No modelo de filamento descrito aqui, a restauração completa do fluxo sanguíneo e seu registro, são requisitos para garantir um influxo produtível entre camundongos, especialmente em estudos de derrame translacional. Este modelo tem duas principais vantagens em comparação com outros modelos de traçado descritos anteriormente. Não é necessária craniotomia, e uma re-perfusão completa do vaso sanguíneo é alcançada.
O modelo de filamento é uma intervenção cirúrgica complexa envolvendo a manipulação de processos de diferentes artérias. A visualização e explicação de tudo isso são pequenos, mas importantes passos, pode acelerar o período de aprendizagem dos neurocirurgiões. Conecte a manta de calor para manter a temperatura da área de operação e a temperatura corporal do rato durante a anestesia a 37 graus Celsius.
Prepare tesouras e fórceps autoclave, solução de 70% etanol e pomada para o olho dexpanthenol, e mantenha vários pedaços de algodão e sutura de poliéster trançado Cinco O, pronto para usar. Prepare uma solução salina de 0,9% em uma seringa de um mililitro sem agulha para manter o local de incisão hidratado. Prepare um suporte para a sonda Doppler laser cortando a ponta de uma ponta de pipeta de 10 microliter.
Uma vez que o mouse esteja completamente anestesiado, coloque-o em uma posição propensa na área de operação. Insira suavemente a sonda retal para monitorar a temperatura durante os procedimentos cirúrgicos. Depois de desinfetar o local cirúrgico, corte este couro cabeludo entre a orelha esquerda e o olho para expor o osso do crânio.
Em seguida, corte e retire o músculo temporal para visualizar as múltiplas artérias cerebrais ou MCA sob o crânio. Fixar a parte externa da ponta segurando a sonda Doppler laser ou fibra em cima do MCA esquerdo com cola e feche a pele para que a pele também esteja colada. Aplique de duas a três gotas de cola endurecedora para acelerar o processo.
Certifique-se de que a fibra do doppler laser não está colada e pode ser facilmente removida do suporte da ponta a qualquer momento. Vire o mouse para a posição supina, em seguida, coloque o focinho no cone de anestesia e fixar as patas com fita. Desinfete a pele e o cabelo ao redor do peito e faça uma incisão média de dois centímetros de comprimento no pescoço.
Use fórceps para puxar a glândula submandibular da pele e o músculo estemastoide separados. Use retráteis para expor o campo cirúrgico e encontre a artéria carótida comum esquerda ou CCA. Disseque a CCA livre de tecido conjuntivo e nervos circundantes sem prejudicar o nervo vagal e realize uma ligadura transitória antes da bifurcação.
Disseque a artéria carótida externa ou ECA e amarre um nó permanente na parte visível mais distal. Coloque outra sutura sob o ECA e perto da bifurcação, em seguida, prepare um nó solto para ser usado mais tarde. Disseca a artéria carótida interna ou ICA e coloque um clipe microvascular sobre ele cerca de cinco milímetros sobre a bifurcação.
Certifique-se de não danificar o nervo vagal. Em seguida, corte um pequeno furo no ECA entre as ligaduras apertadas e soltas, garantindo não cortar todo o ECA. Introduza o filamento e avance-o em direção à CCA.
Aperte a ligadura solta no ECA em torno do lúmen para fixar momentaneamente o filamento nessa posição. Removendo o clipe microvascular e evitar sangramento. Após a remoção do clipe microvascular, insira o filamento através do ICA até que a origem do MCA seja atingida.
Fixar o filamento nesta posição apertando ainda mais o nó em torno do TCE. Registo do doppler laser antes e depois da inserção do filamento. Remova o retrátil e realoque o músculo estemastoide na glândula submandibular antes de suturar a ferida.
Remova a sonda Doppler laser e coloque o animal em uma câmara de recuperação a 37 graus Celsius durante uma hora. Coloque o mouse em uma posição propensa na área de operação com seu focinho na máscara de anestesia e, em seguida, conserte as patas do animal com fita adesiva. Insira a sonda Doppler laser no suporte da sonda.
Remova a sutura da ferida e use fórceps para puxar a pele, a glândula submandibular e o músculo estemastoide separados. Use retráteis para expor o campo cirúrgico. Solte a sutura ECA que aperta o filamento e puxe suavemente o filamento.
Evite danificar o revestimento de borracha de silicone do filamento durante a remoção. Regisso laser Doppler valores antes e depois da remoção do filamento. Amarre firmemente a sutura do ECA e confirme o aumento do fluxo sanguíneo cerebral no dispositivo Laser Doppler.
Abra a ligadura transitória antes da bifurcação da CCA para restaurar o fluxo sanguíneo completo. Remova o retrátil e realoque o músculo estemastoide na glândula submandibular antes de suturar a ferida. Em seguida, coloque o animal em uma câmara de recuperação a 37 graus Celsius por uma hora para se recuperar da anestesia.
Após a recuperação, os ratos retornem suas gaiolas em uma sala controlada pela temperatura e cuidem dos animais adicionando pelotas de alimentos molhados e hidrogel em pequenas placas de Petri no chão da gaiola e injetem analgesia a cada 12 horas até o terceiro dia após a cirurgia. Uma vez que o fluxo sanguíneo na CCA é restaurado após a remoção do filamento, ocorre a re-perfusão completa do cérebro, o que é semelhante à situação observada após o sucesso da trombectomia mecânica em pacientes humanos. Os animais de AVC apresentaram uma mudança significativa no escore neuro composto e focal, mas não no escore neuro geral quando comparados com animais falsos.
O volume de infarto recuperado também foi realizado usando manchas de cresol violeta de seções cerebrais coronárias 24 horas após a indução do derrame. A área da lesão inclui o somatosensorial e córtex motor, bem como estruturas sub-corticais, como o estriado. A média de volume de infarto foi de 61 a 62 milímetros quadrados, representando 48% do hemisfério cerebral efetivado.
É importante realizar uma dissecção adequada do CCA, TCE e RCA sem causar danos ao tecido adjacente, especialmente o nervo vago, para ter uma boa visualização de todas as estruturas, e ser capaz de inserir o filamento e ocluir a origem do MCA.
