Name: stromal vascular fraction-enriched fat grafting for the treatment of symptomatic end-neuromata
Uploaded: 2017-11-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata at JoVE.com

저자 아무 승인 있다.

프로토콜 대학 병원 취리히 인간의 연구 윤리 위원회의 지침을 따릅니다.
1입니다. Neuromata와 환자 선택의 진단
<ol><li>수술 전 신경 블록은 싱 경종을 인접 진단 확인 수행 합니다. 팔 뚝의 중간 세 번째에 있는 블록을 평가 하 고 겹치는 신경 분포 영역의 측면 antebrachial 피부 신경 (LACN), 후부 상호 신경 (핀), 척 골 신경 의 지 지점 등 SBRN의 잠재적인 트리거 제외 10.</li>
	<li>상당한 통증 감소 (적어도 5 점 통증에 대 한 시각적 아날로그 규모 (VAS)에)11를 가진 환자에서 서만 수술을 수행 합니다.</li>
</ol>2. 수술 준비
<ol><li>어떤 음식이 나 액체 섭취를 6 h는 수술 전에 환자를 금지 한다.</li>
	<li>비치의 자 위치에 보편적인 요원 테이블에 수술 스위트 중간에 환자를 배치 합니다.</li>
	<li>장소는 팔 나머지에 영향을 받는 팔/손.</li>
	<li>Endotracheal 마 취를 수행 하 마를 물어 (펜타닐 2 µ g/k g, rocuronium 0.6 mg/kg, propofol 150-250 밀리 그램).</li>
	<li>지방 흡입 (예: 허벅지 안쪽 또는 위/아래 복 부)의 영역에 싱 경종 절단의 사이트 povidone 요오드 피부 소독.</li>
	<li>무 균 수술 커튼으로 환자를 커버, 지방 흡입의 사이트와 외과 사이트 노출 떠나.</li>
</ol>3. tumescent 지방 흡입
<ol><li>지방 흡입의 영역에서 #11-블레이드 메스와 함께 약 3-5 m m 직경의 여러 작은 자상 (찔린) 절 개를 확인 합니다. Incise 멀리로 피하 층에 도달.</li>
	<li>포함 하는 희석 lidocaine 피 네 프 린 (500 mL 벨의 젖 산 솔루션, 1 %lidocaine, 1 mg 피 네 프 린의 20 mL) (정 침투) 14 게이지 infiltrator 통해 피하 지방 층 (깊이 3 m m)으로 tumescent 솔루션에 주입 합니다 수확 하는 지방 지역입니다.</li>
	<li>Tumescent 솔루션 적용을 허용 하는 20 분 이상 기다립니다.</li>
	<li>후크는 3 mm 수집 정 (외부 직경 3 mm, 길이 26 cm) 60 mL 투미 주사기를 찔 러 절 개를 통해 지방 수확 시작. 참고: 배치 및 과정은 정 nondominant 손은 지속적으로 제어합니다.</li>
	<li>60 mL 마크 투미 주사기의 플런저를 철수 하 고 주사기에 부정적인 압력을 유지 하 고 지배적인 손으로 연속 진공 생성을 피하기 위해 철회 플런저 따라 모기 클램프 장소.</li>
	<li>투미 주사기 제공된 투미 주사기 스탠드;에 수직 위치에 배치 하 여 지방이 많은 직물의 220 mL의 최소 수확 지방과 액체 로부터 분리 침전 수 있습니다.</li>
	<li>양질의 지방 이식 없이 상당한 양의 혈액을 얻기 위해 특별 한 주의 분리 했습니다. 참고: 증강된 혈액 콘텐츠 발견 지방 흡입의 영역을 변경 합니다.</li>
	<li>간단한 바늘으로 찔 러 절 개를 봉합 하 고 압력으로 (예: 압축 벨트).</li>
	<li>절연 시스템의 단일 사용 멸 균 일회용 세트에는 lipoaspirate를 전송 합니다.</li>
	<li>나중 lipofilling 위한 지방 분수를 얻으려면 제공 된 스탠드에 lipoaspirate와 함께 한 투미 주사기를 유지.</li>
</ol>4. 지방 조직 처리
<ol><li>멸 균 소모품 세트를 닫습니다. 참고: 격리 시스템 젖은 테스트를 수행 하 여 완전성을 확인 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>디스플레이에 지시를 따릅니다. 참고: 프로세스 이며 주로 소프트웨어 제어만 컨트롤 패널에서 "뒤로" 또는 "다음" 버튼을 눌러 아래 나열 된 단계에 대 한 수동 확인을 요구 한다. lipoaspirate 조직 수집 용기로 전송 됩니다. 조직 수집 용기에는 lipoaspirate는 무게와 자동으로 잔여 혈액 세포와 일로 솔루션을 제거 하려면 벨소리의 젖 산 용액으로 세척.</li>
	<li>필요한 경우 더 많은 지방 질을 추가 합니다. 참고: 수확된 지방이 많은 직물의 무게에 따라 절연 시스템 요청 더 많은 지방 질을 추가 하려면 사용자 또는 추가할 추가 효소 시 약의 양을 계산 합니다.</li>
	<li>절연 시스템에서 메시지가 표시 되 면 효소 시 약의 필요한 금액을 추가 합니다. 참고: 효소 소화 과정에서 지질 분리는 SVF 이루어집니다. 따라서, 조직 모션 진동 이다입니다. 효소 소화 완료 후는 SVF 셀 농도 원심 챔버로 자동으로 전송 됩니다. 원심 분리기 약 실에는 SVF는 셀 펠 릿에 집중 (원심 분리기 속도 약 3000 x g). 마지막으로, 셀 펠 릿 벨의 젖 산 솔루션 출력에서 잔여 효소 수치를 줄이기 위해 세척의 시리즈를 겪 습. 프로세스가 완료 되 면 맑은 액체 (SVF)의 5 mL는 얻어진 다.</li>
</ol>5. 수술
