АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Миграция клеток является биологическим феноменом, который участвует в многочисленных физиологических, таких как заживление ран и иммунных реакций, и патофизиологических процессов, как рак. 3D-коллагеновый матрикс анализа миграции является универсальным инструментом для анализа миграционных свойств различных типов клеток в в 3D физиологическая-среде.

Аннотация

Способность переносить является отличительным признаком различных типов клеток и играет важную роль в нескольких физиологических процессов, в том числе эмбрионального развития, заживления ран, и иммунного ответа. Тем не менее, миграция клеток также является ключевым механизмом в рака позволяет эти раковые клетки отделяются от первичной опухоли, чтобы начать метастазирование. В течение последних лет различные анализы миграцию клеток были разработаны для анализа миграционного поведения различных типов клеток. Поскольку двигательные поведение клеток заметно отличается между двумерной (2D) и трехмерной (3D) окружающей среды, можно предположить, что анализ миграции клеток, внедренных в 3D-среде даст более существенный миграцию клеток Данные. Преимущество описанного 3D коллагеновой матрицы анализа миграции является то, что клетки встроены в физиологическом 3D сети коллагеновых волокон, представляющих основной компонент внеклеточной матрицы. Благодаряпокадровой видео микроскопии миграции клеток в реальном измеряется позволяет определить несколько параметров миграции, а также их изменения в ответ на про-миграционных факторов или ингибиторов. Различные типы клеток могут быть проанализированы с помощью этой техники, в том числе лимфоцитов / лейкоцитов, стволовые клетки и раковые клетки. Точно так же, также кластеры клеток или сфероидов может быть встроен в коллагеновой матрицы, одновременно с анализом эмиграции отдельных клеток от клеток кластера / сфероида в коллагена решетки. Мы пришли к выводу, что 3D коллагеновый матрикс анализа миграции является универсальным методом для анализа миграции клеток в пределах физиологической, как 3D-среде.

Введение

Как слияния клеток (краткий обзор см 1,2) миграция клеток еще один биологический феномен, который участвует в многочисленных физиологических процессах, включая эмбриональное развитие, заживление ран и иммунных реакций (для обзора см 3). Тем не менее, способность к миграции также является необходимым условием для опухолевые клетки к метастазированию (для обзора посмотреть 3,4).

Миграция клеток является сложным, еще не полностью изучены процесс, который направлен на взаимодействие нескольких путей передачи сигналов по инициативе различных лиганда (например, цитокины, хемокины, факторы роста, гормоны, компоненты внеклеточного матрикса) рецепторов (например, рецептор тирозинкиназы, рецепторы хемокинов, интегрины) взаимодействий 5, в конечном счете, вызывающие реорганизацию цитоскелета одновременно с де- и повторной сборки фокальной адгезии комплексов и интегрином-опосредованной сигнализации 6.

Для анализа клеточной миграции несколько в пробирке и в естественных условиях миграции клеток анализов были разработаны в последние десятилетия, в том числе Бойден камера / Transwell анализа 7, царапины анализ / заживления ран анализа 8-10, трехмерная ( 3D) коллагеновой матрицы миграции анализ 11, а также прижизненной визуализации / микроскопии (обзор см 12). Каждый из этих миграции клеток анализов имеет плюсы и минусы, например, в отношении расходов и необходимость оборудования, обработки или надежность полученных данных.

И Бойден камера / Transwell анализ и царапины анализ / заживления ран анализ легко, недорогой и хорошо развитые анализы для измерения клеточной миграции в пробирке 7-10. В камере Boyden / Transwell анализов клетки высевают на вершине вставки, содержащий пор (примерно 8 мкм в диаметре) - так называемого верхнего отсека 7. Дополнительно, вставка может быть покрыта внеклеточного мКомпоненты Atrix, например, фибронектин, коллаген и т.д., чтобы имитировать более физиологической среде. Кроме того, эндотелиальные клетки могут быть выращены на верхней части вставки, таким образом, имитируя эндотелиальных клеток барьер 13. Те клетки, которые прошли через поры в течение определенного интервала времени в нижнем отсеке, несущего носители и добавки, такие как факторы роста и хемокины, которые используются в качестве считывания для количественной оценки миграции клеток (или экстравазации).

