JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Hepatitis C Virus (HCV) is a major human pathogen that causes liver disorders, including cirrhosis and cancer. An HCV infectious cell culture system is essential for understanding the molecular mechanism of HCV replication and developing new therapeutic approaches. Here we describe a protocol to investigate various stages of the HCV replication cycle.

Аннотация

Вирус гепатита С (HCV) влияет 3% населения мира и вызывает серьезные заболевания печени, включая хронический гепатит, цирроз печени и гепатоцеллюлярной карциномы. ВГС оболочечным РНК вируса, принадлежащий к семейству Flaviviridae. Современное лечение не полностью эффективными и вызывает неблагоприятные побочные эффекты. Там нет ВГС вакцина. Таким образом, по-прежнему требуются усилия для разработки вакцины и лучшую терапию. Система HCV культуры клеток имеет решающее значение для изучения различных стадий роста ВГС в том числе вирусного входа, репликации генома, упаковки и выхода. В текущей процедуры, представленной мы использовали дикого типа intragenotype 2а химерный вирус, FNX-HCV, и рекомбинантный вирус FNX-Rluc, несущий ген-репортер люциферазы Renilla изучать репликацию вируса. Клеточной линии гепатомы человека (Хух-7 на основе) был использован для трансфекции в пробирке транскрипции ВГС геномных РНК. Бесклеточные супернатанты культуры, белковые лизаты и тг о РНК собирали в разное время указывает после трансфекции для оценки роста HCV. HCV геном состояние репликации оценивали путем количественного RT-PCR и визуализации на присутствие вируса гепатита двухцепочечной РНК. Экспрессии белка ВГС была проверена Вестерн-блот и иммунофлюоресценции анализов с помощью антител, специфичных для HCV NS3 и NS5A белков. РНК ВГС трансфицированные клетки выпущенные инфекционных частиц в культуральном супернатанте и титра вируса была измерена. Люциферазы анализы были использованы для оценки уровня репликации и инфекционность репортера ВГС. В заключение приведем различные вирусологических анализов для характеристики различных этапов цикла репликации ВГС.

Введение

Вирус гепатита С (HCV) вызывает цирроз печени и рак печени. Это влияет 170 миллионов человек во всем мире с 350 000 человек умирают ежегодно 1-3. ВГС является положительным нить РНК вируса с размером генома 9,6 кб. Геном HCV переводится как единое полипротеина ~ 3000 аминокислотных остатков, который протеолитически расщеплен на различных клеточных и вирусных протеаз в 10 полипептидов. ВГС является вирус прототип в род Hepacivirus и принадлежит к семейству Flaviviridae 4. Под воздействием, ВГС устанавливает хронической инфекции в 80% лиц. Инфекция в основном бессимптомно и своевременная диагностика может позволить терапевтического вмешательства, чтобы предотвратить ухудшение печени. Современное лечение не является оптимальным и ни одна вакцина не доступна 5,6.

Этиология гепатита С был впервые описан в 1989 7. Изучение репликацию ВГС важно для гепатита С вакцины и научных исследований лечения, но это былодолго сдерживается отсутствием эффективной вирусной системе культуры. Молекулярный клон ВГС было показано, что инфекционное у шимпанзе на внутрипеченочного прививки 8. Впоследствии ВГС суб-геномные репликоны были описаны, что позволило вскрыть вирусную сцену геном репликации в системе культуры клеток 9,10. Обнаружение генотип 2а ВГС изолировать JFH-1 (японский Молниеносный гепатит-1), способны инфицировать культуры клеток открывает новые возможности для исследования репликации ВГС 11-13. Штамм Генотип 2а JFH-1 на основе меж-и внутри-генотипических химерные вирусы и генотип 1 HCV инфекционные системы культуры, основанной также доступны 14-18.

Мы успешно использовали JFH-1 напряжение и ВГС intragenotype 2а химерный вирус для получения высокого разрешения функциональной профилирования карту белковых доменов и цис-действующих РНК элементов 19,20. В соответствии с этим здесь мы опишем эффективную систему культуры, используемую обычно, что позволяетизучения различных этапов цикла репликации ВГС и хост-возбудителя взаимодействия. Мы представляем вирусологических анализов для оценки вирусной репликации генома и De Novo инфекционность intragenotype 2а ВГС и Renilla люциферазы журналистом ВГС.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

Общая схема протокола показан на рисунке 1.

1. Клетки

  1. Подготовить всю питательной среды, которая содержит 10-15% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 10 мМ заменимые аминокислоты, 10 мМ Hepes, пенициллин (100 ед / мл), стрептомицином (100 мг / мл) и 2 мМ L-глутамина.
  2. Поддерживать Хух-7.5.1 ячеек 13 в полной среды роста, содержащих вышеуказанные добавки для анализа в пробирке гепатита С вирусной цикла репликации.
  3. Культура вирусных штаммов в Хух-7.5.1 клеток с заданным дополненной питательной среды при 37 ° С с 5% CO 2.

2. Вирус и Плазмидные Конструкции

  1. Генерирование комплементарную ДНК (кДНК) форму РНК ВГС и клонировать его в плазмидный вектор для простоты генетических манипуляций. Примечание: Открытие японского Молниеносный гепатит 1, JFH-1 (генотип 2а ВГС), изолят имеет решающее значение для исследований ВГС ив основном используется для изучения 11-13 репликации ВГС цикла. Inter-и intragenotypic химерные вирусы на основе JFH-1 ВГС, как правило, используется в исследованиях 14-18. Строительство синтетический intragenotype 2а химерный вирус, FNX-ВГС, и monocistronic химерных репортера штамма был описан ранее 19 и строительные детали выходят за рамки этого протокола.
  2. Используйте вирус intragenotype 2а pFNX-HCV как он содержит 5'NTR, структурные регионы и Р7, и часть неструктурных регионах NS2 (нуклеотиды с 1 по 2878) из родительского штамма J6CF (NCBI присоединение нет. AF177036), а а также не-структурных компонентов JFH-1 вирусного штамма (NCBI вступления нет. AB047639). Примечание: FNX-ВГС было синтезировано на основе последовательности Jc1 intragenotype 2а химерных ВГС сообщалось ранее 15.
  3. Генерирование monocistronic химерного вируса репортер конструкцию, то pFNX-Rluc, на основе штамма pFNX-HCV (выше на стадии 2.2), вставив Rген люциферазы enilla между 5 'NTR и основной гена (между нт 388 и 389). Затем подключите ген люциферазы и основные ген этой конструкции с использованием ног и рта вирусной болезни 2А (F2A) пептидной последовательности, которая будет работать в качестве сигнала расщепления.
  4. Инженер по РНК-полимераза-нуль (Pol-) вирусную конструкцию, используя либо pFNX-HCV или pFNX-Rluc вирусный фон. Замените полимеразы NS5B каталитические остатки, ДДГ (AA 2759-2761; NT 8615-8623), любого из этих вирусных магистралей с остатками AAG аминокислот.

3. In Vitro РНК HCV Транскрипция

  1. Используйте intragenotype 2а химерный вирус FNX-HCV и FNX-HCV Pol ноль (Pol-) HCV для оценки вирусной репликации (рис. 2а).
  2. Линеаризуем вирусных плазмид с XbaI рестриктазы, затем обрабатывают маш нуклеазы генерировать тупые концы. Очищают переваренных плазмид путем анионообменной хроматографии. Проверьте целостность ое линеаризованной плазмиды ДНК, подвергая электрофорезу в агарозном геле (фиг. 2b).
  3. Расшифруйте линеаризованные вирусных плазмид с помощью Т7-РНК-полимеразы.
  4. Очищают вновь синтезированный ДНКазы обработанных РНК с использованием набора для очистки РНК.
  5. Убедитесь, производство РНК с помощью электрофореза в агарозном геле (фиг. 2С).
  6. Количественная РНК спектрофотометрически.
  7. Храните сгенерированный РНК в -80 ° С в течение 10 мкг рабочих аликвоты. Примечание: Чтобы свести к минимуму изменение качества РНК внутри каждого эксперимента путем расшифровки все РНК для каждого образца вирусной и контроля одновременно.

4. РНК HCV Трансфекцию и сбора проб

  1. Урожай Хух-7.5.1 клетки, используя трипсин.
  2. Для полоскания клеток, центрифуги и ресуспендируйте подвеску дважды холодным низкой сыворотки СМИ. Ресуспендируют клеток в условиях низкой сыворотки среде при 1 × 10 7 клеток на мл.
  3. Смешайте в общей сложности 10 & #956; г транскрибируется вирусной РНК с 400 мкл ресуспендировали клеток (4 х 10 6 клеток) в 0,4-см кювету для электропорации. Трансфекции клеток с помощью электропорации в 270 V, 100 Ω и 950 мкФ.
  4. Ресуспендируют электропорации клетки в 10 мл полной среды рост с 15% FBS. Примечание: Увеличение живучесть электропорации клеток видно, когда Ха-7.5.1 клетки культивировали в 15% сыворотки плода коровы.
  5. Пластина клеток в обоих Т-25 колб (~ 1.2 х 10 6 клеток на колбу) и 48-луночных планшетах (1 х 10 4 клеток на лунку) для каждого из следующих временных точках: 4, 48 и 96 часов.
  6. Замените носитель на 4-8 ч после трансфекции свежего дополнена питательной среды с добавлением 10% FBS, чтобы удалить остатки мертвых клеток из культивированных колб и пластин.
  7. Урожай супернатантах клеточных культур в 48, 96 временных точках ч и удаление клеточного дебриса от собранных образцов центрифугированием клеток в 1500 оборотах в минуту в течение 10 мин при 4 ° С.
  8. Храните супернатантами бесклеточных при -80 º C. Лизиса клеток для анализа белка и РНК с помощью Вестерн-блоттинга и обратной транскрипции-Количественную ПЦР в указанные моменты времени.

5. Обратной транскрипцией количественной ПЦР (RT-КПЦР) для оценки генома ВГС копий

  1. Выполните двухэтапный RT-КПЦР для определения ВГС геномной количество РНК копирования.
  2. Обратный транскрибиров 1 мкг общей клеточной РНК с помощью обратной транскриптазы и грунтовки, специфический для HCV смысловой цепи, который связывается с 5'NTR (JFH RTQ R: 5'CCTATCAGGCAGTACCACA-3 ') или грунтовки, специфического для гена уборка peptidylprolyl изомераза G (PPIG R : 5'-GTCTCTCCTCCTTCTCCTCCTATCTTT-3 '). Также обратного транскрибировать FNX-РНК ВГС (сгенерированный на шаге 3) известных копий генома (10 1 до 10 9 стандарт), используя чувство ВГС нити грунтовку.
  3. Провести КПЦР с помощью 50 нг полученного транскрибируется кДНК с использованием специфических праймеров HCV (RT JFHQF: 5'CTGGGTCCTTTCTTGGATAA-3; JFH RTQ R: 5'CCTATCAGGCAGTACCACA-3 ') и ДНК-связывающий зеленую краску, содержащую КПЦР супер микс. Выполните КПЦР для домашнего хозяйства гена PPIG а (праймеры PPIG F: 5'-GAAGAGTGCGATCAAGAACCCATGAC-3 '; PPIG R: 5'-GTCTCTCCTCCTTCTCCTCCTATCTTT-3') Примечание: Для расчета точной уровень внутриклеточного РНК ВГС через образцов, использовать ген клеточного Уборка номеров, PPIG , уровень экспрессии (Ct цикл) для нормализации. Используйте числа копий FNX-генома ВГС в качестве стандарта для определения количества копий.
  4. Используйте следующие условия при работе КПЦР для определения РНК ВГС число копий: 95 ° C в течение 15 сек и 60   º C в течение 30 сек (40 циклов) с использованием реального времени система PCR.
  5. См. фиг.3А и 3В для результатов репликации генома.

6. Вестерн блот анализ для выявления вируса гепатита Экспрессия белка (рис. 3C)

  1. Используйте клеточных лизатов фром вирусной РНК трансфицировали в 96 часов после трансфекции для белка вестерн-блоттинга.
  2. Решить клеточного лизата с помощью SDS-PAGE и трансфер в поливинилидендифторидную (ПВДФ) мембраны.
  3. Блок мембрану с использованием блокирующего раствора, содержащего 5% обезжиренное молоко, 0,2% Tween 20 в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS).
  4. Выдержите мембрану с первичной мышиных моноклональных антител NS3 (1 в 1000 разбавления) и бета-актина (1 в 5000 разведение).
  5. Добавить антимышиного IgG, конъюгированного с пероксидазой хрена (1 в 5000 разбавление) и обнаружить по хемилюминесценции.

7. Иммунофлуоресцентной (IFA)

  1. Закрепить HCV-инфицированных и трансфицированные клетки с использованием метанола в течение 30 мин при -20 ° С для иммунофлуоресцентного анализа.
  2. Вымойте клетки с PBS три раза и блок с IFA блокирующем буфере.
  3. Используйте кроличьи поликлональные антитела к NS5A прежде всего антител (любезно предоставлены доктором Дасгупта, UCLA) или моноклональные антитела мыши DSRАнтитело J2 NA в разведении 1:200 (1 мкг / мл) и инкубировали в течение 5 ч в течение ночи при 4 ° С.
  4. Промывают клетки с PBS три раза после первичного антитела.
  5. Добавить козьего анти-кроличьего IgG-488 поликлональное антитело или вторичное козла против мышиного IgG-594 поликлональных вторичного антитела при разведении 1:1000 (1 мкг / мл) и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре.
  6. Вымойте клеток с PBS три раза и пятно ядер с использованием Hoechst краситель и вид при помощи флуоресцентного микроскопа (рис. 3D).

8. Измерение Вирус Титр

  1. Пластинчатые наивные Ха-7.5.1 клетки приблизительно в 3 х 10 3 клеток / лунку с использованием 96-луночного планшета. На следующий день, выполнять 10-кратные серийные разведения бесклеточной супернатанта культуры собирают из РНК ВГС трансфецировали клеток с использованием средств массовой информации роста и привить в трех экземплярах на Ха-7.5.1 клеток.
  2. Исправить клеток при 72 ч после инфекции с использованием метанола (в течение 30 мин при -20 ° С) и immunostain для ВГС NS5A белка, как указано в разделе 7.
  3. Используйте наибольшее разведение рассчитывать на положительный очагов NS5A и рассчитать среднее количество формирующего устройства фокусировки (ФФУ) на миллилитр. См. рисунок 4 для титра ВГС.

9. Renilla Люциферазную Репортер Анализ на вирусный геном репликации и инфекционности

  1. Для оценки вирусной репликации генома, пластина РНК ВГС-электропорации Хух-7.5.1 клетки в трех экземплярах в 48-луночных планшетах (1 х 10 4 клеток / лунку).
  2. Лизиса клеток с 75 мкл лизирующего буфера пассивной на 6 часов, 48 часов и 96 часов после трансфекции.
  3. Rock тарелки мягко в течение 15 мин при комнатной температуре и хранить при температуре -80 ° С.
  4. Для измерения ферментативной активности люциферазы Renilla, оттаивать лизата белка и активности люциферазы Renilla реагенты до комнатной температуры.
  5. Добавить 20 мкл лизата белка на лунку в 96-сва л белого свечения пластины и поместите пластину в люминометре.
  6. Внесите 100 мкл Renilla люциферазы реагента (целентеразин субстрат + буфер) на лунку и после 2 сек предварительно прочитать задержкой; интегрировать испускаемого света в течение 10 сек.
  7. Рассчитайте среднее значение и стандартное отклонение для каждого образца из люциферазных значений биологических трижды и подвергнуть данные в статистическом анализе (рис. 5).
  8. Для оценки инфективности, инокуляции 500 мкл бесклеточной надосадочной жидкости, полученной из РНК ВГС-трансфицированных клеток для указанных временных точках (48 ч и 96 ч) в трех экземплярах на наивных Ха-7.5.1 клеток в 48-луночных планшетах.
  9. Заменить вирусного посевного материала с 500 мкл свежей среды на лунку после 6 ч после инфекции.
  10. Lyse клетки через 48 часов после заражения и в зависимости от Renilla люциферазы, как описано в шагах 8,2 до 8,7 (рис. 5).
Заголовка "> 10. Статистический анализ

  1. Столбики ошибок в графах указывают на стандартные отклонения (SD). Значения P рассчитывались по непарным т теста.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

Вирус гепатита С является РНК-содержащий вирус. Таким образом, для генетической манипуляции цели HCV геномной кДНК была клонирована в плазмидный вектор бактериальной. Т7 РНК-полимераза последовательность промотора была введена непосредственно перед 5'-конце генома ВГС. Общая схема ан...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Эта иллюстрация описывает способ анализа цикл репликации вируса гепатита С. ВГС является человеческий патоген, и предписанная протокол биобезопасности должны быть строго соблюдены. Инфекционные системы HCV клеток культуры были описаны ранее 11-13,16,17. Есть несколько важных моменто...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

The authors have nothing to disclose.

Благодарности

We thank F. Chisari for providing Huh-7.5.1 cell line. We would like to thank Justine Ho for editing the manuscript. This work was supported by Cedars-Sinai Medical Center Institutional Programmatic Research Award and National Center for Advancing Translational Sciences, Grant UL1TR000124 to V.A.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)Fisher Scientific10-017-CV
Non essential amino acidFisher ScientificMT25025CI
HEPESLife Technologies15630080
GlutamaxLife Technologies35050061
Opti-MEM Reduced Serum Medium,no Phenol RedLife Technologies11058-021
Huh-7.5.1The Scripps Research InstituteThe cell line was kindly provided by Dr. Francis Chisari to Dr. Arumugaswami under executed MTA between The Scripps Research Institute and Cedars-Sinai Medical Center
Plasmids (pFNX-HCV, pFNX-HCV Pol null, pFNX-Rluc, and pFNX-Rluc Pol null) Cedars-Sinai Medical CenterThe HCV plasmids were synthesized by Dr. Arumugaswami using overlapping oligo-nucleotides. 
XbaINew England Biolabs Inc.R0145S
Mung Bean NucleaseNew England Biolabs Inc.M0250S
T7 RiboMAX Express Large Scale RNA Production SystemPromegaP1320
Rneasy Mini KitQiagen74104
Nanodrop 2000Thermo ScientificNanodrop 2000
Electroporation Cuvette (4 mm)BioexpressE-5010-4
Gene Pulser Xcell Total SystemBio-Rad165-2660
mouse monoclonal anti-dsRNA antibody J2 English & Scientific Consulting Kft.10010200
Goat anti-rabbit IgG Alexa Fluor 488Life TechnologiesA11008
Goat anti-rabbit IgG Alexa Fluor 594Life TechnologiesA11020
PVDF membrane packageBio-Rad162-0263
Blotting Grade Blocker Non Fat Dry MilkBio-Rad170-6404XTU
Tween-20Bio-Rad170-6531XTU
Anti-Hepatitis C Virus NS3 antibody [8 G-2]Abcamab65407
Anti-Hepatitis C Virus NS3 antibody [H23]Abcamab13830
Goat anti-mouse IgG conjugated with horseradish peroxidase (HRP) Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.115-035-003
Amersham ECL Prime Western Blotting Detection Reagents GE Healthcare Life SciencesRPN2236
SUPERSCRIPT III RT Life Technologies18080085
SYBR QPCR SUPERMIX W/ROXLife Technologies11744500
ViiA 7 real-time PCR systemLife TechnologiesNA
Renilla Luciferase Assay System kitPromegaE2810
RNase-Free DNasePromegaM6101
GloMax-Multi Detection System (Luminometer)Promega

Ссылки

  1. Alter, M. J. Epidemiology of hepatitis C. Hepatology.. 26(3 Suppl 1), (1997).
  2. Alter, M. J. Epidemiology of hepatitis C virus infection. World J Gastroenterol. 13 (17), 2436-2441 (2007).
  3. Lavanchy, D. The global burden of hepatitis C. Liver Int. 29 (Suppl 1), 74-81 (2009).
  4. Lindenbach, B. D., Thiel, H. J., Rice, C. M. Flaviviridae: viruses and their replication in Fields Virology. , Philadelphia, PA. 1101-1152 (2007).
  5. Ciesek, S., Manns, M. P. Hepatitis in 2010: the dawn of a new era in HCV therapy. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 8 (2), 69-71 (2011).
  6. Ghany, M. G., et al. An update on treatment of genotype 1 chronic hepatitis C virus infection: 2011 practice guideline by the American Association for the Study of Liver Diseases. Hepatology. 54 (4), 1433-1444 (2011).
  7. Choo, Q. L., et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science. 244 (4902), 359-362 (1989).
  8. Kolykhalov, A. A., et al. Transmission of hepatitis C by intrahepatic inoculation with transcribed RNA. Science. 277 (5325), 570-574 (1997).
  9. Lohmann, V., et al. Replication of subgenomic hepatitis C virus RNAs in a hepatoma cell line. Science. 285 (5424), 110-113 (1999).
  10. Blight, K. J., Kolykhalov, A. A., Rice, C. M. Efficient initiation of HCV RNA replication in cell culture. Science. 290 (5498), 1972-1974 (2000).
  11. Lindenbach, B. D., et al. Complete replication of hepatitis C virus in cell culture. Science. 309 (5734), 623-626 (2005).
  12. Wakita, T., et al. Production of infectious hepatitis C virus in tissue culture from a cloned viral genome. Nat Med. 11 (7), 791-796 (2005).
  13. Zhong, J., et al. Robust hepatitis C virus infection in vitro. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (26), 9294-9299 (2005).
  14. Yi, M., et al. Compensatory mutations in E1, p7, NS2, and NS3 enhance yields of cell culture-infectious intergenotypic chimeric hepatitis C virus. J Virol. 81 (2), 629-638 (2007).
  15. Pietschmann, T., et al. Construction and characterization of infectious intragenotypic and intergenotypic hepatitis C virus chimeras. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (19), 7408-7413 (2006).
  16. Li, Y., et al. Highly efficient full-length hepatitis C virus genotype 1 (strain TN) infectious culture system. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (48), 19757-19762 (2012).
  17. Yi, M., Lemon, S. Genotype 1a HCV (H77S) infection system. Methods Mol Biol. 510, 337-346 (2009).
  18. Gottwein, J. M., et al. Development and application of hepatitis C reporter viruses with genotype 1 to 7 core-nonstructural protein 2 (NS2) expressing fluorescent proteins or luciferase in modified JFH1 NS5A. J Virol. 85 (17), 8913-8928 (2011).
  19. Arumugaswami, V., et al. High-resolution functional profiling of hepatitis C virus genome. PLoS Pathog. 4 (10), (2008).
  20. Chu, D., et al. Systematic analysis of enhancer and critical cis-acting RNA elements in the protein-encoding region of the hepatitis C virus genome. J Virol. 87 (10), 5678-5696 (2013).
  21. Salloum, S., et al. Rab18 binds to hepatitis C virus NS5A and promotes interaction between sites of viral replication and lipid droplets. PLoS Pathog. 9 (8), (2013).
  22. Gonzalez, G., et al. Selection of an optimal RNA transfection reagent and comparison to electroporation for the delivery of viral RNA. J Virol Methods. 145 (1), 14-21 (2007).
  23. Phan, T., et al. Hepatitis C virus NS2 protein contributes to virus particle assembly via opposing epistatic interactions with the E1-E2 glycoprotein and NS3-NS4A enzyme complexes. J Virol. 83 (17), 8379-8395 (2009).
  24. Schaller, T., et al. Analysis of hepatitis C virus superinfection exclusion by using novel fluorochrome gene-tagged viral genomes. J Virol. 81 (9), 4591-4603 (2007).
  25. Li, R., et al. Production of hepatitis C virus lacking the envelope-encoding genes for single-cycle infection by providing homologous envelope proteins or vesicular stomatitis virus glycoproteins in trans. J Virol. 85 (5), 2138-2147 (2011).
  26. Jones, C. T., et al. Hepatitis C virus p7 and NS2 proteins are essential for production of infectious virus. J Virol. 81 (16), 8374-8383 (2007).
  27. Steinmann, E., et al. Hepatitis C virus p7 protein is crucial for assembly and release of infectious virions. PLoS Pathog. (7), (2007).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

88

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены