Langhand yumurtalığının özelleşmiş granüloza ve teka hücrelerini anlamaya çalışıyoruz. Yumurtlama sırasında farklı noktalarda iki hücre tipi arasındaki diferansiyel gen ekspresyonunu inceliyoruz. Bu, yumurta üretimini sürdürülebilir bir şekilde artırmak için kullanılacak üreme verimliliği ve doğurganlığı hakkında bilgi sağlar.
Kanatlı Üreme Biyolojisi şu anda yeni nesil dizileme teknolojileri ve metabolik tahliller kullanılarak araştırılmaktadır. Bu, hem üreme dokularını hem de cinsel olgunluk ve yumurtlama ile ilgili hormonal etkileşimi incelemek için yapılır. Granüloza hücre tabakası her zaman sağlam bir tabaka olarak çıkmayabilir.
Pratikte hastaların daha yüksek bir başarı olasılığı sağlamaları gerekir. Granüloza tabakasında kalan ekstra yumurta sarısı başka bir endişe kaynağıdır. Soğuk PBS'de daha uzun inkübasyon süreleri bu sorunu hafifletebilir.
Aksi takdirde, aşağı akış temizliği gerekebilir. Bu teknik, kuş üreme biyologları arasında standardizasyona izin verecektir. Dizileme teknolojisi geliştikçe, organlardaki özel hücrelerin rollerini aydınlatmak giderek daha erişilebilir hale geliyor.
Bu nedenle, özel hücre tiplerini ayıran bir tekniğin görselleştirilmesi, gelecekteki replikasyon için kritik öneme sahiptir. Başlamak için, cinsel olarak olgunlaşmış bir dişi kuştan izole edilmiş folikülleri alın ve buzun üzerine yerleştirin. Manipülasyondan önce, sapın, stigmanın ve germinal diskin yerini not ederek folikülleri inceleyin.
Daha sonra folikülü kuru bir kağıt havlu üzerine nazikçe yuvarlayın ve gerekirse serozayı foliküler yüzeyden çekin. Folikülü PBS ile dolu bir kasenin üzerinde sapından tutun ve sapın folikül yüzeyinde nerede bittiğini görselleştirmek için yerçekimini kullanın. Makas kullanarak, folikül yüzeyini delmeden sadece sapı kesin ve artık görünmeyene kadar serozayı çıkarmaya devam edin.
Aydınlatmak için ışık kutusunu ve referans olarak germinal diski kullanarak, karşı taraftaki stigmanın yerini değiştirin. Folikülü, stigma tarafı görünecek şekilde nazikçe tutun ve folikülü doğrudan buz gibi soğuk PBS kasesinin üzerine yerleştirin. Ardından, neşteri alın ve stigma uzunluğu boyunca hafifçe dilimleyin.
Yumurta sarısı dökülmeye başladığında folikülü hemen PBS'ye bırakın. Bir çift düz dişsiz doku forseps kullanarak, foliküler duvarın pembe tabakasını dilimin bir tarafındaki yumurta sarısından nazikçe soyun. Folikül duvarını yumurta sarısından uzaklaştırmak için küçük kıstırma ve çekme hareketleriyle devam edin.
Katman ayrımını gerçekleştirmek için, bir seferde yaklaşık beş milimetre foliküler duvar dokusunu yumurta sarısından geri çekin. Beş milimetrelik bir bölüm geri çekildikten sonra, folikül kabuğu boyunca araştırmak için düz forseps ile birlikte açılı forseps kullanın. Granüloza tabakası güvenli bir şekilde yerleştirildikten sonra, onu Theca tabakasına sıkıştırın ve daha önce tarif edildiği gibi her iki tabakayı da yumurta sarısından çekmeye devam edin.
Ardından, yumurta sarısını sıkışmış katmanlardan hafifçe fırçalamak için kavisli forseps kullanın. Yırtılmayı önlemek için granüloza tabakasını kazımadan kaseden süpürün veya fazla sarıyı çıkarın. Foliküler duvarın her beş ila 10 milimetrelik bölümünü geri çektikten sonra, teka ve granüloza tabakalarını birbirinden ve yumurta sarısından soymak için forsepsleri duraklatın ve kullanın.
Şimdi, düz forseps kullanarak germinal diske dikkatlice yaklaşın. Granüloza tabakasını Theca tabakasına sıkıca tutun. Kavisli forsepslerle, germinal diski granüloza hücrelerinden yumurta sarısı yüzeyine itmek için hafif fırçalama hareketleri kullanın.
Germinal disk bir araştırma örneği olarak gerekliyse, açılı forseps kullanarak yumurta sarısını fırçalayın. Folikülün tüm küresi yumurta sarısından yoksun olana kadar yumurta sarısını foliküler duvardan kavisli forseps ile ayırmaya devam edin. Sarının geri kalanı fırçalandıktan sonra, granüloza tabakasının son kısmını Theca tabakasından ayırın.
Tamamen ayrılmış granüloza tabakasının, boyunduruk maddesiyle yoğun bir şekilde kaplanmadan mümkün olduğunca temiz olduğundan emin olun. Granüloza ve teka katmanlarını dört santigrat derece PBS ile ayrı kaplara yerleştirin. Granüloza tabakasını ve teka katmanlarını belirlenen kaplarına yerleştirdikten sonra, granüloza tabakasının kalan kalıntılarını ayırmak için teka tabakasını PBS'de forseps ile hafifçe çalkalayın.