В царапинам анализа / заживления ран анализов клетки высевают в виде пластин и выращивали до слияния 10. В зависимости от экспериментальных условий пластин может быть предварительно покрыта компонентов внеклеточного матрикса, таких как фибронектин. После создания царапины / раны путем соскабливания Клеточный монослой отдельные клетки с каждой стороны от нуля / рана может мигрировать в зазор, тем самым заполнение / заживления, что 10. Расстояние между двумя сторонами царапины / ран определяетсяв зависимости от времени и используется в качестве считывания для миграционной активности клеток 10. Тем не менее, различать клеточной пролиферации (который также может привести к заправочной / заживления царапин / раны) и миграции клеток рекомендуется сочетать анализ с покадровой видео микроскопия и одна ячейка отслеживания 10.

Однако, как Бойден камера / Transwell анализ и царапин анализ / заживления ран анализа, довольно несовершенное по поводу физиологического типа клеточной среде. В камере Boyden / анализов клетки Transwell должны мигрировать через пластиковую поры, в то время как в пустом анализа / заживления ран опробования клетки высевают на двумерной предварительно покрытых пластиковой пластины. Кроме того, она хорошо известна, что миграционное поведение заметно отличается от двумерной и 3D среде 3. Например, трехмерная-матричные спайки фибробластов отличаться от координационных и фибриллярных спаек, характеризующихся на двамерные субстраты в их содержании α5β1 и V 3 интегринов, паксиллин, других цитоскелета компонентов, и фосфорилирования тирозина фокальной адгезии киназы 14. Точно так же, клетки, встроенные в 3D-среде также отображается измененное миграционное поведение 15. Таким образом проанализировать миграцию клеток точнее миграции анализ целей рекомендуется позволяющая измерять миграцию отдельных клеток в 3D-физиологической или физиологическая-среде.

Прижизненные изображения / микроскопия является золотым стандартом для измерения клеточной миграции в 3D-физиологическом аспекте. Это не только относится к внеклеточным матриксом-клеточных взаимодействий, но и взаимодействий между различными типами клеток, таких как опухолевые клетки и эндотелиальных клеток в течение 16 или экстравазации торговли лимфоцитов в лимфатическом узле 17, который, на сегодняшний день, возможно за счет улучшенные методы флуоресцентной микроскопии, такие как 2-фотонаконфокальной лазерной сканирующей микроскопии, использование жизненно важных красителей и флуоресцентных трансгенных линий мышей, экспрессирующих флуоресцентные белки производные 12,16,17. Кроме того, прижизненной визуализации / микроскопия может быть в сочетании с ручной и автоматизированной клеток отслеживания 18. Однако, в связи с необходимостью из 2-фотона конфокальной лазерной сканирующей микроскопии, а также животных (и соответствующих трансгенных животных моделях) прижизненной визуализации / микроскопии является метод довольно дорогостоящим.

Чтобы преодолеть ограничения на Бойдена камеры / Transwell анализа и царапины анализ / заживления ран анализа и анализа миграции различных типов клеток в 3D-среде 3D коллагеновый матрикс миграции был разработан анализ 11,19. Таким образом, мигрирующие клетки, встроенные в 3D сети коллагеновых волокон, которые больше напоминает в в естественных условиях обстановки. Совместно, в связи с покадровой видео микроскопии миграции в реальном клеток измеряется позволяя установнация из нескольких параметров миграции, а также их изменения в ответ на про-миграционных факторов или ингибиторов. Различные типы клеток могут быть проанализированы с помощью этой техники, в том числе лимфоцитов и лейкоцитов, 11,20 / гемопоэтических стволовых клеток-предшественников 21-24 и опухолевых клеток 5,25-29. В дополнение к одиночных клеток также кластеры клеток или сфероидов может быть встроен в коллагеновой матрицы, одновременно с анализом эмиграции отдельных клеток от клеток кластера / сфероида в коллагена решетки 30,31.

Этот протокол представляет обзор о простой, но мощной техники для анализа миграционное поведение различных типов клеток в 3D-среде - методом в пробирке уступая в результатах, которые близки к в естественных условиях ситуации.

