JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

The present protocol describes the usefulness of multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH) and spectral karyotyping (SKY) in identifying inter-chromosomal stable aberrations in the bone marrow cells of mice after exposure to total body irradiation.

Аннотация

Ionizing radiation (IR) induces numerous stable and unstable chromosomal aberrations. Unstable aberrations, where chromosome morphology is substantially compromised, can easily be identified by conventional chromosome staining techniques. However, detection of stable aberrations, which involve exchange or translocation of genetic materials without considerable modification in the chromosome morphology, requires sophisticated chromosome painting techniques that rely on in situ hybridization of fluorescently labeled DNA probes, a chromosome painting technique popularly known as fluorescence in situ hybridization (FISH). FISH probes can be specific for whole chromosome/s or precise sub-region on chromosome/s. The method not only allows visualization of stable aberrations, but it can also allow detection of the chromosome/s or specific DNA sequence/s involved in a particular aberration formation. A variety of chromosome painting techniques are available in cytogenetics; here two highly sensitive methods, multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH) and spectral karyotyping (SKY), are discussed to identify inter-chromosomal stable aberrations that form in the bone marrow cells of mice after exposure to total body irradiation. Although both techniques rely on fluorescent labeled DNA probes, the method of detection and the process of image acquisition of the fluorescent signals are different. These two techniques have been used in various research areas, such as radiation biology, cancer cytogenetics, retrospective radiation biodosimetry, clinical cytogenetics, evolutionary cytogenetics, and comparative cytogenetics.

Введение

The two most reliable methods of identifying radiation-induced inter-chromosomal stable aberrations are multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH), which allows the painting of two or more chromosomes simultaneously, and spectral karyotyping (SKY), which imparts a distinct color to each homologous chromosome pair in the genome. Unlike unstable aberrations, stable aberrations are persistent in nature and may be propagated for several generations in irradiated populations1, and are regarded as critical molecular "signatures" of radiation-induced cytogenetic lesions2. Studies by various groups have shown that stable aberrations are associated with the pathogenesis and development of a number of diseases, including cancer3. Before the era of chromosome painting (also referred as molecular cytogenetics), the conventional G-banding technique was the only method for detecting stable chromosomal aberrations. However, chromosome banding is a challenge to cytogeneticists because the resolution is limited, reproducibility is uncertain, it is a labor-intensive procedure, and it requires highly skilled and experienced cytogeneticists for reliable data interpretation4. Moreover, the classic banding technique does not allow detection of complex chromosomal rearrangements, which involve the interaction of three or more breaks distributed among two or more chromosomes, a common outcome of radiation damage. Complex aberrations may persist in individuals many years after radiation exposure, making them useful for retrospective biodosimetry5. Therefore, an alternate approach was required to overcome the limitations of conventional banding techniques to detect stable chromosomal rearrangements.

In the late 1960s, the pioneering work of Gall and Pardue (1969) on molecular hybridization using nucleic acid probes labeled with radioactive material commenced a new era in the field of cytogenetics, which allowed detection of a specific DNA sequence on chromosomes6. However, the use of radioactive probes for molecular hybridization had several drawbacks: radioactive probes are relatively unstable, probe activity depends on radioactive decay of the isotope used, hybridization takes a longer time, the resolution is limited, the probes are relatively costly, and the radioactive materials are a health hazardous. Thus, it became necessary to develop and design non-radioactive probes. The introduction of fluorescent tagged nucleic acid probes in the 1980s and 1990s overcame the limitations of radioactive probes and greatly enhanced the safety, sensitivity, and specificity of the hybridization technique7-10. Fluorescent probes give rise to extremely bright signals when observed under fluorescence microscopes equipped with the appropriate excitation and emission filters. Any loss, gain, or rearrangement of fluorescent labeled chromosome/s or a part of the chromosome is easily identifiable with this FISH technique.

Analysis of chromosomal aberrations by FISH painting has led to marked progress in cytogenetic research over the years. Designing fluorescent labeled probes for specific applications ranging from locus-specific probes to whole-chromosome painting probes has advanced the field significantly; this has also facilitated the detection of submicroscopic ("cryptic") rearrangement, which was not possible by conventional chromosome banding. Chromosome painting by mFISH and SKY have proven to be valuable tools for the identification of simple and complex inter-chromosomal rearrangements. The basic principles for both techniques are similar, but the method of detection and discrimination of fluorescent signal after in situ hybridization and the process of image acquisition are different. In mFISH, separate images of each of the four fluorochromes are captured by using narrow bandpass microscope filters; dedicated software is then used to combine the images. While in SKY, image acquirement is based on a combination of epifluorescence microscopy, charge-coupled device imaging, and Fourier spectroscopy, which allows the measurement of the entire emission spectrum with a single exposure at all image points. In both mFISH and SKY, monochrome images are captured independently, then merged, and finally, unique pseudo-colors are assigned to the chromosomes in monochromatic images based on the specific dye attached to each fluorochrome probe.

The contribution of mFISH and SKY analysis in the radiation biology field is remarkable, particularly for retrospective dose estimation of human exposure to IR (radiation biodosimetry)11-14, radiation carcinogenesis risk assessment15, as well as detection and risk estimation of radiotherapy-related secondary cancer16. A recent study on mice has shown that a FISH-based chromosome painting technique is also an important tool for evaluating the efficacy of radiation countermeasure17. In the present study, the effect of total body radiation exposure on the induction of stable chromosomal aberrations in the bone marrow cells of mice has been demonstrated using mFISH and SKY techniques.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

Все исследования на животных проводились в строгом соответствии с рекомендациями, приведенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения. Протокол животных был одобрен Institutional Animal Care и использование комитета Университета Арканзаса для медицинских наук по. Все животные были размещены под стандартным кондиционированном вивария при температуре 20 ± 2 ° С с 10 - 15 часовых циклов свежего воздуха и свободный доступ к стандартной пище с грызунами и воды. По прибытии, были проведены мышей в карантине в течение 1 недели и при условии, сертифицированный корм для грызунов.

1.Radiation экспозиции и в естественных условиях Арест метафазных клеток

  1. Expose ун-наркозом мышей до 2 Гр излучения всего тела в камере облучения. При облучении мышей место в хорошо вентилируемом удерживающую камеру, чтобы убедиться, что они не двигаются свободно и получать равномерную дозу.
  2. Вводят 100 мкл 0,05% -ного раствора колхицина (сolchicine порошок растворяется в кальция и магния свободный PBS) внутрибрюшинно с помощью иглы 25 G прикрепленную с 1 мл одноразового шприца. Избегайте инъекции непосредственно в любой орган.
  3. Оставьте животное в клетке в течение 2-х часов до сбора клеток костного мозга. Обратите внимание на животное для каких-либо признаков боли или страданий.

2. клеток костного мозга для уборки урожая и выделение костного мозга мононуклеарных клеток путем центрифугирования в градиенте плотности

  1. Эвтаназии мышь СО 2 удушья.
  2. Спрей 70% этанола на спинной и брюшной стороне.
  3. Сделайте 2 см разрез на коже живота с острыми ножницами. Захватите кожу с обеих сторон разреза с тупыми пинцетом и аккуратно отогните мышцы живота.
  4. Отрезать обе задние ноги с ножницами и сразу же поместить их в предварительно охлажденный PBS с 4% FBS.
  5. Тщательно очистить все мышцы, прикрепленные к задней конечности с резким бритву и хлопка марлевую повязку.
  6. Отделите часть большеберцовой кости от бедренной кости. Обрежьте оба кончики каждой кости с бритву.
  7. Очистить содержимое костного мозга с 3 мл PBS (с 4% FBS) с помощью иглы 23 G, прикрепленную к 3 мл шприца и собирают содержимое в 15 мл центрифужную пробирку. Pass клеточной суспензии, по меньшей мере в 10 раз через иглу, чтобы сделать одну клеточную суспензию.
  8. Аккуратно наложения клеточной суспензии на равном объеме разделения лимфоцитами среды (3 мл), не нарушая границу раздела между клеточной суспензии и среды для разделения лимфоцитов. Центрифуга при 400 х г в течение 30 мин при комнатной температуре.
  9. Соберите поглощающее покрытие тщательно, не нарушая другие слои и передачи в новом 15 мл центрифужную пробирку.

3. Получение метафазе клеточных Спреды

  1. Добавьте 10 мл PBS на пробирку, содержащую поглощающее покрытие.
  2. Центрифуга при 400 х г в течение 5 мин при комнатной температуре.
  3. Осторожно удалите супернатант. Затем распадаются тон клеточный осадок с нежным постукивания и добавляют 10 мл PBS.
  4. Центрифуга при 400 х г в течение 5 мин при комнатной температуре.
  5. Удалить супернатант, не нарушая клеточный осадок, разбейте осадок, и добавить 4 мл подогретого гипотонического раствора хлорида 0,075 М калия. Добавить гипотонический каплю раствора по каплям при осторожном постоянном встряхивании.
  6. Инкубируйте клетки в течение 20 мин при 37 ° С в водяной бане.
  7. После гипотонической обработки, добавляют равный объем (4 мл) фиксирующих (метанол: лед ную уксусную кислоту, 3: 1 об / об) в 15 мл пробирку и осторожно перемешивают путем переворачивания пробирки.
  8. Центрифуга при 400 мкг в течение 5 мин при комнатной температуре и отбросить супернатант.
  9. Перерыв осадок клеток с последующим нарезания резьбы нежном вихре в течение нескольких секунд и добавьте 3 мл раствора закрепителя капли по капле с постоянным встряхиванием.
  10. Инкубировать в течение 30 мин при комнатной температуре, а затем центрифуге при 400 мкг в течение 5 мин.
  11. Удалить супернатант, разбейте осадок клеток с джентльменомле постукивание, и добавьте 3 мл свежей закрепитель.
  12. Центрифуга при 400 мкг в течение 5 мин при комнатной температуре, и удалить супернатант. Разбейте осадок клеток с нежным постукивания, и добавить свежий 3 мл закрепитель.
  13. Повторите шаг 3.12 раза больше.
  14. Центрифуга при 400 х г в течение 5 мин при комнатной температуре, и удаления надосадочной жидкости, не нарушая клеточный осадок. Затем добавьте 400 до 600 мкл закрепителя и тщательно перемешать с пипеткой.
  15. Отбросьте 30 мкл фиксированных клеток на предварительно очищенную и влажных горками, наклоненными под углом 45 ° и позволяют слайды высохнуть на воздухе полностью в течение ночи.

