Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
Лиофилизацию часто простой и удобный способ получения сухих продуктов жизнеспособных бактериальных клеток. Вопрос о процессе выживания клеток. Мы подробно процедуру исследовать, как выживаемость клеток в процессе лиофилизации зависит от свойств композиции использованы.
Сотовая вода может быть удалена обратимо инактивации микроорганизмов для облегчения хранения. Один такой метод удаления сублимационной сушки, которая считается щадящий метод обезвоживания. Чтобы способствовать выживанию клеток в процессе сушки, клетки часто изготавливают заранее. Композиция образует матрицу, которая внедряется в клетки и защищает их от различных вредных напряжений, введенных в клетки при замораживании и сушку. Здесь приводится общий метод для оценки выживаемости клеток после сублимационной сушки, и мы проиллюстрировать путем сравнения результатов, полученных с четырех различных составов: дисахарид сахароза, сахароза полученный полимер Ficoll PM400, а соответствующие полисахариды гидроксиэтилцеллюлоза (ГЭЦ ) и гидроксипропилметилцеллюлозу (ГПМЦ), на двух штаммов бактерий, П. putida KT2440 и А. chlorophenolicus A6. В данной работе показано, как подготовить составы для сублимационной сушки и как исследовать механикемов выживаемости клеток после регидратации путем характеризации препаративной формы с применением дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), измерение поверхностного натяжения, рентгеноструктурного анализа и электронной микроскопии и относительно этих данных в выживаемости. Полимеры были выбраны, чтобы получить мономерный состав соответствующего полисахарида напоминающие сахарозы в различной степени. С помощью этого метода установки мы показали, что полимеры могут поддерживать выживание клеток так же эффективно, как дисахариды, если определенные физические свойства композиции находятся под контролем 1.
1. Выращивание и сбор П. putida
2. Разведение других видов
3. Формулировка клетки
4. Сушка вымораживанием
5. Регидратации
6. Перечисление
7. Характеристика Формулировка Замирание
8. Поверхностное натяжение Измерения гидратированных композиции
9. Рентгеновского анализа Сухие композиции
10. Электронная микроскопия
Таблица 1 показывает данные по разработке состава, тепловой события, записанные с помощью ДСК при нагревании замороженной композиции, состав сухих образцов и поверхностное натяжение формулировки решений. Т г 'сахарозы была определена до -40 ° С 2, 3 и может быт?...
Мотивом для этого исследования было изучить некоторые свойства состава, что может иметь важное значение для выживания клеток в процессе лиофилизации. Хотя внутренняя толерантность сушки варьируется между различными видами, как показано на фиг.1А, тенденция того, насколько хо...
Нет конфликта интересов объявлены.
Работа выполнена при поддержке шведского фонда стратегических экологических исследований (MISTRA) в рамках программы DOM и Грант 211 684 (BACSIN) из Европейского союза Сообщества рамочной программы FP7. Мы благодарим J. Энгстранд за помощь в съемках рентгеноструктурного анализа и Л. Тан за помощь в концептуальном повествования.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Ficoll PM 400 | GE-healthcare | 17-0300-10 | |
HEC (Natrosol-M Pharm Grade) | Ashland | Gift from Ashland | |
HPMC (Methocel F4M) | Dow | Gift from the Department of Pharmacy, Uppsala University | |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S2395 | |
NaCl | Sigma-Aldrich | 71376 | |
Tryptic Soy broth | Merck | 105459 | |
Tryptic Soy Agar | Merck | 105458 | |
Lyostar II | FTS Kinetics | N.A. | |
Pyris Diamond DSC | Perkin-Elmer | N.A. | |
Bruker AXS SMART CCD 1k Diffractometer | Bruker | N.A | |
Dual-beam FEI Strata DB235 FIB/SEM | FEI | N.A | |
Krüss Educational Tensiometer | Krüss | N.A. |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены