שיפור איכות הריאות של התורם הוא המפתח לשיפור אחוזי ההצלחה של השתלת ריאות. אנו מקווים לבסס מודל פשוט וניתן לשחזור של בעלי חיים כדי לחקור את ההשפעה של שפע ריאות ex vivo, ולשפר את איכות הריאות התורמות. EVLP הוכח כאמצעי טכניקה יעיל לשיפור איכות הריאות של התורם, אך עדיין ישנן בעיות רבות ב-EVLP שצריך לחקור ולהבהיר.
עדיין יש לחקור את תנאי הזלוף, ויש לאמת עוד יותר את היכולת של EVLP להחליש פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה. בהשוואה לטכניקות ודגמים אחרים. פלטפורמת RAT EVLP שלנו היא הפשוטה ביותר, ניתנת לתפעול, ניתנת לשחזור, זולה וחסכונית בהרבה, המספקת פלטפורמת מחקר יעילה למחקר הקשור ל-EVLP.
יש לשים לב להשפעה הטיפולית של טכנולוגיית שפע ריאות ex vivo על ריאות תורם שוליים, הדומה ל-DCD בסין. יחד עם זאת, טכנולוגיה זו יכולה לספק פלטפורמה למחקר עתידי. כדי להתחיל, הניחו את החולדה המורדמת על שולחן ניתוחים ואבטחו אותה בעזרת תפרים.
בעזרת מספריים כירורגיים של מכרסמים, בצע חתך אורכי של שניים עד שלושה סנטימטרים לאורך קו האמצע של הצוואר מול קנה הנשימה. חותכים את העור ומנתחים את רקמת השריר מול קנה הנשימה כדי לחשוף את קנה הנשימה במלואו. לאחר מכן, באמצעות מזרק, הזריק 1,000 יחידות לק"ג הפרין לווריד הזנב והמתן חמש דקות כדי להבטיח הפריניזציה מספקת של הדם.
שחרר את החלל שמאחורי קנה הנשימה. העבירו תפר 3-0 דרך קנה הנשימה וקשרו קשר רופף לשימוש מאוחר יותר. בצע חתך בצורת V של 0.5 סנטימטרים מעל הקשר בקנה הנשימה.
הכנס צינור קנה הנשימה בגודל 14 לקנה הנשימה. הדק את קשר התפר כדי לאבטח את הצינור. חבר את צינור קנה הנשימה למכונת ההנשמה.
הפעל את מכונת ההנשמה כדי להתחיל באוורור הריאות. עקוב אחר הסימנים החיוניים של החולדה כל חמש דקות והפסק את האוורור. לאחר אישור מוות של חולדה בעקבות דום לב באמצעות הפרמטרים הבאים, הפעל מחדש את ההנשמה המכנית במצב מבוקר לחץ ואוורור למשך חמש דקות.
מהדקים את קנה הנשימה ומניחים את ריאת התורם בטמפרטורת החדר למשך שעה אחת של זמן איסכמי חם. לאחר מכן, לקצירת הריאה, כוונן את שולחן הניתוחים למצב נוטה של 45 מעלות ורגליים נמוכות. בעזרת מכונת גילוח לשיער, הסר את השיער מאמצע החזה והבטן של החולדה.
יש לחטא את אזור הניתוח ביוד שלוש פעמים ולעטוף אותו במגבת כירורגית. בצע חתך אורכי של שישה עד שבעה סנטימטרים לאורך קו האמצע של הבטן בעזרת מספריים כירורגיים למכרסמים. חותכים את העור, פותחים את דופן הבטן לחלל הבטן וחושפים את האיברים.
בעזרת מזרק, הזריק 1,000 יחידות לק"ג הפרין לתוך הווריד הנבוב התחתון והמתן חמש דקות כדי להבטיח הפריניזציה מספקת של הדם. לאחר מכן, השתמש במספריים כדי לחתוך את הווריד הנבוב התחתון של החולדה ולהתחיל אוורור מכני של הריאות. לאחר האוורור, השתמש במלקחיים כדי להרים את תהליך ה-xiphoid ולבצע חתך אורכי לאורך עצם החזה מלמטה למעלה.
השתמש במפזר צלעות כדי לחשוף את חלל החזה, ולאחר מכן הסר את רקמת התימוס כדי לחשוף את הלב ואת כלי הדם העיקריים שמתחתיו. שחרר את אבי העורקים של החולדה ואת החלל שמאחורי עורק הריאה. העבירו תפר 3-0 דרך עורק הריאה וקשרו קשר רופף לשימוש מאוחר יותר.
בצע חתך בצורת V של שניים עד שלושה מילימטרים על המשטח הקדמי של דרכי היציאה של החדר הימני. הכנס צינורית עורק ריאתי לעורק הריאה דרך החתך והדק את התפר הקשור מראש כדי לאבטח את הצינורית. חותכים את קצה לב החולדה ומכניסים מלקחיים המוסטטיים לחדר השמאלי.
שבש את השסתומים בין החדר השמאלי לאטריום כדי להבטיח שדרכי היציאה של הפרוזדורים השמאלי נקיים. לאחר מכן, חבר את צינורית עורק הריאה למעגל הזלוף והשתמש ב -15 מיליליטר של תמיסת אשלגן נמוכה כדי לשטוף את שאריות הדם בקצב זרימה של 0.6 עד מיליליטר לדקה. הניחו תפר מאחורי הלב והקיפו את החדר.
הכנס את הצינורית דרך החתך בחדר השמאלי והדק את התפר היפה כדי לאבטח את הצינורית. כעת, חתכו את קנה הנשימה מעל צינור קנה הנשימה. הרם את קנה הנשימה והשתמש במספריים כדי להפריד את רקמת החיבור מאחורי קנה הנשימה כלפי מטה לסרעפת.
לאחר מכן, חתכו את הווריד הנבוב התחתון ואת עורק הריאה הראשי מעל הסרעפת. הפרד בין הלב לריאות. כדי לשמור על הריאות מנופחות, מהדק מיד את השליש התחתון של קנה הנשימה בסוף השאיפה.
אוספים את הלב והריאות ומניחים אותם בתמיסת אשלגן נמוכה לשימור. הנח את הלב והריאות במיקום המיועד לזלוף הריאות ex vivo, או במעגל EVLP, וחבר את צינורית החדר השמאלי למעגל הזלוף. לאחר הרכבת מערך ה-EVLP, מלאו את מלכודת הבועות בכמות מספקת של תמיסת תיקון זלוף ריאות כדי למנוע כניסת בועות לריאות.
הנח את יחידת הלב-ריאה בתא האיברים וחבר אותה למכשיר EVLP. לאחר מכן, הפעל את מכונת ההנשמה והמשאבה הפריסטלטית. התחל את זלוף הריאות ב-20% מקצב זרימת היעד.
לאחר חישוב קצב זרימת היעד, הגדל בהדרגה את קצב הזרימה לקצב זרימת היעד תוך שעה. הגדר את מחליף החום ל-40 מעלות צלזיוס כדי לשמור על טמפרטורת ריאות של 37.5 מעלות צלזיוס. לאחר 20 דקות של זלוף, הסר את המהדק האנדוטרכיאלי, ובאמצעות הפרמטרים הבאים, התחל אוורור מכני.
לאחר מכן, התחל את זרימת הגז ההיפוקסי. כדי לשמור על תמיסת הזילוף, לחץ חלקי של פחמן דו חמצני הנכנס לעורק הריאה בין 35 ל -45 מילימטרים בו זמנית במהלך האוורור. במהלך הזלוף, עקוב כל הזמן אחר קצב זרימת תמיסת הזלוף, הלחץ העורקי, לחץ השיא של דרכי הנשימה ופרמטרים של תפקוד הריאות.
רמות החמצון של השתל הריאתי ועמידות כלי הדם בריאות של תורם DCD נותרו יציבות, ללא הבדלים משמעותיים לאורך תקופת הזלוף של ארבע שעות. היענות דינמית של ריאות תורם DCD פחתה בהדרגה במהלך תקופת הזלוף של ארבע שעות. רמות הגלוקוז בפרפוזה של ריאות תורם DCD ירדו בהתמדה לאורך ארבע שעות הזלוף.
רמות האלקטרוליטים, כולל נתרן ואשלגן, נותרו עקביות בכל הקבוצות במהלך הזלוף בן ארבע השעות. מספר גבוה משמעותית של תאים אפופטוטיים זוהה בקבוצת תורמי DCD בהשוואה לקבוצות אחרות, כאשר קבוצת שימור הקור הראתה יותר תאים חיוביים מאשר קבוצת EVLP. ציון פגיעת הריאות היה נמוך משמעותית בקבוצת EVLP בהשוואה לקבוצות השימור הסטטי הקר והביקורת.
עיבוי דופן המכתשית ודימום המכתשית בלטו בקבוצת השימור הסטטי הקר של ארבע שעות, בעוד שמבנה המכתשית הרגיל נשמר בקבוצת EVLP.
