Nossa pesquisa se concentra na fisiopatologia do transtorno do espectro do autismo, TEA. E, especificamente, analisamos os mecanismos moleculares envolvidos no TEA e o que causa as deficiências comportamentais. Juntos, eles envolverão tratamentos específicos relacionados ao TEA e melhorarão a vida dos indivíduos que sofrem de TEA.
Um dos desafios em nossa pesquisa é melhorar a pesquisa com comportamento relacionado ao TEA e comunicá-lo entre diferentes laboratórios. Há muita variação entre os diferentes laboratórios, como eles fazem as avaliações comportamentais, e isso é um grande problema para avançar os tratamentos no campo. Portanto, esperamos que, com nossos protocolos, ajudemos nesses avanços e na comunicação entre laboratórios em todo o mundo.
Ao otimizar e detalhar os protocolos de preparação e teste de três câmaras, estabelecemos uma estrutura consistente na qual os pesquisadores podem confiar para obter resultados confiáveis e reprodutíveis de modelos de camundongos com TEA. Essa padronização facilitará uma melhor cooperação e interpretação dos achados de diferentes laboratórios, levando a uma melhor compreensão do TEA e ao desenvolvimento de possíveis terapias. Nosso laboratório está interessado em explicar o processo de tradução específico do tipo de célula no comportamento semelhante ao autismo.
Além disso, também estudamos as potenciais aplicações terapêuticas em modelos de camundongos com TEA, como a metformina. Para começar, acenda as luzes fracas. Limpe a mesa e arrume a sala.
Prepare cada gaiola de teste com uma fina camada de cama fresca. Coloque uma a duas gaiolas sobre a mesa, separadas umas das outras e do ambiente da sala por antolhos de plástico branco. Em seguida, coloque uma câmera antes de cada gaiola para capturar o mouse de teste.
Cubra as gaiolas com um lençol de tecido e transfira todos os ratos para a sala para evitar estresse durante o processo de transferência. Assim que os mouses forem colocados na sala de testes, remova a folha. Antes do início do experimento, deixe-os na sala com luzes fracas por pelo menos 30 minutos.
No início do teste, anote o número de identificação do mouse e as informações do teste em um quadro branco. Coloque o mouse de teste na gaiola com roupa de cama limpa. Comece a gravar e coloque o mouse de teste na gaiola de teste.
Saia da sala durante a sessão de gravação de 20 minutos. Após 20 minutos, volte para a sala. Apresente o quadro branco para a câmera e pare a gravação.
Coloque o mouse de teste de volta na gaiola inicial e repita o experimento. Após os experimentos, devolva os ratos ao seu alojamento. O teste de auto-limpeza revelou aumento do tempo de limpeza em camundongos knockout para Eif4ebp2 em comparação com camundongos controle.
Os camundongos knockout Eif4ebp2 exibiram significativamente mais episódios de limpeza do que os camundongos controle. Para começar, limpe a mesa e acenda as luzes apagadas. Coloque o instrumento de plexiglass de três câmaras sobre a mesa cercado por persianas de privacidade.
Coloque uma câmera acima da cabeça, garantindo que todas as três câmaras estejam no quadro de gravação da câmera. Em seguida, transfira os ratos de teste e estranhos para a sala, cobrindo as gaiolas com uma folha de tecido durante o processo de transferência. Remova o lençol assim que estiverem na sala.
Deixe os ratos na sala por pelo menos 30 minutos com iluminação fraca antes do início do experimento. Mantenha as três câmaras vazias durante a habituação. Depois de selecionar um mouse de teste, escreva o número de identificação no quadro branco.
Coloque o mouse de teste no compartimento central enquanto as portas deslizantes permanecem fechadas. Abra as portas e comece a gravar para permitir que o mouse de teste explore as três câmaras vazias por 10 minutos. Após 10 minutos, volte para a sala.
Guie suavemente o mouse de teste para o compartimento central e feche as portas deslizantes. Exiba o quadro branco e pare a câmera. Posicione duas gaiolas de arame nas câmaras esquerda e direita diagonalmente opostas uma à outra nos cantos de cada câmara.
Meça a distância entre as gaiolas e as paredes da câmara. Certifique-se de que as gaiolas não estejam voltadas diretamente para as portas da câmara. Escolha um rato estranho e introduza-o em uma das gaiolas de arame, deixando a outra gaiola vazia.
Para iniciar o teste, pressione gravar e remova as duas portas deslizantes antes de sair da sala. Permita que o mouse de teste explore uma gaiola de arame vazia em uma câmara e uma gaiola contendo um camundongo estranho na outra câmara por 10 minutos. Após 10 minutos, volte para a sala.
Exiba o quadro branco para a câmera e encerre a gravação. Reintroduza o mouse no compartimento central e feche as portas de interconexão. Coloque um rato novo e nunca encontrado na gaiola de arame anteriormente vazia.
Comece a gravar e abra as portas de interconexão para permitir que o mouse de teste explore o aparelho por 10 minutos antes de sair da sala. O mouse de teste explorará duas gaiolas de arame, uma com o mouse S1 encontrado anteriormente e outra com o mouse S2 recém-introduzido, por 10 minutos. Após 10 minutos, volte para a sala.
Exiba o quadro branco para a câmera e conclua a gravação. Devolva todos os ratos para suas gaiolas domésticas. Limpe completamente as câmaras e gaiolas de arame usando um desinfetante sem odor e seque o aparelho antes do próximo experimento.
Após o teste, devolva os ratos ao alojamento. Os ratos preferiram interagir com S1 em vez de um novo objeto inanimado. Da mesma forma, os camundongos C57BL / 6J mostraram mais interesse em um S2 recém-introduzido do que em um S1 familiar.