4. Мышь Хромосома Картина mFISH

  1. Хромосома Денатурация
    1. Поместите слайд, содержащий метафазных клеток спреды в 2х SSC в течение 2 мин при комнатной температуре.
    2. Обезвоживают слайде последовательного промывания этанолом в течение 2 мин, каждый в 70%, 80% и 100%. Инкубировать в течение 60 мин при 65 ° С.
    3. Разогреть 40 мл раствора денатурации (70% формамид / 2х ССC; рН 7,0) до 70 ° С (± 2 ° С) в стеклянной Коплин банку в течение 30 мин. Денатурации хромосом путем инкубирования слайд в подогретого раствора денатурации в течение 1 - 1,5 мин.
    4. Угашайте скользить сразу в охлажденном льдом 70% этаноле в течение 2 мин, чтобы остановить процесс денатурации, а также, чтобы предотвратить денатурированный хромосомами от повторного отжига. Затем обезвоживают путем промывки 80% -ным этанолом в течение 2 мин. Повторите промывку этанол с 100% -ным этанолом в течение 2 мин. Полностью высушите скольжение при комнатной температуре.
  2. Денатурация и Гибридизация Probe смеси
    1. Кратко центрифугировать смесь зонд, поставляемый изготовителем, передача 10 мкл зонда смеси в 500 мкл оснастки колпачок центрифужную пробирку, и денатурируют путем инкубирования при 80 ° С (± 2 ° С) на водяной бане в течение 7 мин.
    2. Поместите центрифужную пробирку с зондом смеси в водяной бане при температуре 37 ° С в течение 10 мин.
    3. Нанесите смесь денатурированного зонда на слайд с денатурированным chromosoтез.
    4. Тщательно покрывают область с х 18 мм скольжением стеклянной крышкой 18 мм и устранить любые видимые пузырьки воздуха очень осторожно нажимая на крышку скольжения скользить. Уплотнение все четыре стороны крышки скольжением с резиновым клеем и инкубировать в течение 12 ч до 16 ч в темноте при 37 ° С в увлажненной камере для гибридизации.
  3. Сообщение Гибридизация стирке и обнаружения
    1. Осторожно снимите резиновый клей и покровное.
    2. Поместите слайд в подогретого 0.4x SSC при 74 ° С (± 2 ° С) в течение 5 мин.
    3. Вымойте слайд в моющем растворе II (4x SSC / 0,1% твин-20) в течение 2 мин.
    4. Поместите 20 мкл анти-выцветанию монтажной среде с DAPI контрастирующая (1,5 мкг / мл) и покрывают покровным стеклом. Осторожно нажмите на покровное с лабораторной тканью, чтобы удалить пузырьки воздуха и излишки раствора монтажа. Печать края покровного с лаком для ногтей.
    5. Просмотр слайдов с помощью флуоресцентного микроскопа, оборудованного соответствующими фильтрами.