<ol><li>싱 경종, 접근 하는 팔 뚝의 원심 세 번째에서 이전 진단된 싱 경종 사이트를 통해 피부 절 개를 확인 합니다.</li>
	<li>수술 쌍 안 loupes 돋보기 안경 (2.5-3.5 X)의 사용에서 계속 피하 조직 부 관련된 신경 근 위는 싱 경종을 식별.<ol>
<li>그 후, 신경 distally 따라 고 싱 경종 (검사 기준)를 식별 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>전체는 싱 경종은 분명, 일단 바로 트랜스 신경가 위 컷으로는 싱 경종을 삭제할 시작. 없는 싱 경종 식별 됩니다, 신경의 neurolysis만 수행 됩니다.</li>
	<li>손목에 근 위 3 cm까지 나머지 신경 그 루터 기의 neurolysis와 함께 계속. 참고: 신경 그 루터 기 끝 한가운데 주 절 개 해야 합니다.</li>
	<li>표 피 및 진 커티스 주위 주 접근을 통해 메스와 2-4 작은 펑크 (자상) 절 개 (직경에서 1 m m)를 정렬 합니다.</li>
	<li>2 ~ 4 무딘 뉼 장소 (16 게이지, 길이 9 cm) 그 루터 기를 찔 러 절 perineural 통해. 참고:는 뉼의 팁 신경 몸통 쪽으로 이동 한다.</li>
	<li>접착성 드레싱에 의해 장소에서 뉼을 보호 합니다.</li>
	<li>주위는 뉼 바늘 놓고 노드를 확보 하지 않고 현장에서 봉합 사 물자를 두고.</li>
	<li>밀접 하 게 접목의 유출을 방지 하기 위하여 주요 절 개 봉합. 참고: 뉼 제자리에유지.</li>
</ol>6. SVF 농축 지방 이식의 응용
참고: 후 처리의 약 1.5 h, 처리 된 SVF의 5 mL는 추가 사용에 대 한 준비.
<ol><li>10 mL 통신 주사기에서 SVF의 5 mL 발음</li>
	<li>같은 방식으로, 반대 10 mL 주사기에 sedimented 지질 분수의 2 mL 발음.</li>
	<li>SVF의 5 mL 혼합 sedimented 지질 분수의 2 mL와 함께 한 주사기의 플런저를 후퇴 그리고 때까지 충분 한 혼합은 통신, 반대 주사기의 플런저를 잡아당기는.</li>
	<li>SVF 농축 지방 이식 2 ~ 4 10 mL 주사기에 동등 하 게 분할 한다.</li>
	<li>배포는 준비 된 SVF 농축 지방 이식 한 신경 주위에 동등 하 게 다른 무딘 뉼에 주사기를 연결 하 여 그 루터 기. 참고: 적용 하기 전에 이식, 확인는 뉼 올바른 위치에서 보호 되는 뉼 지방 이식 적용 하는 동안 탈 구 하지 않도록 주의 하십시오.</li>
	<li>뉼을 신중 하 게 제거 합니다.</li>
	<li>다음, 작은 빵 꾸 절 steri-스트립과 테이프.</li>
	<li>부 목에 본질적인 플러스 (60-70 °에 근육이 수축 하는 손바닥 (MCP) 관절, 완전히 골 (IP) 관절, 엄지 주먹 프로젝션에서 25 °의 등 굴곡에 손목) 위치를 적용 하 여 손을 무력화. 신경의 neurolysis를 수행 하는 경우에 없는 부 목 필요 하 고 팔과 손목은 10 일 동안 붕대.</li>
</ol>7. 수술 후 환자 처리
<ol><li>환자는 마 취 후 회복 단위 수술 후, 전송 하 고 병 동에 충분 한 모니터링 허용 합니다.</li>
	<li>수술 후 10 일 동안 손목 고정 계속.</li>
	<li>48 h 후 수술 후 붕대의 첫 번째 변화를 수행 하 고 정기적으로 (즉 두 번째 매일 방전까지) 계속.</li>
	<li>Postoperatively는 봉합 12-14 일 제거 합니다.</li>
	<li>2, 6, 12, 후속 동안 통증과 36 개월의 임상 평가 수행 합니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Mackinnon, S. E., Dellon, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+treatment+of+recurrent+dorsoradial+wrist+neuromas.">Results of treatment of recurrent dorsoradial wrist neuromas.</a> Ann Plast Surg. 19 (1), 54-61 (1987).</li><li>Hazari, A., Elliot, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+end-neuromas,+neuromas-in-continuity+and+scarred+nerves+of+the+digits+by+proximal+relocation.">Treatment of end-neuromas, neuromas-in-continuity and scarred nerves of the digits by proximal relocation.</a> J Hand Surg Br. 29 (4), 338-350 (2004).</li><li>Goldstein, S. A., Sturim, H. 