Linfedema é uma condição crônica sem cura. Afeta um terço das pacientes que fizeram uma cirurgia de linfonodo axilar e radiação no tratamento do câncer de mama. Ter um modelo animal válido facilita a compreensão do mecanismo e desenvolvimento de novas estratégias de tratamento.
O modelo de cauda do rato de linfedema é confiável e reprodutível com o início rápido. Exibe mudanças histológicas consistentes com linfedema humano. Demonstrando o procedimento será o Dr. Ganesh Mohan, um pós-doutorado do meu laboratório.
Para começar, posicione o rato sedado de oito semanas de idade severamente e prepare a cauda com álcool isopropílico de 70%. Use uma pinça para medir o diâmetro da cauda em incrementos de cinco milímetros a partir de 20 milímetros da base da cauda. Marque uma excisão circunferencial de três milímetros na cauda a 20 milímetros da base.
Sob ampliação microscópica cirúrgica, realize uma meticulosa excisão de pele de três milímetros de espessura total deixando toda a vasculatura subjacente intacta. Incisar a marca circunferencial superior primeiro através da dermis seguido de uma incisão de espessura total circunferencial três milímetros distal à primeira incisão. Faça uma incisão vertical de espessura total perpendicular para conectar as duas incisões, em seguida, use uma picape fina dentada para agarrar uma borda de ponta e dissecar profundamente dentro do plano avascular para a derme e superficial à veia adventitia com micro tesoura.
Injete 0,1 mililitro de 1%isosulfan azul subcutâneamente proximal na ponta da cauda. Identifique os dois canais linfáticos que aparecem azuis devido à injeção adjacente às veias laterais da cauda. Transecte cuidadosamente os linfáticos, dissecando um plano entre a veia lateral e o linfático com uma tesoura microcirúrgica reto.
Passe a ponta de uma lâmina de tesoura entre o vaso linfático e a veia lateral e feche as lâminas para transectar o vaso linfático. Quando terminar, vista a ferida da cauda com uma endereçamento claro estéril. Administre indocyanina verde 0,1 mililitro subcutâneamente na cauda do rato distal perto da ponta.
Diminua as luzes da sala e coloque perto da angiografia a laser infravermelha na configuração de buffering e realize imagens ao vivo. Após a administração do azul isosulfan na ponta da cauda, os linfáticos exibiram a cor azul. Os linfáticos foram interrompidos enquanto as veias laterais adjacentes foram preservadas.
O inchaço progressivo e o linfedema persistente sustentado na cauda do rato após a indução de linfedema é mostrado aqui. O volume da cauda do rato calculado por uma equação de cone truncado, atingiu o pico na semana quatro e platues para a semana seis seguido de melhora gradual que foi sustentada até a semana 15. Imagens de contraste de manchas laser de alta resolução foram feitas para confirmar a perfusão da cauda do rato no modelo da cauda de linfedema mostrando veias laterais feridas e veias laterais intactas para avaliação da patência vasculatura da cauda.
A linfígiografia a laser infravermelha demonstrou linfáticos intactos pré-operatórios e nenhum trânsito de ICG além do local cirúrgico pós-operatório, confirmando assim que o inchaço foi causado por disfunção linfática. A eficiência da entrega genética de cargas usando a tecnologia de nanotransfesão tecidual foi demonstrada através da entrega de DNA rotulado de fluoresceína na cauda murina. O uso de adaptações para o modelo de linfedema da cauda do camundongo e icg perto da angiografia a laser infravermelha é um modelo animal clinicamente traduzível e emocionante com implicações no tratamento.