5. Спектральный кариотипирование (SKY) мышиных хромосомах

  1. Хромосома и зонд денатурации
    1. Равновесие слайд в 2х SSC при комнатной температуре в течение 2 мин, без встряхивания.
    2. Высушить слайд в качестве серии этанола (70%, 80% и 100% этанола) в течение 2 мин каждый при комнатной температуре. Высушите слайд, чтобы полностью удалить этанол.
    3. Теплый 40 мл раствора денатурация (70% формамид / 2х SSC, рН 7,0) в стеклянной Коплин банку в течение 30 мин.
    4. Инкубировать слайд в предварительно нагреваемый денатурации в течение 1 мин до 1,5.
    5. Немедленно погрузить сползание в охлажденную льдом 70% этаноле в течение 2 мин, чтобы остановить процесс денатурации, а также, чтобы предотвратить денатурированный хромосомами от повторного отжига.
    6. Обезвоживают слайд, поместив его в 80% этаноле в течение 2 мин, а затем в 100% этаноле в течение 2 мин при комнатной температуре.
    7. Денатурации SKY зонда (пробирка # 1 поставляется производителем) на водяной бане до 80 ° С (± 2 ° C)в течение 7 минут, а затем сразу же поместить в другую ванну воды, установленной на 37 ° С в течение 10 мин.
  2. зонд гибридизация
    1. Добавьте 10 мкл денатурированного SKY зонда на денатурированных хромосом.
    2. Аккуратно поместите 18 мм х 18 мм покровного стекла на SKY зонда так, чтобы пузырьки воздуха не попали под покровное.
    3. Печать края покровного стекла с резиновым клеем.
    4. Поместите слайд в увлажненной светонепроницаемой камере и инкубировать в темноте при температуре 37 ° С в течение 24 ч до 36 ч.
  3. Пост-гибридизация стирке и флуоресцентным детектированием
    1. Удалите резиновый клей очень осторожно, не нарушая покровное.
    2. Поместите слайд в подогретого быстрого промывочного раствора (0.4x SSC) при 72 ° С (± 2 ° С) в течение 5 мин при постоянном встряхивании. Погрузите слайд в моющем растворе III (4x SSC / 0,1% Tween 20) и инкубировать в течение 1 мин при встряхивании.
    3. Необязательно: Добавьте 80 мкл блокирующего реагента(Пробирка # 2 поставляется производителем) на область гибридизации, место 24 мм х 60 мм пластиковой покровное и инкубировать в темноте при температуре 37 ° С в течение 30 мин в увлажненной камере.
    4. Аккуратно удалите пластиковую покровное и промойте слайд с предварительно нагретом (45 ° C) промывочного раствора III в течение 5 мин.
    5. Нанесите 80 мкл Cy5 окрашивания реагента (флакон # 3 поставляется производителем), место 24 мм х 60 мм пластиковой покровное и инкубировать при 37 ° С в темноте в течение 40 мин в увлажненной камере.
    6. Погрузите слайд в стеклянный сосуд, содержащий Коплин предварительно нагретом (45 ° С) промывочного раствора III (4x SSC / 0,1% твин-20) и инкубируют при 45 ° С в водяной бане в течение 2 мин при встряхивании. Повторите эту стадию промывки 3 раза.
    7. Нанесите 80 мкл Cy5.5 окрашивающего реагента (пробирка # 4 поставляется производителем), место 24 мм х 60 мм пластиковой покровное и инкубировать при 37 ° С в темноте в течение 40 мин в увлажненной камере.
