쥐의 전체 두께 피부 이식

요약

쥐의 전체 두께 피부 이식은 동종 설정에 거부 반응을 연구하는 잘 확립 된 모델이다. > C57BL / 6 전층 피부 이식 - 여기, 우리는 BALB / C를 수행에 관련된 각 단계의 튜토리얼을 제공합니다.

초록

쥐의 전체 두께 피부 이식은 동종 반응과 이식 거부 반응을 연구하는 잘 설립 생체 내 모델입니다. 인간에게 제한된 응용 프로그램에도 불구하고, 마우스의 피부 이식 널리 이식 연구에 이용되고있다. 절차 배우고 수행하는 것이 용이하고, 섬세한 미세 수술 기술도 광범위한 훈련을 필요로하지 않는다. 또한,이 모델의 이식 거부는 매우 재현 면역 반응에서 발생하고 쉽게 직접 검사 및 촉진에 의해 모니터링된다. 또한, 기증자 일치 또는 타사 피부 이식 2 차 피부 이식은 다른 기증자 별 허용 오차를 평가하는 복잡하지 않은 방법으로 더 복잡한 이식 모델에서 수행 할 수 있습니다. 합병증은 낮으며 시술 후 마취 과다 복용 또는 호흡 곤란으로 제한 일반적이다. 이식 실패는 한편, GR의 불량한 제조의 결과로서 통상적으로 발생그래프트 침대에서 후미, 잘못된 위치, 또는 붕대의 부적절한 배치. 이 글에서, 우리는 생쥐에서 전층 피부 이식을위한 프로토콜을 제시하고 성공적인 수속에 필요한 중요한 단계를 설명합니다.

서문

장기 이식은 말기 장기 부전 환자에 대한 선택의 치료이며, 결과는 수술 절차 및 면역 억제 프로토콜의 발전에 현저하게 향상되었습니다. 그러나, 장기간의 면역 억제는 상당한 부작용과 연관 내성을 증진 새로운 전략의 개발은 현대 이식 연구의 목표로 남아있다.

많은 동물 모델은 이식 거부 반응의 메커니즘을 연구하는 면역 억제가 이식 거부 반응을 방지하기위한 장기 공차 ^1-3 촉진 접근 테스트 이식에 기초 연구 개발되어왔다. 마우스 모델에 의한 진단 및 치료 항체와 잘 정의 된 근친과 유전자 변형 종자의 독점과 광대 한 가용성 면역 학적 연구의 주류가되었다. 피부 이식은 특수 미세 수술 기술을 필요로 할 수없는 간단한 절차입니다쉽게 수술 후 모니터링 될 수있다. 함께 찍은, 마우스 피부 이식은 이식 거부 ^4,5 동안 항원 전달 세포 인신 매매, 조직 파괴를 포함하여 동종 응답에 관련된 여러 측면을 연구하는 뛰어난 도구가되고있다.

여기서는 마우스 모델을 이용하여 전체 두께 피부 이식을위한 단계별 과정을 보여, 우리는 이식 된 피부의 성공적인 생착에 필요한 중요한 단계를 설명한다.

프로토콜

모든 절차는 관리 및 국립 보건 연구소 (NIH)의 실험 동물의 사용에 대한 가이드에 따라 실시하고, 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용위원회 (JHUACUC)에 의해 승인되었다. 구체적인 절차는 승인 ACUC 프로토콜 MO13M292 및 MO13M370 하에서 수행 하였다.

1. 기증자 피부 수확

1. (- 마우스 콘을 통해 2 % 1에서 유지 보수, 4 %에서 유도 기화기) 이소 플루 란과 기증자 마우스를 마취. 마취의 깊이를 모니터하기 위해 발가락 핀치 철수 반사를 사용합니다.
2. 전기 면도기를 사용하면 동물의 뒤쪽을 면도하고 (예 Betadine) 10 %, 포비돈 요오드로 소독.
3. 유륜 결합 조직의 수준에서 무딘 절개와 멸균 가위, 장갑, 및 무균 기술, 목에 엉덩이에서 수확 기증자 다시 피부를 사용.
4. 수확 후 자궁 전위에 의해 동물을 안락사피부 이식.
5. 현미경, 미세 건 절단술 가위를 사용하여 다시 피부의 결합 조직, 지방 조직 및 panniculus의 카르노 서스를 구분합니다. panniculus의 카르노 서스 피부 경련의 움직임을 담당하는 얇은 투명 근육이다.
6. 멸균 악기의 기술을 사용하여, 15 mm X 15 mm 이식 침대로 10 mm × 10-mm에는 후면 피부에서 15 mm X 15 mm 이식을 잘라.
7. 얼음에 페트리 접시에 멸균 인산 완충 생리 식염수 (PBS)로 적신 거즈에 이식을 저장합니다.
   참고 : 8-10 이식 한 기증자 마우스에서 얻을 수 있습니다.

2.받는 사람 피부 이식

1. (- 마우스 콘을 통해 2 % 1에서 유지 보수, 4 %에서 유도 기화기) 이소 플루 란과받는 사람 마우스를 마취. 마취의 깊이를 모니터하기 위해 발가락 핀치 철수 반사를 사용합니다.
2. 수술 후 통증 완화를 위해 부 프레 놀핀의 0.02 ㎎ / ㎏ BW를 관리 할 수 ​​있습니다.
3. 동물의이면 측 면도 여기서 그래프트 WILL 삽입 될 10 % 포비돈 요오드 소독.
4. 가위를 사용하여 피부의 X 15 mm 광장 15 mm에 10 mm × 10-mm를 잘라. 결함 크기보다 그래프트 (10 %) 약간 커야한다. 같은 피상적으로 가능한 한 컷. panniculus의 카르노 서스과 혈관을 유지하기 위해주의하십시오. panniculus의 카르노 서스는 이동성과 그것을 피상적 실행 혈관에 의해 기본 밴드 구별 할 수 있습니다.
5. 가장자리를 따라 주름을 방지 그래프트 침대에 이식을 배치합니다.
6. 모서리에 각 모서리의 중간에 8 봉합을 배치합니다. 각각의 봉합사를 들어, 주변받는 사람의 피부 아래에 침대 이식의 panniculus의 카르노 서스를 통해 다음 이식을 통해 바늘을 통과.
7. 마취 마스크를 제거하고 동물이 접착 붕대를 적용하기 전에 마취에서 부분적으로 복구 할 수 있습니다.
8. 이식 접혀 거즈와 접착 붕대에받는 사람 마우스를 감싸. 절단, 두 붕대를 결합하여 붕대를 확인접착제의 하나의 부분과 함께 두 흡수 패드를 배치.
9. 붕대는 흉부 여행을 제한하고 호흡을하지 않는 것을 보장하기 위해 복구 중에 밀접하게 마우스를 모니터합니다. 호흡 속도가 감소 또는 동물이 얕게 말하다 또는 숨 시작하면, 붕대를 제거합니다.

3. 수술 후 케어

1. 감염 예방을위한 수술 후 enrofloxacin 5 ㎎ / ㎏을 관리 할 수 ​​있습니다.
2. 완전히 마취에서 회복 될 때까지 전자 레인지 가열 패드를 통해 깨끗한 케이지에 이식 된 마우스를 놓습니다.
3. 주택 시설에 반환에 수술 전에 1 시간 동안 마우스를 관찰합니다.
4. 세븐 일 수술 후, 단계 2.1에서와 같이 마우스를 마취. 붕대의 복부 측면을 통해 만 절단하여 붕대를 제거합니다.
5. 관찰하고 가피, 수축, 또는 경도의 증상에 대해 다음 날에 이식을 만져. 존재하는 경우, 이식은 적절한 vasculariza를 달성하지 않을 수 있습니다기와는 기술적 인 실패로 간주되어야한다.
6. 거절의 흔적을 매일 모니터링합니다. 이식 조직의 ≥90 %가 괴사 될 때 거부 이식을 고려한다.
7. 거부 된 동물을 안락사 및 분석을 수확.

결과

받는 사람 마우스의 붕대의 위치는 절차의 중요한 단계입니다. 피부 이식은 어깨, 고관절, 척추 (그림 1) 사이에,받는 사람 트렁크에 위치한다. 붕대 접혀 거즈와 두 개의 플라스틱 접착 붕대의 조합으로 이루어집니다. 받는 사람 마우스는 붕대의 중심에 거즈를 통해 아래로 이식으로 배치됩니다. 두 곡선의 마이크로 핀셋을 사용하여, 붕대의 하단부는 제 당겨...

토론

토끼와 생쥐에서 다음 인간 연구에서 제 메다에 의해 소개 된 이후, 피부 이식은 동종 면역 반응 ^6,7의 연구를위한 귀중한 모델이되고있다. 이 논문에서는 상하 다시 피부를 이용한 대규모의 비 혈관 전층 피부 이식 모델을 제시한다. 꼬리 피부 또는 이식 조직 공급원으로서 마우스 귀 피부 사용을 포함하는 다양한 다른 방법은, ^{8,9까지보고되고있다.} 이러한 모델은 단순 기술의 뚜?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Straight micro forceps	Sigma	F4017
Curved micro forceps	Aesculap	BD333R
Curved Stevens tenotomy scissors	Aesculap	BC905R
Mayo dissecting scissors	Sigma	S3146
Micro needle holder	Aesculap	BM563R
Sterile gauze	Covidien	441218
6-0 Nylon suture	MWI	31849
Plastic Strips Band-Aid	Johnson & Johnson		Obtained from pharmacy
10 cm Petri dish	Fisherbrand	FB0875712
PBS	Quality Biological	119069131
Buprenorphine			DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy
Enrofloxacin	Bayer Health Care	186599