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A., Mian, S., Kendzerska, T., French, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measures+of+adult+pain:+Visual+Analog+Scale+for+Pain+(VAS+Pain),+Numeric+Rating+Scale+for+Pain+(NRS+Pain),+McGill+Pain+Questionnaire+(MPQ),+Short-Form+McGill+Pain+Questionnaire+(SF-MPQ),+Chronic+Pain+Grade+Scale+(CPGS),+Short+Form-36+Bodily+Pain+Scale+(SF-36+BPS),+and+Measure+of+Intermittent+and+Constant+Osteoarthritis+Pain+(ICOAP).">Measures of adult pain: Visual Analog Scale for Pain (VAS Pain), Numeric Rating Scale for Pain (NRS Pain), McGill Pain Questionnaire (MPQ), Short-Form McGill Pain Questionnaire (SF-MPQ), Chronic Pain Grade Scale (CPGS), Short Form-36 Bodily Pain Scale (SF-36 BPS), and Measure of Intermittent and Constant Osteoarthritis Pain (ICOAP).</a> Arthritis Care Res (Hoboken). 63 Suppl. 63, S240-S252 (2011).</li><li>Stokvis, A., van der Avoort, D. J., van Neck, J. W., Hovius, S. E., Coert, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+management+of+neuroma+pain:+a+prospective+follow-up+study.">Surgical management of neuroma pain: a prospective follow-up study.</a> Pain. 151 (3), 862-869 (2010).</li><li>Kolle, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+autologous+fat+grafts+with+ex-vivo+expanded+adipose+tissue-derived+stem+cells+for+graft+survival:+a+randomised+placebo-controlled+trial.">Enrichment of autologous fat grafts with ex-vivo expanded adipose tissue-derived stem cells for graft survival: a randomised placebo-controlled trial.</a> Lancet. 382 (9898), 1113-1120 (2013).</li><li>Zhu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+regeneration+after+free+fat+transplantation:+promotion+by+stromal+vascular+fraction+cells.">Adipocyte regeneration after free fat transplantation: promotion by stromal vascular fraction cells.</a> Cell Transplant. 24 (1), 49-62 (2015).</li><li>Eto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+adipose+tissue-resident+hematopoietic+cell+populations+reveals+a+novel+macrophage+subpopulation+with+CD34+expression+and+mesenchymal+multipotency.">Characterization of human adipose tissue-resident hematopoietic cell populations reveals a novel macrophage subpopulation with CD34 expression and mesenchymal multipotency.</a> Stem Cells Dev. 22 (6), 985-997 (2013).</li><li>Premaratne, G. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+vascular+fraction+transplantation+as+an+alternative+therapy+for+ischemic+heart+failure:+anti-inflammatory+role.">Stromal vascular fraction transplantation as an alternative therapy for ischemic heart failure: anti-inflammatory role.</a> J Cardiothorac Surg. 6, 43 (2011).</li><li>Paik, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+in+Fat+Grafting:+Part+V.+Cell-Assisted+Lipotransfer+to+Enhance+Fat+Graft+Retention+Is+Dose+Dependent.">Studies in Fat Grafting: Part V. Cell-Assisted Lipotransfer to Enhance Fat Graft Retention Is Dose Dependent.</a> Plast Reconstr Surg. 136 (1), 67-75 (2015).</li></ol>