    8. Вымойте слайд 3 раза с предварительно нагретом (45 ºC) моющий раствор III.
    9. Держите слайд в наклонном положении с бумажным полотенцем, чтобы слить лишнюю жидкость. Добавьте 20 мкл анти-выцветанию DAPI реагента (флакон № 5, поставляемый изготовителем) и аккуратно разместить 24 мм х 60 мм покровного стекла без введения каких-либо воздушных пузырьков. Печать края покровного с лаком для ногтей и наблюдать с эпифлуоресцентной микроскопа, снабженного для захвата изображений SKY.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

Общее облучение тела вызывает многочисленные хромосомных аберраций в клетках костного мозга облученных мышей. Текущий протокол оптимизирован для в естественных условиях митоза клеток костного мозга после радиационного облучения, урожай клеток костного мозга ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Несколько важных шагов определяют успех mFISH и SKY. Первый и самый важный шаг заключается в оптимизации лечения Колхицин в естественных условиях для митоза из мононуклеарных клеток костного мозга. Концентрация и лечение колхицином время индивидуально или совместно определяют мито?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

The authors declare that they have no competing financial interests.

Благодарности

Это исследование было поддержано Арканзас космических грантов консорциума и Национального института космических исследований биомедицинской через Национальное управление по аэронавтике и исследованию космического пространства, предоставляет NNX15AK32A (RP) и RE03701 (MH-J), и P20 GM109005 (MH-J), и администрация США ветеранов ( MH-J). Мы благодарим Кристофера Fettes, координатора программы Департамента охраны окружающей среды и гигиены труда в университете Арканзаса для медицинских наук, за редакционную помощь в подготовке рукописи.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
FormamideSigma-Aldrich221198-100ML
SSC Buffer 20× ConcentrateSigma-AldrichS6639-1L
SKY Laboratory Reagent for MouseApplied Spectral ImagingFPRPR0030/M40
CAD - Concentrated Antibody Detection KitApplied Spectral ImagingFPRPR0033
Single Paints Customized - 3 Colors; Mouse chromosome 1: Red, Mouse chromosome 2: Green, Mouse chromosome 3: AquaApplied Spectral ImagingFPRPR0182/10
Glass coverslipsFisher Scientific12-545B
Tween 20Fisher ScientificBP337-100
Hydrochloric acid, 37%, Acros OrganicsFisher ScientificAC45055-0025 
Fisherbrand Glass Staining Dishes  with Screw CapFisher Scientific08-816
KaryoMAX Potassium Chloride Solution Life Technologies10575-090
Fisherbrand Superfrost Plus Microscope SlidesFisher Scientific12-550-15
Colcemid powderFisher Scientific50-464-757 
Histopaque-1083 Sigma-Aldrich10831
Shepherd Mark I, model 25 137Cs irradiatorJ. L. Shepherd & AssociatesModel 484B
Syringe 1 mLBD Biosciences647911
Ethyl Alcohol, 200 ProofFisher ScientificMEX02761
PBS, (1x PBS Liq.), w/o Calcium and MagnesiumFisher ScientificICN1860454
Fetal Bovine SerumFisher Scientific10-437-010
MethanolFisher ScientificA454SK-4
Glacial acetic acidFisher ScientificAC295320010
Zeiss MicroscopeZeissAXIO Imager.Z2

Ссылки

  1. Kodama, Y., et al. Stable chromosome aberrations in atomic bomb survivors: results from 25 years of investigation. Radiat Res. 156, 337-346 (2001).
  2. Lucas, J. N. Cytogenetic signature for ionizing radiation. Int J Radiat Biol. 73, 15-20 (1998).
  3. Zaccaria, A., Barbieri, E., Mantovani, W., Tura, S. Chromosome radiation-induced aberrations in patients with Hodgkin's disease. Possible correlation with second malignancy? Boll. Ist. Sieroter. Milan. 57, 76-83 (1978).
  4. Fisher, N. L., Starr, E. D., Greene, T., Hoehn, H. Utility and limitations of chromosome banding in pre- and postnatal service cytogenetics. Am J Med Genet. 5, 285-294 (1980).
  5. Hande, M. P., et al. Complex chromosome aberrations persist in individuals many years after occupational exposure to densely ionizing radiation: an mFISH study. Genes Chromosomes. Cancer. 44, 1-9 (2005).
  6. Gall, J. G., Pardue, M. L. Formation and detection of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations. Proc Natl Acad Sci U S A. 63, 378-383 (1969).
  7. Bauman, J. G., Wiegant, J., Borst, P., van, D. P. A new method for fluorescence microscopical localization of specific DNA sequences by in situ hybridization of fluorochromelabelled RNA. Exp Cell Res. 128, 485-490 (1980).
  8. Hopman, A. H., et al. Bi-color detection of two target DNAs by non-radioactive in situ hybridization. Histochemistry. 85, 1-4 (1986).
  9. Nederlof, P. M., et al. Three-color fluorescence in situ hybridization for the simultaneous detection of multiple nucleic acid sequences. Cytometry. 10, 20-27 (1989).
  10. Nederlof, P. M., et al. Multiple fluorescence in situ hybridization. Cytometry. 11, 126-131 (1990).
  11. Szeles, A., Joussineau, S., Lewensohn, R., Lagercrantz, S., Larsson, C. Evaluation of spectral karyotyping (SKY) in biodosimetry for the triage situation following gamma irradiation. Int J Radiat Biol. 82, 87-96 (2006).
  12. Camparoto, M. L., Ramalho, A. T., Natarajan, A. T., Curado, M. P., Sakamoto-Hojo, E. T. Translocation analysis by the FISH-painting method for retrospective dose reconstruction in individuals exposed to ionizing radiation 10 years after exposure. Mutat. Res. 530, 1-7 (2003).
  13. Edwards, A. A critique of 'Collaborative exercise on the use of FISH chromosome painting for retrospective biodosimetry of Mayak nuclear-industrial personnel. Int J Radiat Biol. 78, 867-871 (2002).
  14. Bauchinger, M., et al. Collaborative exercise on the use of FISH chromosome painting for retrospective biodosimetry of Mayak nuclear-industrial personnel. Int J Radiat Biol. 77, 259-267 (2001).
  15. Hieber, L., et al. Chromosomal rearrangements in post-Chernobyl papillary thyroid carcinomas: evaluation by spectral karyotyping and automated interphase FISH. J Biomed. Biotechnol. 2011, 693691(2011).
  16. Cohen, N., et al. detection of chromosome rearrangements in two cases of tMDS with a complex karyotype. Cancer Genet Cytogenet. 138, 128-132 (2002).
  17. Pathak, R., et al. The Vitamin E Analog Gamma-Tocotrienol (GT3) Suppresses Radiation-Induced Cytogenetic Damage. Pharm Res. , (2016).
  18. Spurbeck, J. L., Zinsmeister, A. R., Meyer, K. J., Jalal, S. M. Dynamics of chromosome spreading. Am J Med Genet. 61, 387-393 (1996).
  19. Deng, W., Tsao, S. W., Lucas, J. N., Leung, C. S., Cheung, A. L. A new method for improving metaphase chromosome spreading. Cytometry A. 51, 46-51 (2003).
  20. Hande, M. P., et al. Past exposure to densely ionizing radiation leaves a unique permanent signature in the genome. Am J Hum Genet. 72, 1162-1170 (2003).
  21. Tug, E., Kayhan, G., Kan, D., Guntekin, S., Ergun, M. A. The evaluation of long-term effects of ionizing radiation through measurement of current sister chromatid exchange (SCE) rates in radiology technologists, compared with previous SCE values. Mutat. Res. 757, 28-30 (2013).
  22. Kanda, R., et al. Non-fluorescent chromosome painting using the peroxidase/diaminobenzidine (DAB) reaction. Int J Radiat Biol. 73, 529-533 (1998).
  23. Kakazu, N., et al. Development of spectral colour banding in cytogenetic analysis. Lancet. 357, 529-530 (2001).
  24. Rithidech, K. N., Honikel, L., Whorton, E. B. mFISH analysis of chromosomal damage in bone marrow cells collected from CBA/CaJ mice following whole body exposure to heavy ions (56Fe ions). Radiat Environ Biophys. 46, 137-145 (2007).
  25. Abrahams, B. S., et al. Metaphase FISHing of transgenic mice recommended: FISH and SKY define BAC-mediated balanced translocation. Genesis. 36, 134-141 (2003).
  26. Savage, J. R., Simpson, P. On the scoring of FISH-"painted" chromosome-type exchange aberrations. Mutat. Res. 307, 345-353 (1994).
  27. Savage, J. R., Simpson, P. FISH "painting" patterns resulting from complex exchanges. Mutat. Res. 312, 51-60 (1994).
  28. Tucker, J. D., et al. PAINT: a proposed nomenclature for structural aberrations detected by whole chromosome painting. Mutat. Res. 347, 21-24 (1995).
  29. Knehr, S., Zitzelsberger, H., Bauchinger, M. FISH-based analysis of radiation-induced chromosomal aberrations using different nomenclature systems. Int J Radiat Biol. 73, 135-141 (1998).
  30. Lucas, J. N., et al. Rapid translocation frequency analysis in humans decades after exposure to ionizing radiation. Int J Radiat Biol. 62, 53-63 (1992).
  31. Braselmann, H., et al. SKY and FISH analysis of radiation-induced chromosome aberrations: a comparison of whole and partial genome analysis. Mutat. Res. 578, 124-133 (2005).
  32. Sokolova, I. A., et al. The development of a multitarget, multicolor fluorescence in situ hybridization assay for the detection of urothelial carcinoma in urine. J Mol Diagn. 2, 116-123 (2000).
  33. Lindholm, C., et al. Biodosimetry after accidental radiation exposure by conventional chromosome analysis and FISH. Int J Radiat Biol. 70, 647-656 (1996).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

119

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены