Notre laboratoire étudie l’impact des polluants environnementaux, comme les métaux lourds, sur la fonction hépatique et les maladies liées à la production d’espèces réactives de l’oxygène. Ce protocole vise à mesurer quantitativement les niveaux de ROS dans les cellules à l’aide d’une sonde de fluorescence au dihydroéthidium. Ce protocole utilise une plateforme de criblage à haut contenu pour mesurer quantitativement les niveaux d’espèces de ROS intracellulaires dans les lignées hépatocellulaires.
La mesure précise du niveau de ROS intercellulaire est d’une importance cruciale dans l’étude toxicologique à haut débit, qui est un domaine d’intérêt clé dans notre laboratoire. La fluorescence DHE est une méthode très spécifique pour mesurer les niveaux totaux de ROS, ciblant en particulier le radical superoxyde, ce qui lui donne un avantage significatif sur les autres sondes de fluorescence ROS couramment utilisées. De plus, ce protocole offre la capacité unique de mesurer le niveau total de ROS cellulaires dans une plate-forme à haut débit.
Notre protocole est un choix robuste et reproductible pour caractériser la production totale de ROS intracellulaires. Les approches à haut débit pour mesurer les niveaux de ROS sont utiles dans diverses études, telles que la toxicologie, le dépistage de médicaments et la biologie du cancer, sur lesquelles nous nous concentrerons à l’avenir.