протокол

1 Подготовка миграции палат

  1. Подготовьте парафин / вазелин (1: 1) смесь и тепла, пока смесь растает. Использование Кисти малярные и привлечь 2-3 слоев парафина / вазелином (1: 1) смешать в середине стекло согласно рис 1B-1D.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мы используем общие предметные стекла (76 х 26 х 1,0-1,5 мм (Ш / Д / В))
  2. Применить расплавленный парафин / вазелин смесь быстро на стекло, чтобы избежать кристаллизации во время рисования. Убедитесь, что слой желе парафиновый воск / петролейный около 2-2,5 см в длину и 0,3-0,5 см в ширину. Толщина желе слоем парафина / петролейный должна быть около 0,1-0,15 см.
  3. Добавить покровное к затвердевший парафин / вазелин смеси и запечатать его с 2:58 слоев твердого парафина / вазелин микс (рис 1E, 1F). Используйте 4-8 миграции камер для эксперимента общей клеточной миграции. Место миграции камеры Iп вертикальное положение в стойке.

2 Подготовка Cell Mix Подвеска коллагена

  1. Урожай (например, с 0,25% Трипсин / ЭДТА) и рассчитывать клетки интерес. Ресуспендируют клеток в полной среде, содержащей фетальной телячьей сыворотки (FCS), антибиотиков и рекомендуемые добавки. Подготовьте 4-8 1,5 мл реакционных труб и 20 мкл клеточной суспензии, содержащей 4-6 × 10 4 клеток (общее число клеток, зависит от типа клеток для анализа) и заполнить до 50 мкл с полной среде.
    Примечание: Дополнительные соединения (например, факторы роста, хемокины, ингибиторы и т.п.) добавляют к суспензии клеток. С помощью соответствующих исходных растворов так, чтобы конечный объем клеточной суспензии не превышает 50 мкл.
  2. Подготовить общую сумму 452 мкл окончательного суспензии коллагена в течение четырех экспериментов миграции клеток. Добавить 50 мкл 10х MEM (рН 5,1-5,5) и 27 мкл 7,5% раствора бикарбоната натрия (рН 9,0-9,5) В 1,5 мл реакционной трубы и тщательно перемешать. Соблюдайте цветовом решении поворот от желто-оранжевого до интенсивного фиолетового (рН 9,0-9,5). Добавить 375 мкл жидкости суспензии коллагена в 10 раз MEM / раствором бикарбоната натрия и тщательно перемешать. РН конечного коллагена суспензии должна быть около 7,5 (обозначено светло-пурпурного цвета).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Проверьте рН 7,5% раствора бикарбоната натрия. Если рН около 7,5 местом раствор бикарбоната натрия с открытой крышкой в инкубаторе (37 ° С, 5% СО 2), чтобы быть насыщенной СО 2 и повышения рН (около 9,0 - 9,5). РН коллагена смеси суспензий клеточных имеет решающее значение для стабильности коллагена сети. Если оно слишком низкое коллаген решетка рухнет во время эксперимента миграции клеток.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для этого протокола, использовать жидкий коллаген (рН 1,9-2,2) от бычьего ланью (2,9-3,3 мг / мл коллагена; 95% коллаген типа I, 5% коллаген типа IV). Примеры протоколов подготовки решетки дополнительно коллагена с использованиемколлаген типа I из других источников, таких как свиньи или крысы, приведены в 32,33. Не изменяйте объемы используемых решений, так как это приведет к изменению конечной концентрации коллагена 1,67 мг / мл решетки. Выше или ниже концентрация коллагена влияет на плотность коллагеновых волокон и среднее расстояние между ними сопутствующей с клетками миграционное поведение 34.
  3. Добавить 100 мкл конечного суспензии коллагена к суспензии 50 мкл клеток и смешать thoroughly.The окончательного коллагена суспензии (1,67 мг / мл коллагена) является слегка вязкая. Чтобы передать необходимое количество (100 мкл), пипетки окончательное решение коллагена один раз вверх и вниз, до передачи его в клеточной суспензии.
    Примечание: После того, как смесь коллагена суспензии клеток в сочетании с 10-кратным раствором бикарбоната MEM / натрия и величина рН была изменена на 7,5 коллагеновые волокна сразу же начинают полимеризацию.
  4. Трансфер окончательный микс коллаген суспензии клеток от гое реакционные трубы к миграции камер. Аккуратно нажмите на камеру миграции в равной степени распределить смесь коллагена клеточной суспензии на нижней части камеры миграции (рисунок 1H). Поместите миграции камеры в вертикальном положении в стойке, и инкубируют в течение примерно 30 мин (37 ° С, 5% СО 2), чтобы позволить полимеризацию коллагеновых волокон.
  5. Обратите внимание, что полимеризуется коллаген решетка слегка мутная, но все же светло-фиолетовый цвет. Заполните миграционные камеры с полной среде или полной среде с добавками интересов и запечатать миграции камеру с парафин / вазелином смеси (Цифры 1I, 1J).

3 Запись и анализ миграции клеток

В этом разделе описывается запись миграции клеток путем покадровой видео микроскопии и анализа миграции клеток путем отслеживания ручной клеток.

  1. Включите микроскопом и столик микроскопа слухтер. Регулировка температуры до 37 ° С. Используйте цели 10X. Поместите миграции камеру под микроскопом и сосредоточиться около 50 клеток или более в поле зрения.
  2. Запись миграции клеток в режиме покадровой помощью программного приложения видеонаблюдения с нескольких камер. Сохранить миграции клеток фильмы в соответствующем формате, например, "* .avi" или "* .mov". Ссылка файлов миграции клеток ролика в базе данных, содержащей вспомогательную информацию, например, типа клеток и экспериментальных условиях.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мы записываем лимфоциты и HSPCs до 2 часов с использованием коэффициента покадровой 1:80, что означает, что 0,75 сек в покадровой равна 1 мин в режиме реального времени. Опухолевые клетки медленно движущихся клетки и, таким образом, записал, по крайней мере 16 часов, используя коэффициент покадровой 1: 1800 (0,5 сек в покадровой равна 15 мин в режиме реального времени).
  3. Анализ миграции клеток фильмы помощью соответствующего программного обеспечения приложение отслеживания клеток, как программных плагинов ImageJ(Обзор приведен в 18). Для непредвзятого анализа имеет решающее значение, что клетки будут случайным образом выбраны без ведома клетки являются ли миграционная активным или нет.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мы используем самостоятельно разработанные приложения программного обеспечения вручную отслеживать пути не менее 30 клеток на эксперименте, следуя движущихся клеток точно с помощью курсора мыши (который расположен к ядру). Хотя отслеживание, ху координаты гусеничных клеток определяются автоматически в соответствии с режимом, используемым покадровой. Для лимфоцитов / HSPCs ху-координаты определяются каждый 0,75 сек (равный 1 мин реальном времени), в то время как для опухолевых клеток ху координаты определяются каждый 0,5 сек (равный 15 мин реальном времени).
  4. Определите в общей сложности 60 XY-координат в ячейке для типичного эксперимента миграции клеток. Это равно 1 ч в режиме реального времени для лимфоцитов / HSPCs и 15 ч в режиме реального времени для опухолевых клеток. "," Указывает на то, что клетки не перемещается между TWо временных точек, в то время как "числового значения" указывает расстояние в "пикселей" клетка перемещают между 2 временных точках (Рисунок 2А).
    ПРИМЕЧАНИЕ: отслеживание Руководство клеток требуется опыт. Особенно быстро мигрирующие клетки трудно отследить и каждый тип клеток экспонат отличается миграционное поведение, что может быть вызвано, дополненных факторов. В случае деления клеток, при движении камеры, случайным образом выбирать один дочерней клетки для продолжения отслеживания. Клетки, которые мигрируют из смотрового поле или умереть в то время как отслеживание не пренебречь, но считаются для анализа.

Анализ 4. данных

  1. Анализ данных отслеживания клеток с использованием соответствующего программного приложения, например, электронные таблицы.
    1. Анализ данных отслеживания клеток путем копирования ячейку отслеживания необработанных данных (Рисунок 2А), в собственной разработки шаблона электронной таблицы. Умножьте сумму "числовыми значениями", представляющиеобщее расстояние клеток мигрировал с поправочный коэффициент для преобразования "пиксель" в "мкм".
    2. Определите два параметра миграции клеток: двигательную активность (что эквивалентно скорости миграции) и время активного движения (рис 2в, 2г).
    3. Определение клеток, которые мигрировали меньше, чем 25 мкм (пороговый уровень, чтобы уменьшить количество ложно-положительных клеток) в качестве неподвижных клеток. Заменить "числовые значения» этих клеток с ",".
      ПРИМЕЧАНИЕ: Параметр "двигательной активности" (или скорость миграции) представляет собой процент клеток отслеживаемой клеточной популяции, которые перешли между двумя точками времени (Рисунок 2D). "Числовое значение" определяется как движущейся клетки, в то время как "," определяется как не движется клетки. Параметр "время активного движения" (время активно) представляет собой процент от общего времени клетка перекочевал в ренодательство в сроки от периода наблюдения (Рисунок 2C). "Числовое значение" указывает на то, что клетка переместилась, в то время как "," указывает на то, что клетки не перемещается. Этот параметр используется в дальнейшем для определения количества клеток, которые еще не перешли.
  2. Рассчитать статистической значимости и миграционных данных БС.
    1. Расчет статистической значимости средней двигательной активности клеток (скорость миграции) с использованием теста Манна-Уитни U. Рассмотрим р-значение <0,05 как значительное.
    2. Дисплей среднего двигательную активность клеток, как ху-диаграммы, BoxPlot схемы или в виде гистограммы диаграмме. Дисплей данные одноклеточные основе, такие как время активного движения или скорость, в виде гистограммы схеме или в виде гистограммы.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если выбранный редактор электронных таблиц программа не содержит BoxPlot диаграммы или гистограммы диаграммы инструмент онлайн поиск должен быть проведен в течение ищете подходящего ТУtorials.

Результаты

Используется 3D-коллагеновый матрикс анализа миграции в сочетании с покадровой видео-микроскопии и отслеживания клеток с помощью компьютера позволяет для определения различных параметров миграции клеток в том числе как параметра населения на основе (например, средней двигатель?...

Обсуждение

Способность мигрировать является отличительной чертой опухолевых клеток 4. Без способности отделить от первичной опухоли и мигрировать через окружающие соединительной ткани опухолевых клеток не будет возможности раздавать вторичных поражений, которые являются основной причи...

Раскрытие информации

The authors declare that they have no competing financial interests.

Благодарности

This work was supported by the Fritz-Bender-Foundation, Munich, Germany

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Name of Material/ EquipmentCompanyCatalog NumberComments/Description
Leica DM IL inverted microscopeLeica, Wetzlar, Germany
Microscope stage heaterDistelkamp Electronic, Kaiserslautern, Germany
JVC C1431 video cameraJVC, Bad Vilbel, Germany
Axis 241Q video serverAxis communication GmbH, Ismaning, Germany
Mac G5 ComputerApple Macintosh
iMacApple Macintosh
FileMaker ProFileMaker GmbH, Unterschleißheim, Germany
Multi-camera video surveillance software(Security Spy)Bensoftware, London, UK
Runtime Revolution Media 2.9.0RunRev Ltd., Edinburgh, UK
ParaffinApplichem GmbH, Darmstadt, GermanyA4264
Petrolatum jellylocal drug store
Purecol (liquid collagen)Nutacon BV, Leimuiden, The Netherlandscontains 2.9-3.3 mg/ml bovine collagen (95% collagen type I, 5% collagen type IV)
10x MEMSigma Aldrich, Taufkirchen, GermanyM0275
7.5% Sodium Bicarbonate solutionSigma Aldrich, Taufkirchen, GermanyS8761
EGFSigma Aldrich, Taufkirchen, GermanyE9644
U73122Merck Millipore, Darmstadt, Germany662035dissolve first in CHCL3; reconstitute in DMSO just prior to use

