Die Verbesserung der Qualität der Spenderlunge ist der Schlüssel zur Verbesserung der Erfolgsrate der Lungentransplantation. Wir hoffen, ein einfaches und reproduzierbares Tiermodell zu etablieren, um die Wirkung von ex vivo Lungenfülle zu untersuchen und die Qualität der Spenderlungen zu verbessern. EVLP hat sich als wirksame technische Maßnahme zur Verbesserung der Qualität der Spenderlunge erwiesen, aber es gibt noch viele Probleme bei EVLP, die untersucht und geklärt werden müssen.
Die Perfusionsbedingungen müssen noch erforscht werden, und die Fähigkeit von EVLP, Ischämie-Reperfusionsschäden abzuschwächen, muss weiter verifiziert werden. Im Vergleich zu anderen Techniken und Modellen. Unsere Ratten-EVLP-Plattform ist am einfachsten, bedienbarsten, reproduzierbarsten, kostengünstigsten und viel kostengünstigsten und bietet eine effiziente Forschungsplattform für die EVLP-bezogene Forschung.
Zu beachten ist die therapeutische Wirkung der Ex-vivo-Lungenprofusionstechnologie auf marginale Spenderlungen, die der DCD in China ähnlich ist. Gleichzeitig kann diese Technologie eine Plattform für zukünftige Forschung bieten. Legen Sie zunächst die betäubte Rattenrückenlage auf einen Operationstisch und befestigen Sie sie mit Nähten.
Machen Sie mit einer chirurgischen Nagetierschere einen zwei bis drei Zentimeter langen Schnitt entlang der Mittellinie des Halses vor der Luftröhre. Schneiden Sie die Haut und präparieren Sie das Muskelgewebe vor der Luftröhre, um die Luftröhre vollständig freizulegen. Injizieren Sie dann mit einer Spritze 1.000 Einheiten Heparin pro Kilogramm in die Schwanzvene und warten Sie fünf Minuten, um eine ausreichende Heparinisierung des Blutes sicherzustellen.
Befreien Sie den Raum hinter der Luftröhre. Führen Sie eine 3-0-Naht durch die Luftröhre und binden Sie einen losen Knoten für die spätere Verwendung. Machen Sie einen V-förmigen Schnitt von 0,5 Zentimetern über dem Knoten in der Luftröhre.
Führen Sie einen 14-Gauge-Trachealtubus in die Luftröhre ein. Ziehen Sie den Nahtknoten fest, um den Schlauch zu sichern. Schließen Sie den Trachealtubus an das Beatmungsgerät an.
Schalten Sie das Beatmungsgerät ein, um mit der Beatmung der Lunge zu beginnen. Überwachen Sie alle fünf Minuten die Vitalfunktionen der Ratte und stoppen Sie die Beatmung. Nachdem der Tod der Ratte nach Herzstillstand anhand der folgenden Parameter bestätigt wurde, wird die mechanische Beatmung im druckgesteuerten Modus wieder aufgenommen und fünf Minuten lang beatmet.
Klemmen Sie die Luftröhre ab und ruhen Sie die Spenderlunge bei Raumtemperatur für eine Stunde warmer ischämischer Zeit. Stellen Sie als nächstes für die Entnahme der Lunge den Operationstisch auf eine 45 Grad hohe Kopfhöhe und eine niedrige Schräglage ein. Entferne mit einem Haarrasierer die Haare aus der Mitte der Brust und des Bauches der Ratte.
Desinfizieren Sie den Operationsbereich dreimal mit Jod und legen Sie ihn mit einem OP-Handtuch ab. Machen Sie mit einer chirurgischen Nagetierschere einen sechs bis sieben Zentimeter langen Schnitt entlang der Mittellinie des Bauches. Schneiden Sie die Haut auf, öffnen Sie die Bauchdecke zur Bauchhöhle und legen Sie die Organe frei.
Injizieren Sie mit einer Spritze 1.000 Einheiten Heparin pro Kilogramm in die untere Hohlvene und warten Sie fünf Minuten, um eine ausreichende Heparinisierung des Blutes sicherzustellen. Schneiden Sie dann mit einer Schere die untere Hohlvene der Ratte ab und beginnen Sie mit der mechanischen Beatmung der Lunge. Nach der Beatmung heben Sie den Xiphoid-Prozess mit einer Pinzette an und machen Sie einen Längsschnitt entlang des Brustbeins von unten nach oben.
Verwenden Sie einen Rippenspreizer um die Brusthöhle freizulegen, und entfernen Sie dann das Thymusgewebe, um das Herz und die großen Blutgefäße darunter freizulegen. Befreien Sie die Aorta der Ratte und den Raum hinter der Lungenarterie. Führen Sie eine 3-0-Naht durch die Lungenarterie und binden Sie einen losen Knoten für die spätere Verwendung.
