Cerchiamo di comprendere le cellule specializzate della granulosa e della teca dell'ovaio di Langhand. Studiamo l'espressione genica differenziale tra i due tipi di cellule in diversi momenti durante l'ovulazione. Ciò fornisce informazioni sull'efficienza riproduttiva e sulla fertilità che verranno utilizzate per migliorare in modo sostenibile la produzione di ovuli.
La biologia riproduttiva del pollame è attualmente oggetto di studio utilizzando tecnologie di sequenziamento di nuova generazione e saggi metabolici. Questo viene fatto per studiare sia i tessuti riproduttivi che l'interazione ormonale coinvolta nella maturità sessuale e nell'ovulazione. Lo strato cellulare della granulosa potrebbe non essere sempre un foglio intatto.
I pazienti nella pratica sono tenuti a garantire una maggiore probabilità di successo. Il tuorlo in più che rimane sullo strato di granulosa è un'altra preoccupazione. Tempi di incubazione più lunghi nella PBS fredda possono alleviare questo problema.
In caso contrario, potrebbe essere necessaria la pulizia a valle. Questa tecnica consentirà la standardizzazione tra i biologi della riproduzione aviaria. Con il miglioramento della tecnologia di sequenziamento, il chiarimento dei ruoli delle cellule specializzate all'interno degli organi diventa sempre più accessibile.
Pertanto, la visualizzazione di una tecnica che separa i tipi di cellule specializzate è fondamentale per la replicazione futura. Per iniziare, prendi i follicoli isolati da una femmina di uccello sessualmente matura e mettili sul ghiaccio. Prima della manipolazione, studia i follicoli, notando la posizione del gambo, dello stigma e del disco germinale.
Quindi arrotolare delicatamente il follicolo su un tovagliolo di carta asciutto e, se necessario, staccare la sierosa dalla superficie follicolare. Tieni il follicolo per il gambo sopra una ciotola piena di PBS e usa la gravità per visualizzare dove finisce il gambo sulla superficie del follicolo. Usando le forbici, taglia solo il gambo senza forare la superficie del follicolo e continua a rimuovere la sierosa, fino a quando non è più visibile.
Usando la scatola luminosa per illuminare e il disco germinale come riferimento, riposiziona lo stigma sul lato opposto. Tenere delicatamente il follicolo con il lato dello stigma visibile e posizionare il follicolo direttamente sopra la ciotola di PBS ghiacciato. Quindi, raccogli il bisturi e affettalo delicatamente lungo la lunghezza dello stimma.
Far cadere immediatamente il follicolo nel PBS quando il tuorlo inizia a cadere. Usando un paio di pinze per tessuti dritte e non dentate, staccare delicatamente lo strato rosa della parete follicolare dal tuorlo su un lato della fetta. Continua con piccoli movimenti di pizzicamento e trazione per sollevare la parete del follicolo dal tuorlo.
Per eseguire la separazione degli strati, ritrarre circa cinque millimetri di tessuto della parete follicolare lontano dal tuorlo alla volta. Una volta retratta una sezione di cinque millimetri, utilizzare una pinza angolata in tandem con la pinza diritta per sondare lungo il guscio del follicolo. Una volta individuato lo strato di granulosa, pizzicarlo saldamente sullo strato di Theca e continuare a tirare via entrambi gli strati dal tuorlo come descritto in precedenza.
Quindi, usa una pinza curva per spazzolare leggermente il tuorlo lontano dagli strati pizzicati. Spazzare via o rimuovere il tuorlo in eccesso dalla ciotola senza raschiare lo strato di granulosa per evitare strappi. Dopo aver retratto ogni sezione da 5 a 10 millimetri della parete follicolare, fare una pausa e utilizzare la pinza per staccare gli strati di teca e granulosa l'uno dall'altro e dal tuorlo.
Ora, avvicinati al disco germinale con cautela usando una pinza dritta. Tenere saldamente lo strato di granulosa sullo strato di Theca. Con una pinza curva, usa leggeri movimenti di spazzolatura per spingere il disco germinale lontano dalle cellule della granulosa sulla superficie del tuorlo.
Se il disco germinale è necessario come campione di ricerca, spazzolare via il tuorlo con una pinza angolata. Continuare a separare il tuorlo dalla parete follicolare con una pinza curva fino a quando l'intera sfera del follicolo è priva di tuorlo. Una volta che il resto del tuorlo è stato spazzolato via, separare l'ultima porzione dello strato di granulosa dallo strato di Theca.
Assicurarsi che lo strato di granulosa completamente separato sia il più pulito possibile senza essere pesantemente ricoperto di materia del giogo. Posizionare gli strati di granulosa e teca in contenitori separati con PBS a quattro gradi Celsius. Dopo aver posizionato lo strato di granulosa e gli strati di teca nel contenitore designato, agitare delicatamente lo strato di teca in PBS con una pinza per staccare eventuali resti rimanenti dello strato di granulosa.
