Melhorar a qualidade dos pulmões dos doadores é a chave para melhorar a taxa de sucesso do transplante de pulmão. Esperamos estabelecer um modelo animal simples e reprodutível para estudar o efeito da profusão pulmonar ex vivo, melhorando a qualidade dos pulmões dos doadores. A PPEV tem se mostrado uma medida técnica eficaz para melhorar a qualidade dos pulmões dos doadores, mas ainda existem muitos problemas na PPEV que precisam ser estudados e esclarecidos.
As condições de perfusão ainda precisam ser exploradas, e a capacidade da PPEV de atenuar a lesão de isquemia-reperfusão precisa ser verificada. Comparado com outras técnicas e modelos. nossa plataforma EVLP de rato é mais simples, operável, reprodutível, barata e muito mais econômica, o que fornece uma plataforma de pesquisa eficiente para pesquisas relacionadas à EVLP.
Deve-se prestar atenção ao impacto terapêutico da tecnologia de profusão pulmonar ex vivo nos pulmões de doadores marginais, que é semelhante ao DCD na China. Ao mesmo tempo, essa tecnologia pode fornecer uma plataforma para pesquisas futuras. Para começar, coloque o rato em decúbito dorsal anestesiado em uma mesa de operação e prenda-o com suturas.
Usando uma tesoura cirúrgica para roedores, faça uma incisão longitudinal de dois a três centímetros ao longo da linha média do pescoço na frente da traqueia. Corte a pele e disseque o tecido muscular na frente da traqueia para expor totalmente a traqueia. Em seguida, usando uma seringa, injete 1.000 unidades por quilograma de heparina na veia da cauda e aguarde cinco minutos para garantir a heparinização adequada do sangue.
Libere o espaço atrás da traqueia. Passe uma sutura 3-0 pela traqueia e dê um nó solto para uso posterior. Faça uma incisão em forma de V de 0,5 centímetros acima do nó na traqueia.
Insira um tubo traqueal de calibre 14 na traqueia. Aperte o nó de sutura para prender o tubo. Conecte o tubo traqueal ao ventilador.
Ligue o ventilador para iniciar a ventilação dos pulmões. Monitore os sinais vitais do rato a cada cinco minutos e interrompa a ventilação. Depois de confirmar a morte do rato após parada cardíaca usando os seguintes parâmetros, reinicie a ventilação mecânica no modo controlado por pressão e ventile por cinco minutos.
Clampeie a traqueia e descanse o pulmão do doador em temperatura ambiente por uma hora de tempo isquêmico quente. Em seguida, para colher o pulmão, ajuste a mesa de operação para uma posição de 45 graus de altura e pés inclinados baixos. Usando um barbeador de cabelo, remova o cabelo do meio do peito e do abdômen do rato.
Desinfete a área cirúrgica com iodo três vezes e cubra-a com uma toalha cirúrgica. Faça uma incisão longitudinal de seis a sete centímetros ao longo da linha média do abdômen com uma tesoura cirúrgica de roedores. Corte a pele, abra a parede abdominal para a cavidade abdominal e exponha os órgãos.
Usando uma seringa, injete 1.000 unidades por quilograma de heparina na veia cava inferior e aguarde cinco minutos para garantir a heparinização adequada do sangue. Em seguida, use uma tesoura para cortar a veia cava inferior do rato e iniciar a ventilação mecânica dos pulmões. Após a ventilação, use uma pinça para levantar o processo xifóide e faça uma incisão longitudinal ao longo do esterno de baixo para cima.
Use um espalhador de costelas para expor a cavidade torácica e, em seguida, remova o tecido do timo para expor o coração e os principais vasos sanguíneos abaixo dele. Libere a aorta do rato e o espaço atrás da artéria pulmonar. Passe uma sutura 3-0 pela artéria pulmonar e dê um nó solto para uso posterior.
Faça uma incisão em forma de V de dois a três milímetros na superfície anterior da via de saída do ventrículo direito. Insira uma cânula da artéria pulmonar na artéria pulmonar através da incisão e aperte a sutura pré-amarrada para prender a cânula. Corte a ponta do coração do rato e insira uma pinça hemostática no ventrículo esquerdo.
Interrompa as válvulas entre o ventrículo esquerdo e o átrio para garantir que a via de saída do átrio esquerdo esteja desobstruída. Em seguida, conecte a cânula da artéria pulmonar ao circuito de perfusão e use 15 mililitros de solução com baixo teor de potássio para lavar o sangue residual a uma taxa de fluxo de 0,6 a um mililitro por minuto. Coloque uma sutura atrás do coração e circunde o ventrículo.
Insira a cânula através da incisão no ventrículo esquerdo e aperte a sutura bonita para prender a cânula. Agora, corte a traqueia acima do tubo traqueal. Levante a traqueia e use uma tesoura para separar o tecido conjuntivo atrás da traqueia para baixo até o diafragma.
Em seguida, corte a veia cava inferior e a artéria pulmonar principal acima do diafragma. Separe o coração e os pulmões. Para manter os pulmões inflados, aperte imediatamente o terço inferior da traqueia no final da inalação.
Colete o coração e os pulmões e coloque-os em uma solução com baixo teor de potássio para preservação. Coloque o coração e os pulmões na posição designada de perfusão pulmonar ex vivo, ou circuito EVLP, e conecte a cânula do ventrículo esquerdo ao circuito de perfusão. Depois de montar a configuração da EVLP, encha a armadilha de bolhas com uma quantidade suficiente de solução de reparo de perfusão pulmonar para evitar que bolhas entrem nos pulmões.
Coloque a unidade cardiopulmonar na câmara do órgão e conecte-a ao dispositivo EVLP. Em seguida, ligue o ventilador e a bomba peristáltica. Inicie a perfusão pulmonar a 20% da taxa de fluxo alvo.
Depois de calcular a vazão alvo, aumente gradualmente a vazão para a vazão alvo dentro de uma hora. Defina o trocador de calor para 40 graus Celsius para manter uma temperatura pulmonar de 37.5 graus Celsius. Após 20 minutos de perfusão, remova a pinça endotraqueal e, usando os seguintes parâmetros, inicie a ventilação mecânica.
Em seguida, inicie o fluxo de gás hipóxico. Para manter a solução de perfusão, a pressão parcial de dióxido de carbono entrando na artéria pulmonar entre 35 e 45 milímetros simultaneamente durante a ventilação. Durante a perfusão, monitore constantemente a taxa de fluxo da solução de perfusão, a pressão arteriovenosa, a pressão de pico das vias aéreas e os parâmetros da função pulmonar.
Os níveis de oxigenação do enxerto pulmonar e a resistência vascular nos pulmões de doadores com DCD permaneceram estáveis, sem diferenças significativas ao longo do período de perfusão de quatro horas. A complacência dinâmica dos pulmões do doador de DCD diminuiu gradualmente durante o período de perfusão de quatro horas. Os níveis de glicose no perfusato dos pulmões do doador de DCD diminuíram constantemente durante a perfusão de quatro horas.
Os níveis de eletrólitos, incluindo sódio e potássio, permaneceram consistentes entre os grupos durante a perfusão de quatro horas. Um número significativamente maior de células apoptóticas foi detectado no grupo doador de DCD em comparação com outros grupos, com o grupo de preservação do frio mostrando mais células positivas do que o grupo EVLP. O escore de lesão pulmonar foi significativamente menor no grupo EVLP em comparação com os grupos de preservação estática fria e controle.
O espessamento da parede alveolar e a hemorragia alveolar foram proeminentes no grupo de preservação estática fria de quatro horas, enquanto a estrutura alveolar normal foi preservada no grupo EVLP.