Ссылки

  1. Dittmar, T., Zänker, K. S. . Cell Fusion in Health and Disease. 1, (2011).
  2. Dittmar, T., Zänker, K. S. . Cell Fusion in Health and Disease. 2, (2011).
  3. Petrie, R. J., Doyle, A. D., Yamada, K. M. Random versus directionally persistent cell migration. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10, 538-549 (2009).
  4. Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
  5. Heyder, C., et al. Role of the beta1-integrin subunit in the adhesion, extravasation and migration of T24 human bladder carcinoma cells. Clin. Exp. Metastasis. 22, 99-106 (2005).
  6. Mitra, S. K., Hanson, D. A., Schlaepfer, D. D. Focal adhesion kinase: in command and control of cell motility. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 56-68 (2005).
  7. Boyden, S. The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes. J. Exp. Med. 115, 453-466 (1962).
  8. Haudenschild, C. C., Schwartz, S. M. Endothelial regeneration. II. Restitution of endothelial continuity. Lab. Invest. 41, 407-418 (1979).
  9. Todaro, G. J., Lazar, G. K., Green, H. The initiation of cell division in a contact-inhibited mammalian cell line. J. Cell. Physiol. 66, 325-333 (1965).
  10. Liang, C. C., Park, A. Y., Guan, J. L. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nat. Protoc. 2, 329-333 (2007).
  11. Friedl, P., Noble, P. B., Zänker, K. S. Lymphocyte locomotion in three-dimensional collagen gels. Comparison of three quantitative methods for analysing cell trajectories. J. Immunol. Methods. 165, 157-165 (1993).
  12. Pittet, M. J., Weissleder, R. Intravital imaging. Cell. 147, 983-991 (2011).
  13. Akedo, H., Shinkai, K., Mukai, M., Komatsu, K. Establishment of an experimental model for tumor cell invasion and potentiation and inhibition of the invasive capacity. Gan To Kagaku Ryoho. 14, 2048-2055 (1987).
  14. Cukierman, E., Pankov, R., Stevens, D. R., Yamada, K. M. Taking cell-matrix adhesions to the third dimension. Science. 294, 1708-1712 (2001).
  15. Friedl, P., Brocker, E. B. The biology of cell locomotion within three-dimensional extracellular matrix. Cell. Mol. Life Sci. 57, 41-64 (2000).
  16. Kienast, Y., et al. Real-time imaging reveals the single steps of brain metastasis formation. Nat. Med. 16, 116-122 (2010).
  17. Miller, M. J., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100, 2604-2609 (2003).
  18. Meijering, E., Dzyubachyk, O., Smal, I. Methods for cell and particle tracking. Methods Enzymol. 504, 183-200 (2012).
  19. Shields, E. D., Noble, P. B. Methodology for detection of heterogeneity of cell locomotory phenotypes in three-dimensional gels. Exp. Cell Biol. 55, 250-256 (1987).
  20. Entschladen, F., Gunzer, M., Scheuffele, C. M., Niggemann, B., Zanker, K. S. T lymphocytes and neutrophil granulocytes differ in regulatory signaling and migratory dynamics with regard to spontaneous locomotion and chemotaxis. Cell. Immunol. 199, 104-114 (2000).
  21. Kasenda, B., et al. The stromal cell-derived factor-1alpha dependent migration of human cord blood CD34 haematopoietic stem and progenitor cells switches from protein kinase C (PKC)-alpha dependence to PKC-alpha independence upon prolonged culture in the presence of Flt3-ligand and interleukin-6. Br. J. Haematol. 142, 831-845 (2008).
  22. Kassmer, S. H., et al. Cytokine combinations differentially influence the SDF-1alpha-dependent migratory activity of cultivated murine hematopoietic stem and progenitor cells. Biol. Chem. 389, 863-872 (2008).
  23. Seidel, J., et al. The neurotransmitter gamma-aminobutyric-acid (GABA) is a potent inhibitor of the stromal cell-derived factor-1. Stem Cells Dev. 16, 827-836 (2007).
  24. Weidt, C., Niggemann, B., Hatzmann, W., Zanker, K. S., Dittmar, T. Differential effects of culture conditions on the migration pattern of stromal cell-derived factor-stimulated hematopoietic stem cells. Stem Cells. 22, 890-896 (2004).
  25. Balz, L. M., et al. The interplay of HER2/HER3/PI3K and EGFR/HER2/PLC-gamma1 signalling in breast cancer cell migration and dissemination. J. Pathol. 227, 234-244 (2012).
  26. Berndt, B., et al. Fusion of CCL21 non-migratory active breast epithelial and breast cancer cells give rise to CCL21 migratory active tumor hybrid cell lines. PLoS ONE. 8, e63711 (2013).
  27. Dittmar, T., et al. Induction of cancer cell migration by epidermal growth factor is initiated by specific phosphorylation of tyrosine 1248 of c-erbB-2 receptor via EGFR. FASEB J. 16, 1823-1825 (2002).
  28. Ozel, C., et al. Hybrid cells derived from breast epithelial cell/breast cancer cell fusion events show a differential RAF-AKT crosstalk. Cell Commun Signal. 10, (2012).
  29. Katterle, Y., et al. Antitumour effects of PLC-gamma1-(SH2)2-TAT fusion proteins on EGFR/c-erbB-2-positive breast cancer cells. Br. J. Cancer. 90, 230-235 (2004).
  30. Friedl, P., et al. Migration of Coordinated Cell Clusters in Mesenchymal and Epithelial Cancer Explants in Vitro. Cancer Res. 55, 4557-4560 (1995).
  31. Keeve, P. L., et al. Characterization and analysis of migration patterns of dentospheres derived from periodontal tissue and the palate. J. Periodontal Res. 48, 276-285 (2013).
  32. Kreger, S. T., et al. Polymerization and matrix physical properties as important design considerations for soluble collagen formulations. Biopolymers. 93, 690-707 (2010).
  33. Rajan, N., Habermehl, J., Cote, M. F., Doillon, C. J., Mantovani, D. Preparation of ready-to-use, storable and reconstituted type I collagen from rat tail tendon for tissue engineering applications. Nat. Protoc. 1, 2753-2758 (2006).
  34. Friedl, P., et al. Migration of Highly Aggressive MV3 Melanoma Cells in 3-Dimensional Collagen Lattices Results in Local matrix Reorganization and Shedding of alpha2 and alpha1 Integrins and CD44. Cancer Res. 57, 2061-2070 (1997).
  35. Falasca, M., et al. Activation of phospholipase C gamma by PI 3-kinase-induced PH domain-mediated membrane targeting. EMBO J. 17, 414-422 (1998).
  36. Palm, D., et al. The norepinephrine-driven metastasis development of PC-3 human prostate cancer cells in BALB/c nude mice is inhibited by beta-blockers. Int. J. Cancer. 118, 2744-2749 (2006).
  37. Melhem-Bertrandt, A., et al. Beta-blocker use is associated with improved relapse-free survival in patients with triple-negative breast cancer. J. Clin. Oncol. 29, 2645-2652 (2011).
  38. Dittmar, T., Heyder, C., Gloria-Maercker, E., Hatzmann, W., Zanker, K. S. Adhesion molecules and chemokines: the navigation system for circulating tumor (stem) cells to metastasize in an organ-specific manner. Clin. Exp. Metastasis. 25, 11-32 (2008).
  39. Berndt, B., Zanker, K. S., Dittmar, T. Cell Fusion is a Potent Inducer of Aneuploidy and Drug Resistance in Tumor Cell/ Normal Cell Hybrids. Crit. Rev. Oncog. 18, 97-113 (2013).
  40. Dittmar, T., Nagler, C., Niggemann, B., Zänker, K. S. The dark side of stem cells: triggering cancer progression by cell fusion. Curr.Mol. Med. 13, 735-750 (2013).
  41. Polacheck, W. J., Charest, J. L., Kamm, R. D. Interstitial flow influences direction of tumor cell migration through competing mechanisms. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 108, 11115-11120 (2011).
  42. Haessler, U., Teo, J. C., Foretay, D., Renaud, P., Swartz, M. A. Migration dynamics of breast cancer cells in a tunable 3D interstitial flow chamber. Integr. Biol. 4, 401-409 (2012).
  43. Zervantonakis, I. K., et al. Three-dimensional microfluidic model for tumor cell intravasation and endothelial barrier function. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 109, 13515-13520 (2012).
  44. Alberts, B., et al. . The extracellular matrix of animals. , (2002).
  45. Humphries, J. D., Byron, A., Humphries, M. J. Integrin ligands at a glance. J. Cell Sci. 119, 3901-3903 (2006).
  46. Reyes-Reyes, M., Mora, N., Gonzalez, G., Rosales, C. beta1 and beta2 integrins activate different signalling pathways in monocytes. Biochem. J. 363, 273-280 (2002).
  47. Di Lullo, G. A., Sweeney, S. M., Korkko, J., Ala-Kokko, L., San Antonio, J. D. Mapping the ligand-binding sites and disease-associated mutations on the most abundant protein in the human, type I collagen. J. Biol. Chem. 277, 4223-4231 (2002).
  48. Mempel, T. R., et al. Regulatory T cells reversibly suppress cytotoxic T cell function independent of effector differentiation. Immunity. 25, 129-141 (2006).
  49. Reiner, T., Earley, S., Turetsky, A., Weissleder, R. Bioorthogonal small-molecule ligands for PARP1 imaging in living cells. Chembiochem. 11, 2374-2377 (2010).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

923D

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены