally, they are a rich source of mesenchymal stem cells, which may further contribute to their high vascularization potential. In previous studies we have demonstrated the remarkable vascularization capacity of ad-MVF in engineered bone and skin substitutes. In the present study, we report on a standardized protocol for the enzymatic isolation of ad-MVF from murine fat tissue.

We present a protocol to isolate adipose tissue-derived microvascular fragments that represent promising vascularization units. They can be rapidly isolated, do not require in vitro processing and, thus, may be used for one-step prevascularization in different fields of tissue engineering.

Isolamento de Murino adiposo derivada de tecido microvascular Fragmentos como Vascularização Unidades para engenharia de tecidos

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several ...

Bioengenharia

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the study of nerve regeneration and myelination. The glial cells of the peripheral nervous system, Schwann cells (SC), are key facilitators of these processes; it is therefore crucial that the interactions of these cellular components are studied together. Direct contact between DRG neurons and glial cells provides additional stimuli sensed by specific membrane receptors, further improving the neuronal response. SC release growth factors and proteins in the culture medium, which enhance neuron survival and stimulate neurite sprouting and extension. However, SC require long proliferation time to be used for tissue engineering applications and the sacrifice of an healthy nerve for their sourcing. Adipose-derived stem cells (ASC) differentiated into SC phenotype are a valid alternative to SC for the set-up of a co-culture model with DRG neurons to study nerve regeneration. The present work presents a detailed and reproducible step-by-step protocol to harvest both DRG neurons and ASC from adult rats; to differentiate ASC towards a SC phenotype; and combines the two cell types in a direct co-culture system to investigate the interplay between neurons and SC in the peripheral nervous system. This tool has great potential in the optimization of tissue-engineered constructs for peripheral nerve repair.

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) are structures containing the sensory neurons of the peripheral nervous system. When dissociated, they can be co-cultured with SC-like adipose-derived stem cells (ASC), providing a valuable model to study in vitro nerve regeneration and myelination, mimicking the in vivo environment at the injury site.

Dorsal Root Ganglia neurônios e células-tronco diferenciadas adiposo-derivados: An<em&gt; In Vitro</em&gt; Co-cultura modelo para estudar a regeneração do nervo periférico

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Neurociência

Transplantation of Schwann Cells Inside PVDF-TrFE Conduits to Bridge Transected Rat Spinal Cord Stumps to Promote Axon Regeneration Across the Gap

Among various models for spinal cord injury in rats, the contusion model is the most often used because it is the most common type of human spinal cord injury. The complete transection model, although not as clinically relevant as the contusion model, is the most rigorous method to evaluate axon regeneration. In the contusion model, it is difficult to distinguish regenerated from sprouted or spared axons due to the presence of remaining tissue post injury. In the complete transection model, a bridging method is necessary to fill the gap and create continuity from the rostral to the caudal stumps in order to evaluate the effectiveness of the treatments. A reliable bridging surgery is essential to test outcome measures by reducing the variability due to the surgical method. The protocols described here are used to prepare Schwann cells (SCs) and conduits prior to transplantation, complete transection of the spinal cord at thoracic level 8 (T8), insert the conduit, and transplant SCs into the conduit. This approach also uses in situ gelling of an injectable basement membrane matrix with SC transplantation that allows improved axon growth across the rostral and caudal interfaces with the host tissue.

This article describes a technique to insert a hollow conduit between the spinal cord stumps after complete transection and fill with Schwann cells (SCs) and injectable basement membrane matrix in order to bridge and promote axon regeneration across the gap.

Transplante de Schwann células dentro de conduítes de PVDF-TrFE a ponte rato necrosante tocos de medula espinhal para promover a regeneração do axônio através da abertura

Among various models for spinal cord injury in rats, the contusion model is the most often used because it is the most common type of human spinal cord ...

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of cell products using collagenase. Here, we present a protocol to generate an injectable mixture of SVF cells and native extracellular matrix from adipose tissue by a purely mechanical process. Lipoaspirates are put into a centrifuge and spun at 1,200 x g for 3 min. The middle layer is collected and separated into two layers (high-density fat at the bottom and low-density fat on the top). The upper layer is directly emulsified by intersyringe shifting, at a rate of 20 mL/s for 6x to 8x. The emulsified fat is centrifuged at 2,000 x g for 3 min, and the sticky substance under the oil layer is collected and defined as the extracellular matrix (ECM)/SVF-gel. The oil on the top layer is collected. Approximately 5 mL of oil is added to 15 mL of high-density fat and emulsified by intersyringe shifting, at a rate of 20 mL/s for 6x to 8x. The emulsified fat is centrifuged at 2,000 x g for 3 min, and the sticky substance is also ECM/SVF-gel. After the transplantation of the ECM/SVF-gel into nude mice, the graft is harvested and assessed by histologic examination. The result shows that this product has the potential to regenerate into normal adipose tissue. This procedure is a simple, effective mechanical dissociation procedure to condense the SVF cells embedded in their natural supportive ECM for regenerative purposes.

Here, we present a protocol to obtain stromal vascular fraction from adipose tissue through a series of mechanical processes, which include emulsification and multiple centrifugations.

Micronização mecânica de Lipoaspirates para terapia regenerativa

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular disease is the development of ischemia. In severe cases, patients can develop critical limb ischemia in which they experience constant pain and an increased risk of limb amputation. Current therapies for peripheral ischemia include bypass surgery or percutaneous interventions such as angioplasty with stenting or atherectomy to restore blood flow. However, these treatments often fail to the continued progression of vascular disease or restenosis or are contraindicated due to the overall poor health of the patient. A promising potential approach to treat peripheral ischemia involves the induction of therapeutic neovascularization to allow the patient to develop collateral vasculature. This newly formed network alleviates peripheral ischemia by restoring perfusion to the affected area. The most frequently employed preclinical model for peripheral ischemia utilizes the creation of hind limb ischemia in healthy rabbits through femoral artery ligation. In the past, however, there has been a strong disconnect between the success of preclinical studies and the failure of clinical trials regarding treatments for peripheral ischemia. Healthy animals typically have robust vascular regeneration in response to surgically induced ischemia, in contrast to the reduced vascularity and regeneration in patients with chronic peripheral ischemia. Here, we describe an optimized animal model for peripheral ischemia in rabbits that includes hyperlipidemia and diabetes. This model has reduced collateral formation and blood pressure recovery in comparison to a model with a higher cholesterol diet. Thus, the model may provide better correlation with human patients with compromised angiogenesis from the common co-morbidities that accompany peripheral vascular disease.

We describe a surgical procedure used to induce peripheral ischemia in rabbits with hyperlipidemia and diabetes. This surgery acts as a preclinical model for conditions experienced in peripheral artery disease in patients. Angiography is also described as a means to measure the extent of introduced ischemia and recovery of perfusion.

Modelo pré-clínico de isquemia de membros posteriores em coelhos diabéticos

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

<meta charset="utf8"></head><body>Fração vascular estromal mecânica em hidrogel de fibrina para medicina regenerativa

The Combination of Mechanically Isolated Stromal Vascular Fraction and Fibrin Hydrogel: A Processing Protocol

The regenerative potential of adipose-derived stromal cells (ASCs) has gained significant attention in regenerative and translational research. In the past, the extraction of these cells from adipose tissue required a multistep enzyme-based process, resulting in a heterogenous cell mix consisting of ACSs and other cells, which are jointly termed the stromal vascular fraction (SVF). More recently introduced mechanical SVF (mSVF) isolation protocols are less time-consuming and bypass regulatory concerns. We recently proposed a protocol that generates mSVF rich in stromal cells based on a combination of emulsification and centrifugation. One current issue in mSVF application for wound therapy application is the lack of a scaffold providing protection from mechanical manipulation and desiccation. Fibrin hydrogels have been shown to be a useful adjunct in cell transfer for wound healing purposes in the past. In the work herein, we delineate the preparation steps of an mSVF-fibrin hydrogel construct as a novel approach for translational research and clinical application.

<meta charset="utf8"></head><body>Autor em destaque: Explorando o potencial da fração vascular estromal derivada de gordura para a cicatrização de feridas

Mechanically isolated stromal vascular fraction (SVF) in combination with a fibrin hydrogel offers an easy and efficient carrier for viable adipose-derived stromal cells for various indications, including tissue engineering and or wound healing purposes. Here, we present the preparation of a mechanical SVF (mSVF)-fibrin hydrogel construct for translational research and clinical application.

A combinação de fração vascular estromal isolada mecanicamente e hidrogel de fibrina: um protocolo de processamento

The regenerative potential of adipose-derived stromal cells (ASCs) has gained significant attention in regenerative and translational research. In the ...

Do estroma Vascular fração enriquecida enxerto de gordura para o tratamento sintomático final-neuromata

Resumo

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A combinação de fração vascular estromal isolada mecanicamente e hidrogel de fibrina: um protocolo de processamento

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