Machen Sie einen zwei bis drei Millimeter großen V-förmigen Schnitt an der vorderen Oberfläche des Ausflusstrakts des rechten Ventrikels. Führen Sie eine Lungenarterienkanüle durch den Schnitt in die Lungenarterie ein und ziehen Sie die vorgespannte Naht fest, um die Kanüle zu sichern. Schneiden Sie die Spitze des Rattenherzens ab und führen Sie eine hämostatische Pinzette in den linken Ventrikel ein.
Unterbrechen Sie die Klappen zwischen dem linken Ventrikel und dem Vorhof, um sicherzustellen, dass der linksatriale Ausflusstrakt frei ist. Schließen Sie anschließend die Lungenarterienkanüle an den Perfusionskreislauf an und spülen Sie das Restblut mit 15 Millilitern kaliumarmer Lösung mit einer Flussrate von 0,6 bis einem Milliliter pro Minute aus. Legen Sie eine Naht hinter das Herz und umschließen Sie die Herzkammer.
Führen Sie die Kanüle durch den Schnitt in der linken Herzkammer ein und ziehen Sie die Naht fest, um die Kanüle zu sichern. Schneide nun die Luftröhre oberhalb des Trachealtubus ab. Heben Sie die Luftröhre an und trennen Sie mit einer Schere das Bindegewebe hinter der Luftröhre nach unten zum Zwerchfell.
Schneiden Sie dann die untere Hohlvene und die Lungenhauptarterie oberhalb des Zwerchfells ab. Trennen Sie Herz und Lunge. Um die Lunge aufgeblasen zu halten, klemmen Sie am Ende der Inhalation sofort das untere Drittel der Luftröhre ein.
Sammeln Sie das Herz und die Lunge und legen Sie sie zur Konservierung in eine kaliumarme Lösung. Platzieren Sie Herz und Lunge in der für die ex vivo Lungenperfusion (EVLP-Schaltung) vorgesehenen Position und verbinden Sie die Kanüle des linken Ventrikels mit dem Perfusionskreislauf. Füllen Sie nach dem Zusammenbau des EVLP-Setups die Blasenfalle mit einer ausreichenden Menge Lungenperfusionsreparaturlösung, um zu verhindern, dass Blasen in die Lunge gelangen.
Platzieren Sie die kardiopulmonale Einheit in der Organkammer und verbinden Sie sie mit dem EVLP-Gerät. Schalten Sie dann das Beatmungsgerät und die Schlauchpumpe ein. Beginnen Sie die Lungenperfusion bei 20 % der Zielflussrate.
Erhöhen Sie nach der Berechnung des Zieldurchflusses den Durchfluss innerhalb einer Stunde schrittweise auf den Zieldurchfluss. Stellen Sie den Wärmetauscher auf 40 Grad Celsius ein, um eine Lungentemperatur von 37,5 Grad Celsius aufrechtzuerhalten. Entfernen Sie nach 20 Minuten Perfusion die endotracheale Klemme und beginnen Sie unter Verwendung der folgenden Parameter mit der mechanischen Beatmung.
Starten Sie dann den Fluss von hypoxischem Gas. Um die Perfusionslösung aufrechtzuerhalten, wird der Partialdruck von Kohlendioxid, der während der Beatmung gleichzeitig in die Lungenarterie eintritt, zwischen 35 und 45 Millimetern gemessen. Überwachen Sie während der Perfusion ständig die Flussrate der Perfusionslösung, den arteriovenösen Druck, den Spitzendruck der Atemwege und die Lungenfunktionsparameter.
Die Sauerstoffversorgung des Lungentransplantats und der Gefäßwiderstand in der DCD-Spenderlunge blieben stabil, ohne signifikante Unterschiede über die vierstündige Perfusionsperiode. Die dynamische Compliance der DCD-Spenderlungen nahm während der vierstündigen Perfusionsphase allmählich ab. Die Glukosespiegel im Perfusat der DCD-Spenderlunge nahmen während der vierstündigen Perfusion stetig ab.
Die Elektrolytspiegel, einschließlich Natrium und Kalium, blieben während der vierstündigen Perfusion in allen Gruppen konstant. In der DCD-Spendergruppe wurde im Vergleich zu anderen Gruppen eine signifikant höhere Anzahl apoptotischer Zellen nachgewiesen, wobei die Kältekonservierungsgruppe mehr positive Zellen aufwies als die EVLP-Gruppe. Der Lungenverletzungs-Score war in der EVLP-Gruppe signifikant niedriger als in der Kälte-Statik-Konservierungs- und Kontrollgruppe.
Alveolarwandverdickungen und Alveolarblutungen waren in der vierstündigen kalten statischen Konservierungsgruppe prominent, während die normale Alveolarstruktur in der EVLP-Gruppe erhalten blieb.
