Procuramos entender as células especializadas da granulosa e da teca do ovário de Langhand. Estudamos a expressão gênica diferencial entre os dois tipos de células em diferentes pontos durante a ovulação. Isso fornece informações sobre eficiência reprodutiva e fertilidade que serão usadas para aumentar a produção de ovos de forma sustentável.
A Biologia Reprodutiva Avícola é atualmente investigada usando tecnologias de sequenciamento de última geração e ensaios metabólicos. Isso é feito para estudar os tecidos reprodutivos e a interação hormonal envolvida na maturidade sexual e na ovulação. A camada de células da granulosa nem sempre sai como uma folha intacta.
Os pacientes na prática são obrigados a garantir uma maior probabilidade de sucesso. A gema extra remanescente na camada da granulosa é outra preocupação. Tempos de incubação mais longos em PBS frio podem aliviar esse problema.
Caso contrário, a limpeza downstream pode ser necessária. Essa técnica permitirá a padronização entre os biólogos reprodutivos aviários. À medida que a tecnologia de sequenciamento melhora, elucidar os papéis das células especializadas dentro dos órgãos torna-se cada vez mais acessível.
Portanto, a visualização de uma técnica que separa tipos de células especializadas é fundamental para a replicação futura. Para começar, pegue folículos isolados de uma ave fêmea sexualmente madura e coloque-os no gelo. Antes da manipulação, estude os folículos, observando a localização do pedúnculo, o estigma e o disco germinativo.
Em seguida, role suavemente o folículo sobre uma toalha de papel seca e retire a serosa, se necessário, da superfície folicular. Segure o folículo pelo pedúnculo sobre uma tigela cheia de PBS e use a gravidade para visualizar onde o pedúnculo termina na superfície do folículo. Usando uma tesoura, corte apenas o caule sem perfurar a superfície do folículo e continue removendo a serosa, até que não fique mais visível.
Usando a caixa de luz para iluminar e o disco germinativo como referência, reposicione o estigma no lado oposto. Segure suavemente o folículo com o lado do estigma visível e posicione o folículo diretamente sobre a tigela de PBS gelado. Em seguida, pegue o bisturi e corte suavemente ao longo do comprimento do estigma.
Solte imediatamente o folículo no PBS quando a gema começar a cair. Usando uma pinça de tecido reta e não dentada, retire suavemente a camada rosa da parede folicular da gema de um lado da fatia. Continue com pequenos movimentos de pinça e puxe para levantar a parede do folículo da gema.
Para realizar a separação da camada, retraia aproximadamente cinco milímetros de tecido da parede folicular da gema de cada vez. Uma vez que uma seção de cinco milímetros tenha sido retraída, use uma pinça angular em conjunto com a pinça reta para sondar ao longo da concha do folículo. Assim que a camada da granulosa estiver localizada, aperte-a com segurança na camada de teca e continue puxando as duas camadas para longe da gema, conforme descrito anteriormente.
Em seguida, use uma pinça curva para afastar levemente a gema das camadas comprimidas. Varra ou remova o excesso de gema da tigela sem raspar a camada de granulosa para evitar rasgar. Depois de retrair cada seção de cinco a 10 milímetros da parede folicular, faça uma pausa e use a pinça para retirar as camadas de teca e granulosa uma da outra, bem como da gema.
Agora, aproxime-se do disco germinativo com cuidado usando uma pinça reta. Segure firmemente a camada da granulosa na camada de teca. Com pinças curvas, use movimentos leves de escovação para empurrar o disco germinativo para longe das células da granulosa para a superfície da gema.
Se o disco germinativo for necessário como amostra de pesquisa, escove a gema usando uma pinça angular. Continue separando a gema da parede folicular com uma pinça curva até que toda a esfera do folículo esteja desprovida de gema. Uma vez que o restante da gema tenha sido escovado, separe a última porção da camada da granulosa da camada de teca.
Certifique-se de que a camada de granulosa totalmente separada esteja o mais limpa possível, sem ser fortemente revestida com matéria de garfo. Coloque as camadas da granulosa e da teca em recipientes separados com quatro graus Celsius PBS. Depois de colocar a camada da granulosa e as camadas de teca em seu recipiente designado, agite suavemente a camada de teca em PBS com uma pinça para separar quaisquer restos remanescentes da camada da granulosa.
