Nosso laboratório estuda o impacto de poluentes ambientais, como metais pesados, na função hepática e em doenças relacionadas à produção de espécies reativas de oxigênio. Este protocolo visa medir quantitativamente os níveis de ROS em células usando uma sonda de fluorescência de diidroetídio. Este protocolo utiliza uma plataforma de triagem de alto conteúdo para medir quantitativamente os níveis intracelulares de espécies de ROS em linhagens hepatocelulares.
Medir o nível de ROS intercelular com precisão é de importância crítica no estudo toxicológico de alto rendimento, que é uma área chave de interesse em nosso laboratório. A fluorescência DHE é um método altamente específico para medir os níveis totais de ROS, particularmente visando o radical superóxido, estão dando-lhe uma vantagem significativa sobre outras sondas de fluorescência ROS comumente usadas. Além disso, esse protocolo oferece a capacidade única de medir o nível total de ROS celular em uma plataforma de alto rendimento.
Nosso protocolo é uma escolha robusta e reprodutível para caracterizar a produção total de ERO intracelular. Abordagens de alto rendimento para medir os níveis de ROS são úteis em uma variedade de estudos, como toxicologia, rastreamento de drogas e biologia do câncer, que serão nosso foco no futuro.
