Мышиные Полная толщина кожи Трансплантация

Резюме

Мышиные полная толщина трансплантация кожи является хорошо известной моделью для изучения отказа в установке аллоиммунная. Здесь мы предоставляем учебник каждого шага, участвующих в выполнении / с BALB -> C57BL / 6 всю толщину трансплантата кожи.

Аннотация

Мышиные полная толщина трансплантация кожи является хорошо создана в естественных условиях модель для изучения аллоиммунная реакции и отторжения трансплантата. Несмотря на ограниченное применение для человека, трансплантация кожи у мышей широко применяется для исследования трансплантации. Процедура проста в освоении и выполнять, и это не требует тонких методов микрохирургических, ни интенсивное обучение. Кроме того, отторжение трансплантата в этой модели имеет место в очень воспроизводимым иммунологической реакции и легко контролировать путем непосредственного осмотра и пальпации. Кроме того, вторичная трансплантация кожи с донорскими соответствием или третьей стороной кожи трансплантаты могут быть выполнены на более сложные модели трансплантации в качестве альтернативы и несложный метод оценки донорского-специфической толерантности. Осложнения низкие, и в общем случае ограничено анестезии передозировки или респираторного дистресс-синдрома после процедуры. отказ привитые, с другой стороны, происходит обычно в результате плохой подготовки гркормовой части, неправильное положение в привитой постели, или несоответствующее размещение повязки. В этой статье мы приводим протокол для полной толщины пересадки кожи у мышей и описывают важные шаги, необходимые для успешной процедуры.

Введение

Трансплантация органов является методом выбора при лечении больных с недостаточностью терминальной стадии органов, а также исходы значительно улучшилось с прогрессом в области хирургических процедур и протоколов иммуносупрессии. Тем не менее, длительное подавление иммунитета связано со значительными побочными эффектами, а также разработка новых стратегий, способствующих толерантности остается целью современных исследований трансплантации.

Многочисленные животные модели были разработаны для фундаментальных исследований в области трансплантации, чтобы изучить механизмы отторжения трансплантата и испытать иммуносупрессии подходы для предотвращения отторжения трансплантата и для содействия долгосрочному толерантности ^1-3. Мышиные модели стали основой иммунологического исследований в связи с исключительной и обширной доступности диагностических и терапевтических антител и четко определенных инбредных и трансгенных линий. Пересадка кожи является простая процедура, которая не требует специальных навыков микрохирургических и можетлегко контролировать в послеоперационном периоде. Взятые вместе, трансплантация кожи мыши была исключительным инструментом для изучения многих аспектов , участвующих в реакции аллоиммунная, включая доставку антигена, незаконный оборот клеток и разрушения тканей во время отторжения трансплантата ^4,5.

Здесь мы покажем процедуру шаг за шагом для полной толщины пересадки кожи с использованием модели мыши, и мы опишем важные шаги, необходимые для успешного приживления пересаженного кожи.

протокол

Все процедуры были проведены в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных Национального института здоровья (NIH) и были одобрены Университета животных по уходу и использованию комитета Джона Хопкинса (JHUACUC) путем. Конкретные процедуры были выполнены в соответствии с утвержденными протоколами ACUC MO13M292 и MO13M370.

1. Донор Урожай кожи

1. Обезболить мыши-донора с изофлуран (индукционным испарителем на уровне 4%, обслуживание на 1 - 2% через конус мыши). Используйте носок вывода пинч рефлекс контролировать глубину анестезии.
2. Используя электрическую бритву, брить спину животного и дезинфицировать его с 10% повидон йода (например, Бетадин).
3. Используя стерильные ножницы, перчатки и асептики, донорские урожай кожи спины от бедра до шеи, с тупым на уровне рыхлой соединительной ткани.
4. Усыпить животное шейки дислокации после сбора урожаякожа трансплантат.
5. Под микроскопом, отделить соединительной ткани, жировой ткани, и panniculus carnosus из кожи спины с помощью тонких ножниц тенотомию. Panniculus carnosus представляет собой тонкий, прозрачный мышцы отвечают за подергивание движений кожи.
6. Использование стерильных инструментов, вырезать 15-мм х 15-мм трансплантаты из кожи спины для 10-мм х 10 мм до 15 мм х 15 мм привитого кровати.
7. Хранить трансплантатов на марли, смоченными стерильным фосфатно-солевом буфере (PBS) в чашке Петри на льду.
   Примечание: 8 - 10 трансплантаты могут быть получены из одной мыши-донора.

2. Получатель Пересадка кожи

1. Обезболить мышь получателя с изофлуран (индукционным испарителем на уровне 4%, обслуживание на 1 - 2% через конус мыши). Используйте носок вывода пинч рефлекс контролировать глубину анестезии.
2. Администрирование 0,02 мг / кг веса тела бупренорфина для послеоперационного обезболивания.
3. Бритье сторону задней части животного, где трансплантат WiLL быть вставлена ​​и дезинфицируют 10% повидон-йод.
4. Используя ножницы, вырезать 10 мм х 10 мм до 15 мм-х 15-мм квадратной кожи. Размер дефекта должен быть немного больше (10%), чем трансплантата. Вырезать так же поверхностно, насколько это возможно. Позаботьтесь, чтобы сохранить panniculus carnosus и сосуды. Panniculus carnosus можно отличить от основной лицевой панели его подвижности и кровеносных сосудов, которые работают поверхностные к нему.
5. Поместите трансплантат на привитой постели, избегая складок по краям.
6. Поместите 8 швов на углах и на середине каждого края. Для каждого шва, проходят через иглу трансплантата, а затем через panniculus carnosus трансплантата дну ниже окружающей кожи реципиента.
7. Снимите маску обезболивающий и пусть животное частично восстановиться после анестезии перед нанесением клеевой повязку.
8. Оберните мышь получателя в клеевой повязка с сложенную марлю над трансплантатом. Повязка путем объединения двух бинты, резкаклеевой состав одного и размещения двух впитывающие прокладки вместе.
9. Монитор мыши тесно во время восстановления, чтобы убедиться, что повязка не ограничивая грудную клетку экскурсии и дыхания. Снимите повязку, если частота дыхания снижается или животное начинает задыхаться или дыхание неглубоко.

3. Послеоперационный

1. Администрирование Энрофлоксацин 5 мг / кг после операции по поводу инфекции профилактики.
2. Поместите пересаженных мышь в чистой клетке над Microwavable грелку, пока она полностью не оправится от анестезии.
3. Соблюдайте мыши в течение 1 часа после операции до возвращения его к жилому объекту.
4. Через семь дней после операции, анестезию мыши, как на шаге 2.1. Снимите повязку путем разрезания только через брюшную сторону повязки.
5. Наблюдайте и ощупывать трансплантата на следующий день на наличие признаков струпьев, сокращения или твердости. Если он присутствует, трансплантат не может быть достигнуто надлежащее vascularizaции и следует рассматривать как технический сбой.
6. ежедневно контролировать на наличие признаков отторжения. Рассмотрим трансплантатов отвергнута при ≥90% от трансплантата ткани становится некротической.
7. Эвтаназии отклоненные животных и собирать их для анализа.

Результаты

Размещение повязкой на мыши-реципиента является важным шагом процедуры. Кожный трансплантат позиционируется на стволе получателя, между плеча, бедра и позвоночника (рисунок 1). Бандаж выполнен со сложенным марлю и сочетание двух пластиковых пластырей. Мышь п...

Обсуждение

С момента своего появления по Medawar, во- первых , в исследованиях на людях , а затем у кроликов и мышей, трансплантация кожи была бесценным моделью для изучения аллогенных иммунных ответов ^6,7. В этой рукописи, мы представляем модель крупномасштабного, не кровоснабжением, полную толщи...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Straight micro forceps	Sigma	F4017
Curved micro forceps	Aesculap	BD333R
Curved Stevens tenotomy scissors	Aesculap	BC905R
Mayo dissecting scissors	Sigma	S3146
Micro needle holder	Aesculap	BM563R
Sterile gauze	Covidien	441218
6-0 Nylon suture	MWI	31849
Plastic Strips Band-Aid	Johnson & Johnson		Obtained from pharmacy
10 cm Petri dish	Fisherbrand	FB0875712
PBS	Quality Biological	119069131
Buprenorphine			DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy
Enrofloxacin	Bayer Health Care	186599