저자는 공개 없다.

현재 연구의 목적은 차근차근 증상 끝-neuromata에 대 한 새로운 치료로 지방 이식 SVF 농축의 기술적인 측면을 설명 하는 것입니다.
Neuromata는 SBRN의 3312의 수술 성공률와 연결 됩니다. Vaienti 외. 초기 후속에서 유리한 결과의 시리즈를 발표 perineural 지방 이식 (PFG) 상 지5의 고통 스러운 neuromata 8 환자에 있는 SVF를 ...

관리는 SBRN의 증상 끝-neuromata의 다양 한 기존 수술 치료와 함께 도전 남아 있습니다. 주로, 고 싱 경종 excised 고 나머지 신경 그 루터 기 근육1,2,3뼈 또는 혈관4같은 이웃 구조에 이전. 이것은 밖으로 돋 아 재생 신경 성숙기의 끝-장기의 분위기를 흉내 낸 하 여 방지 하기 위해 간주 됩니다. 그러나, 아무도 이러한 기술을 입증 우수한, 통증 재발 및 부족 한 통증 감소의 높은 속도 자주 관찰 되었다.
최근, 나머지 신경 그 루터 기 주위 지방 이식 유망한 결과 굴복 하 고 상 지5의 고통 스러운 끝-neuromata에 대 한 새로운 치료 옵션으로 주 창 했다. 지속적인 움직임을 방지 하 고 통증을 가볍게 하는 기계적 장벽 역할 외 지방 이식의 유리한 측면은 오히려 세포 수준에 기인 합니다. 인간 지방 조직 preadipocytes, 돛대 세포, pericytes, 내 피 세포, 혈관 평활 근 세포, 섬유 아 세포를 포함 한 여러 세포 유형, 포함 하 고 지방6조 혈 줄기 세포 함께 줄기 세포 (줄기)를 파생. 이 다른 유형의 세포 인구 라고 Adipose-Derived 재생 셀 (ADRCs) 또는 SVF, 고 절연 시스템은 lipoaspirate에서 얻어질 수 있다 ( 재료의 표참조) 및 적용 된 효소 시 약 (참조 테이블의 재료 )7. 행동의 정확한 메커니즘은 아직 완전히 이해 하 고; 그러나, SVF 개선 신생, immunomodulation, 차별화, 및 세포 외 매트릭스8의 분 비와 연결 되었습니다.
최근 연구 결과 밝혀 추가 SVF 없이 지방 이식 12 개월 후 통증 재발 집중된 세포 인구는 SVF의 재흡수 률을 줄이기 위해 고 지방 이식의 재생 잠재력 증가를 목적으로 지방 이식에 추가 됩니다. 5. 또한, 생물 학적 행동 또한 무질서 axonal 돋 아 그 루터 기9 와 신경 함정에 발생할 수 있습니다 후속 흉터 adherences 줄임으로써 신경 자체에 유익한 효과 제공.
SBRN의 증상 끝-neuromata의 치료에 대 한 새로운 수술 옵션이 되었습니다 SVF 농축 뚱뚱한 접목을 설명 하기 위해 첫 번째 임상 연구 최근10출판. 일반적으로, 기술은 사고 또는 의원 성 신경 손상 후 발생 하는 모든 싱 경종에 적용할 수 있습니다. 현재 후속 연구의 목적은 조직적으로이 절차의 기술적 측면을 설명입니다.

<table><tbody><tr><td>Cytori Celution System</td><td>Cytori</td><td></td><td>isolation system</td></tr><tr><td>Celase</td><td>Cytori</td><td></td><td>enyzme reagent</td></tr><tr><td>liposuction system</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>tumescent solution (500 ml Lactated Ringers, 20 ml of 1% lidocaine and 1 mg epinephrine)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>14-gauge infiltrator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3 mm-collecting cannula (15, 26, 32 cm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>60 mL Tommey syringes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>mosquito clamp</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Toomey syringe stand</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 cannulas (fat injecting cannulas 1.5 mm, syringe NO.2, 90 mm)</td><td>Chalybs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 mL syringes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>connecting device for syringes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>#11- and #15-blade scalpel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>stevens scissors</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pins pincette</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>bipolar electrocautery</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>suture material</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>adhesive dressing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>binocular loupes magnifier glasses (2.5-3.5x)</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Statistical Package for Social Sciences, version 22</td><td>IBM</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

stromal vascular fraction-enriched fat grafting for the treatment of symptomatic end-neuromata

이 연구의 목적은 조직적으로 설명 하 고 실질 혈관 분수 (SVF)의 중요 한 단계를 강조 했다-특히의 증상 끝-neuromata 말 초 감각 신경, 그리고이 연구에서의 새로운 치료로 지방 이식 농축 (SBRN) 광선 신경의 표면 분기 합니다. 다양 한 기존 치료에도 불구 하 고 영구적인 수술 후 통증과 일반적인 통증 재발 지금도 매우 일반적인, 평가 절차의 독립. 싱 경종 microsurgically 삭제에 따라 표준화 된 프로토콜입니다. 근육 이나 뼈, 같은 해 부 구조, 이웃에서 재생 신경 그 루터 기 이전 대신 지방 이식 적용된 perifocally 이며 기계적 장벽 역할. 지방 재흡수 속도 감소 하 고는 이식의 재생 잠재력을 향상, 농축된 SVF는 접목에 통합 된다. SVF는 특정 상업적인 절연 시스템에 의해 lipoaspirate의 효소 및 정비사 분리에 의해 피하 지방에서 격리 됩니다. SVF 농축 지방 이식 기계적 장벽 및 개선 신생, 염증, 섬유 증 등 세포 수준에서 다양 한 생물 학적 효과 제공 합니다. 기계와 생물 학적 효과를 신경 재생 하는 동안 신경 그 루터 기의 무질서 axonal 파생물을 줄이고 따라서 고통 스러운 끝-neuromata의 재발을 방지 도움이.

데이터는 통계 소프트웨어를 사용 하 여 및 ± 표준 편차를 의미 하는으로 분석 되었다. Kolmogorov 스미 르노 프 테스트 연구 인구의 비패라메트릭 분포 확인에 적용 된 고 부정적인 경험적 분포를 확인 합니다. 연구 인구의 비패라메트릭 성격에 따라, Wilcoxon의 테스트 관련된 샘플에 대 한 수술 전 및 수술 후 결과 비교 하 고용 되었다. 통계적 의미는 p-값에 간주 되었다 0.05 ?...

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Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

Stromal 혈관 분수 농축 지방 이식 증상 끝-neuromata의 치료에 대 한

연구의 목적은 stromal 혈관 분수 (SVF)의 기술적 절차를 설명 하기 위해-증상 끝-neuromata의 소설 치료로 지방 이식 농축. 이 기술은 기계적 장벽 및 처리 및 집중 SVF에 의해 세포 수준에서 생물 학적 행동의 이점이 있습니다.

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

stromal-vascular-fraction-enriched-fat-grafting-for-treatment

Research

JoVE Journal

Medicine

7.6K 조회수.  University Hospital Zurich. 연구의 목적은 stromal 혈관 분수 (SVF)의 기술적 절차를 설명 하기 위해-증상 끝-neuromata의 소설 치료로 지방 이식 농축. 이 기술은 기계적 장벽 및 처리 및 집중 SVF에 의해 세포 수준에서 생물 학적 행동의 이점이 있습니다.

비디오: Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper vessel development and homeostasis. However, studies on endothelial lineage hierarchy remain elusive due to the lack of tools to gain access as well as to directly evaluate their behavior in vivo. To address this shortcoming, a new tissue model to study angiogenesis using the mammary fat pad has been developed. The mammary gland develops mostly in the postnatal stages, including puberty and pregnancy, during which robust epithelium proliferation is accompanied by extensive vascular remodeling. Mammary fat pads provide space, matrix, and rich angiogenic stimuli from the growing mammary epithelium. Furthermore, mammary fat pads are located outside the peritoneal cavity, making them an easily accessible grafting site for assessing the angiogenic potential of exogenous cells. This work also describes an efficient tracing approach using fluorescent reporter mice to specifically label the targeted population of vascular endothelial stem cells (VESCs) in vivo. This lineage tracing method, coupled with subsequent tissue whole-mount microscopy, enable the direct visualization of targeted cells and their descendants, through which the proliferation capability can be quantified and the differentiation commitment can be fate-mapped. Using these methods, a population of bipotent protein C receptor (Procr) expressing VESCs has recently been identified in multiple vascular systems. Procr+ VESCs, giving rise to both new ECs and pericytes, actively contribute to angiogenesis during development, homeostasis, and injury repair. Overall, this manuscript describes a new mammary fat pad transplantation and in vivo lineage tracing techniques that can be used to evaluate the stem cell properties of VESCs.

This work demonstrates a novel approach to assess the proliferation, differentiation, and vessel-forming potential of vascular endothelial stem cells (VESCs) through mammary fat pad transplantation followed by whole-mount tissue preparation for microscopic observation. A lineage tracing strategy to investigate the behavior of VESCs in vivo is also presented.

혈관 내피 줄기 세포의 혈관 생성을 시각화하기위한 유방 팻 패드 이식 기술

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

연구

발생학

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma and devastating tissue loss. Despite favorable and highly encouraging early and intermediate functional outcomes, rejection of the highly immunogenic skin component of a VCA and potential adverse effects of chronic multi-drug immunosuppression continue to hamper widespread clinical application of VCA. Therefore, research in this novel field needs to focus on translational studies related to unique immunologic features of VCA and to develop novel immunomodulatory strategies for immunomodulation and tolerance induction following VCA without the need for long term immunosuppression.
This article describes a reliable and reproducible translational large animal model of VCA that is comprised of an osteomyocutaneous flap in a MHC-defined swine heterotopic hind limb allotransplantation. Briefly, a well-vascularized skin paddle is identified in the anteromedial thigh region using near infrared laser angiography. The underlying muscles, knee joint, distal femur, and proximal tibia are harvested on a femoral vascular pedicle. This allograft can be considered both a VCA and a vascularized bone marrow transplant with its unique immune privileged features. The graft is transplanted to a subcutaneous abdominal pocket in the recipient animal with a skin component exteriorized to the dorsolateral region for immune monitoring.
Three surgical teams work simultaneously in a well-coordinated manner to reduce anesthesia and ischemia times, thereby improving efficiency of this model and reducing potential confounders in experimental protocols. This model serves as the groundwork for future therapeutic strategies aimed at reducing and potentially eliminating the need for chronic multi-drug immunosuppression in VCA.

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vascularized Composite Allotransplantations (VCA) have become a clinical reality. However, broad clinical application of VCA is limited by chronic multi-drug immunosuppression. The authors present a reliable and reproducible large animal model to translate novel immunomodulatory strategies that can minimize or potentially eliminate the need of immunosuppression in VCA.

번역 상 혈관을 조성한 복합 동종 이식 (VCA) 연구를위한 수정 된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

의학

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

마이크로 컴퓨터 단층 촬영과 누드 마우스에 인간의 지방 주입의 생존 능력의 평가

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

A Patient-Derived Xenograft Model for Venous Malformation

Venous malformation (VM) is a vascular anomaly that arises from impaired development of the venous network resulting in dilated and often dysfunctional veins. The purpose of this article is to carefully describe the establishment of a murine xenograft model that mimics human VM and is able to reflect patient heterogeneity. Hyper-activating non-inherited (somatic) TEK (TIE2) and PIK3CA mutations in endothelial cells (EC) have been identified as the main drivers of pathological vessel enlargement in VM. The following protocol describes the isolation, purification and expansion of patient-derived EC expressing mutant TIE2 and/or PIK3CA. These EC are injected subcutaneously into the back of immunodeficient athymic mice to generate ectatic vascular channels. Lesions generated with TIE2 or PIK3CA-mutant EC are visibly vascularized within 7&#8210;9 days of injection and recapitulate histopathological features of VM patient tissue. This VM xenograft model provides a reliable platform to investigate the cellular and molecular mechanisms driving VM formation and expansion. In addition, this model will be instrumental for translational studies testing the efficacy of novel drug candidates in preventing the abnormal vessel enlargement seen in human VM.

We present a detailed protocol to generate a murine xenograft model of venous malformation. This model is based on the subcutaneous injection of patient-derived endothelial cells containing hyper-activating TIE2 and/or PIK3CA gene mutations. Xenograft lesions closely recapitulate the histopathological features of VM patient tissue.

정맥 기형에 대한 환자 유래 제노이식 모델

Venous malformation (VM) is a vascular anomaly that arises from impaired development of the venous network resulting in dilated and often dysfunctional ...

Isolation of Murine Adipose Tissue-derived Microvascular Fragments as Vascularization Units for Tissue Engineering

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several angiogenic and prevascularization strategies have been established. However, most cell-based approaches include time-consuming in vitro steps for the formation of a microvascular network. Hence, they are not suitable for intraoperative one-step procedures. Adipose tissue-derived microvascular fragments (ad-MVF) represent promising vascularization units. They can be easily isolated from fat tissue and exhibit a functional microvessel morphology. Moreover, they rapidly reassemble into new microvascular networks after in vivo implantation. In addition, ad-MVF have been shown to induce lymphangiogenesis. Finally, they are a rich source of mesenchymal stem cells, which may further contribute to their high vascularization potential. In previous studies we have demonstrated the remarkable vascularization capacity of ad-MVF in engineered bone and skin substitutes. In the present study, we report on a standardized protocol for the enzymatic isolation of ad-MVF from murine fat tissue.

We present a protocol to isolate adipose tissue-derived microvascular fragments that represent promising vascularization units. They can be rapidly isolated, do not require in vitro processing and, thus, may be used for one-step prevascularization in different fields of tissue engineering.

조직 공학 혈관 신생 단위로 쥐 지방 조직 유래 미세 혈관 조각의 분리

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several ...

생체공학

Transplantation of Schwann Cells Inside PVDF-TrFE Conduits to Bridge Transected Rat Spinal Cord Stumps to Promote Axon Regeneration Across the Gap

Among various models for spinal cord injury in rats, the contusion model is the most often used because it is the most common type of human spinal cord injury. The complete transection model, although not as clinically relevant as the contusion model, is the most rigorous method to evaluate axon regeneration. In the contusion model, it is difficult to distinguish regenerated from sprouted or spared axons due to the presence of remaining tissue post injury. In the complete transection model, a bridging method is necessary to fill the gap and create continuity from the rostral to the caudal stumps in order to evaluate the effectiveness of the treatments. A reliable bridging surgery is essential to test outcome measures by reducing the variability due to the surgical method. The protocols described here are used to prepare Schwann cells (SCs) and conduits prior to transplantation, complete transection of the spinal cord at thoracic level 8 (T8), insert the conduit, and transplant SCs into the conduit. This approach also uses in situ gelling of an injectable basement membrane matrix with SC transplantation that allows improved axon growth across the rostral and caudal interfaces with the host tissue.

This article describes a technique to insert a hollow conduit between the spinal cord stumps after complete transection and fill with Schwann cells (SCs) and injectable basement membrane matrix in order to bridge and promote axon regeneration across the gap.

PVDF TrFE 도관 격차에 걸쳐 축 삭 재생을 촉진 하 Transected 쥐 척수 젊고 아름 다운 여자를 다리 안에 이식 Schwann 세포

Among various models for spinal cord injury in rats, the contusion model is the most often used because it is the most common type of human spinal cord ...

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of cell products using collagenase. Here, we present a protocol to generate an injectable mixture of SVF cells and native extracellular matrix from adipose tissue by a purely mechanical process. Lipoaspirates are put into a centrifuge and spun at 1,200 x g for 3 min. The middle layer is collected and separated into two layers (high-density fat at the bottom and low-density fat on the top). The upper layer is directly emulsified by intersyringe shifting, at a rate of 20 mL/s for 6x to 8x. The emulsified fat is centrifuged at 2,000 x g for 3 min, and the sticky substance under the oil layer is collected and defined as the extracellular matrix (ECM)/SVF-gel. The oil on the top layer is collected. Approximately 5 mL of oil is added to 15 mL of high-density fat and emulsified by intersyringe shifting, at a rate of 20 mL/s for 6x to 8x. The emulsified fat is centrifuged at 2,000 x g for 3 min, and the sticky substance is also ECM/SVF-gel. After the transplantation of the ECM/SVF-gel into nude mice, the graft is harvested and assessed by histologic examination. The result shows that this product has the potential to regenerate into normal adipose tissue. This procedure is a simple, effective mechanical dissociation procedure to condense the SVF cells embedded in their natural supportive ECM for regenerative purposes.

Here, we present a protocol to obtain stromal vascular fraction from adipose tissue through a series of mechanical processes, which include emulsification and multiple centrifugations.

재생 치료를 위한 Lipoaspirates의 기계 Micronization

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular disease is the development of ischemia. In severe cases, patients can develop critical limb ischemia in which they experience constant pain and an increased risk of limb amputation. Current therapies for peripheral ischemia include bypass surgery or percutaneous interventions such as angioplasty with stenting or atherectomy to restore blood flow. However, these treatments often fail to the continued progression of vascular disease or restenosis or are contraindicated due to the overall poor health of the patient. A promising potential approach to treat peripheral ischemia involves the induction of therapeutic neovascularization to allow the patient to develop collateral vasculature. This newly formed network alleviates peripheral ischemia by restoring perfusion to the affected area. The most frequently employed preclinical model for peripheral ischemia utilizes the creation of hind limb ischemia in healthy rabbits through femoral artery ligation. In the past, however, there has been a strong disconnect between the success of preclinical studies and the failure of clinical trials regarding treatments for peripheral ischemia. Healthy animals typically have robust vascular regeneration in response to surgically induced ischemia, in contrast to the reduced vascularity and regeneration in patients with chronic peripheral ischemia. Here, we describe an optimized animal model for peripheral ischemia in rabbits that includes hyperlipidemia and diabetes. This model has reduced collateral formation and blood pressure recovery in comparison to a model with a higher cholesterol diet. Thus, the model may provide better correlation with human patients with compromised angiogenesis from the common co-morbidities that accompany peripheral vascular disease.

We describe a surgical procedure used to induce peripheral ischemia in rabbits with hyperlipidemia and diabetes. This surgery acts as a preclinical model for conditions experienced in peripheral artery disease in patients. Angiography is also described as a means to measure the extent of introduced ischemia and recovery of perfusion.

당뇨병 토끼에서의 뒷 사지의 전 임상 모델

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

<meta charset="utf8"></head><body>재생 의학을 위한 Fibrin Hydrogel의 기계적 기질 혈관 분획

The Combination of Mechanically Isolated Stromal Vascular Fraction and Fibrin Hydrogel: A Processing Protocol

The regenerative potential of adipose-derived stromal cells (ASCs) has gained significant attention in regenerative and translational research. In the past, the extraction of these cells from adipose tissue required a multistep enzyme-based process, resulting in a heterogenous cell mix consisting of ACSs and other cells, which are jointly termed the stromal vascular fraction (SVF). More recently introduced mechanical SVF (mSVF) isolation protocols are less time-consuming and bypass regulatory concerns. We recently proposed a protocol that generates mSVF rich in stromal cells based on a combination of emulsification and centrifugation. One current issue in mSVF application for wound therapy application is the lack of a scaffold providing protection from mechanical manipulation and desiccation. Fibrin hydrogels have been shown to be a useful adjunct in cell transfer for wound healing purposes in the past. In the work herein, we delineate the preparation steps of an mSVF-fibrin hydrogel construct as a novel approach for translational research and clinical application.

<meta charset="utf8"></head><body>저자 스포트라이트: 상처 치유를 위한 지방 유래 기질 혈관 분획의 잠재력 탐구

Mechanically isolated stromal vascular fraction (SVF) in combination with a fibrin hydrogel offers an easy and efficient carrier for viable adipose-derived stromal cells for various indications, including tissue engineering and or wound healing purposes. Here, we present the preparation of a mechanical SVF (mSVF)-fibrin hydrogel construct for translational research and clinical application.

기계적으로 분리된 Stromal Vascular Fraction과 Fibrin Hydrogel의 조합: 처리 프로토콜

The regenerative potential of adipose-derived stromal cells (ASCs) has gained significant attention in regenerative and translational research. In the ...

Stromal 혈관 분수 농축 지방 이식 증상 끝-neuromata의 치료에 대 한

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혈관 내피 줄기 세포의 혈관 생성을 시각화하기위한 유방 팻 패드 이식 기술

번역 상 혈관을 조성한 복합 동종 이식 (VCA) 연구를위한 수정 된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델

마이크로 컴퓨터 단층 촬영과 누드 마우스에 인간의 지방 주입의 생존 능력의 평가

정맥 기형에 대한 환자 유래 제노이식 모델

조직 공학 혈관 신생 단위로 쥐 지방 조직 유래 미세 혈관 조각의 분리

PVDF TrFE 도관 격차에 걸쳐 축 삭 재생을 촉진 하 Transected 쥐 척수 젊고 아름 다운 여자를 다리 안에 이식 Schwann 세포

재생 치료를 위한 Lipoaspirates의 기계 Micronization

당뇨병 토끼에서의 뒷 사지의 전 임상 모델

기계적으로 분리된 Stromal Vascular Fraction과 Fibrin Hydrogel의 조합: 처리 프로토콜

기계적으로 분리된 Stromal Vascular Fraction과 Fibrin Hydrogel의 조합: 처리 프로토콜