JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

The present protocol describes the usefulness of multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH) and spectral karyotyping (SKY) in identifying inter-chromosomal stable aberrations in the bone marrow cells of mice after exposure to total body irradiation.

Özet

Ionizing radiation (IR) induces numerous stable and unstable chromosomal aberrations. Unstable aberrations, where chromosome morphology is substantially compromised, can easily be identified by conventional chromosome staining techniques. However, detection of stable aberrations, which involve exchange or translocation of genetic materials without considerable modification in the chromosome morphology, requires sophisticated chromosome painting techniques that rely on in situ hybridization of fluorescently labeled DNA probes, a chromosome painting technique popularly known as fluorescence in situ hybridization (FISH). FISH probes can be specific for whole chromosome/s or precise sub-region on chromosome/s. The method not only allows visualization of stable aberrations, but it can also allow detection of the chromosome/s or specific DNA sequence/s involved in a particular aberration formation. A variety of chromosome painting techniques are available in cytogenetics; here two highly sensitive methods, multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH) and spectral karyotyping (SKY), are discussed to identify inter-chromosomal stable aberrations that form in the bone marrow cells of mice after exposure to total body irradiation. Although both techniques rely on fluorescent labeled DNA probes, the method of detection and the process of image acquisition of the fluorescent signals are different. These two techniques have been used in various research areas, such as radiation biology, cancer cytogenetics, retrospective radiation biodosimetry, clinical cytogenetics, evolutionary cytogenetics, and comparative cytogenetics.

Giriş

The two most reliable methods of identifying radiation-induced inter-chromosomal stable aberrations are multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH), which allows the painting of two or more chromosomes simultaneously, and spectral karyotyping (SKY), which imparts a distinct color to each homologous chromosome pair in the genome. Unlike unstable aberrations, stable aberrations are persistent in nature and may be propagated for several generations in irradiated populations1, and are regarded as critical molecular "signatures" of radiation-induced cytogenetic lesions2. Studies by various groups have shown that stable aberrations are associated with the pathogenesis and development of a number of diseases, including cancer3. Before the era of chromosome painting (also referred as molecular cytogenetics), the conventional G-banding technique was the only method for detecting stable chromosomal aberrations. However, chromosome banding is a challenge to cytogeneticists because the resolution is limited, reproducibility is uncertain, it is a labor-intensive procedure, and it requires highly skilled and experienced cytogeneticists for reliable data interpretation4. Moreover, the classic banding technique does not allow detection of complex chromosomal rearrangements, which involve the interaction of three or more breaks distributed among two or more chromosomes, a common outcome of radiation damage. Complex aberrations may persist in individuals many years after radiation exposure, making them useful for retrospective biodosimetry5. Therefore, an alternate approach was required to overcome the limitations of conventional banding techniques to detect stable chromosomal rearrangements.

In the late 1960s, the pioneering work of Gall and Pardue (1969) on molecular hybridization using nucleic acid probes labeled with radioactive material commenced a new era in the field of cytogenetics, which allowed detection of a specific DNA sequence on chromosomes6. However, the use of radioactive probes for molecular hybridization had several drawbacks: radioactive probes are relatively unstable, probe activity depends on radioactive decay of the isotope used, hybridization takes a longer time, the resolution is limited, the probes are relatively costly, and the radioactive materials are a health hazardous. Thus, it became necessary to develop and design non-radioactive probes. The introduction of fluorescent tagged nucleic acid probes in the 1980s and 1990s overcame the limitations of radioactive probes and greatly enhanced the safety, sensitivity, and specificity of the hybridization technique7-10. Fluorescent probes give rise to extremely bright signals when observed under fluorescence microscopes equipped with the appropriate excitation and emission filters. Any loss, gain, or rearrangement of fluorescent labeled chromosome/s or a part of the chromosome is easily identifiable with this FISH technique.

Analysis of chromosomal aberrations by FISH painting has led to marked progress in cytogenetic research over the years. Designing fluorescent labeled probes for specific applications ranging from locus-specific probes to whole-chromosome painting probes has advanced the field significantly; this has also facilitated the detection of submicroscopic ("cryptic") rearrangement, which was not possible by conventional chromosome banding. Chromosome painting by mFISH and SKY have proven to be valuable tools for the identification of simple and complex inter-chromosomal rearrangements. The basic principles for both techniques are similar, but the method of detection and discrimination of fluorescent signal after in situ hybridization and the process of image acquisition are different. In mFISH, separate images of each of the four fluorochromes are captured by using narrow bandpass microscope filters; dedicated software is then used to combine the images. While in SKY, image acquirement is based on a combination of epifluorescence microscopy, charge-coupled device imaging, and Fourier spectroscopy, which allows the measurement of the entire emission spectrum with a single exposure at all image points. In both mFISH and SKY, monochrome images are captured independently, then merged, and finally, unique pseudo-colors are assigned to the chromosomes in monochromatic images based on the specific dye attached to each fluorochrome probe.

The contribution of mFISH and SKY analysis in the radiation biology field is remarkable, particularly for retrospective dose estimation of human exposure to IR (radiation biodosimetry)11-14, radiation carcinogenesis risk assessment15, as well as detection and risk estimation of radiotherapy-related secondary cancer16. A recent study on mice has shown that a FISH-based chromosome painting technique is also an important tool for evaluating the efficacy of radiation countermeasure17. In the present study, the effect of total body radiation exposure on the induction of stable chromosomal aberrations in the bone marrow cells of mice has been demonstrated using mFISH and SKY techniques.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Tüm hayvan çalışmaları Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu önerileri ile tam uyum içinde gerçekleştirilmiştir. hayvan protokolü Arkansas Tıbbi Bilimler Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı. temiz hava ve standart kemirgen yiyecek ve suya serbest erişim 15 saatlik döngüler - Bütün hayvanlar 10 ile 20 ± 2 ° C'de standart klimalı hayvan tesis altında tutuldular. Girişte, fareler 1 hafta karantinada tutulan ve sertifikalı kemirgen yemi verilmiştir.

1.Radiation Pozlama ve Metafaz Hücreler Vivo Arrest olarak

  1. Açığa bir ışınlama odasında 2 Gy tüm vücut radyasyona fareler un-anestezi. ışınlama sırasında, iyi havalandırılan bir tutma odasında yer fareler serbestçe hareket ve düzgün bir doz almıyorsunuz emin olmak için.
  2. % 0.05 kolşisin solüsyonu 100 mcL enjekte edilir (ckalsiyum ve magnezyum serbest PBS içinde çözülmüş olchicine toz) karın içinden 1 ml tek kullanımlık şırınga ile eklenmiş 25 G iğne kullanılarak. herhangi bir organ doğrudan enjeksiyon kaçının.
  3. kemik iliği hücre hasat önce 2 saat için hücre hayvan bırakın. ağrı veya sıkıntı herhangi bir işaret için hayvan gözlemleyin.

2. kemik iliği hücre hasat ve yoğunluk dereceli santrifüj ile kemik iliği Mononükleer Hücreleri İzolasyon

  1. CO 2 boğulma fare Euthanize.
  2. dorsal ve ventral tarafta% 70 etanol püskürtün.
  3. keskin bir makas ile karın derisi üzerinde 2 cm kesi olun. künt cımbız ile kesi her iki tarafında cilt tutun ve yavaşça karın kasları çekerek açın.
  4. makasla her iki arka bacaklarını kesti ve hemen% 4 FBS ile önceden soğutulmuş PBS koyun.
  5. Dikkatle keskin bir jilet ve pamuk gazlı bez bandaj ile arka bacak bağlı tüm kasları temizleyin.
  6. femur tibia ayırın. Bir traş bıçağı ile her kemiğin her iki ipuçları Trim.
  7. 3 ml'lik bir şınngaya bağlanmış bir 23 G iğne kullanılarak (% 4 FBS), 3 ml PBS ile kemik iliği muhtevasını temizlemek ve 15 ml santrifüj tüpüne içerik toplamak. tek bir hücre süspansiyonu yapmak için iğne ile hücre süspansiyonu en az 10 kez geçmek.
  8. Dikkatle hücre süspansiyonu ve lenfosit ayırma ortamı arasındaki arayüzü bozmadan lenfosit ayırma ortamı (3 mL) ve eşit hacimde hücre süspansiyonu kaplar. Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca 400 x g'de santrifüjleyin.
  9. yeni bir 15 ml santrifüj tüpüne diğer katmanları ve transfer bozmadan dikkatlice buffy coat toplayın.

Metafaz Hücre Spread 3. hazırlanması

  1. ince beyaz tabakayı içeren bir tüpe 10 ml PBS ilave edin.
  2. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g'de santrifüjleyin.
  3. Dikkatle süpernatant kaldırmak. Sonra t break upo nazik dokunarak ile pelet hücre ve 10 ml PBS ekleyin.
  4. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g'de santrifüjleyin.
  5. Hücre pelletini bozmadan süpernatantı pelet kırmak ve önceden ısıtılmış hipotonik 0.075 M potasyum klorür çözeltisi 4 ml. Nazik sabit sallayarak damla hipotonik solüsyon damla ekleyin.
  6. Bir su banyosu içinde 37 ° C'de 20 dakika boyunca inkübe hücreleri.
  7. (: Buzlu asetik asit, 3: metanol 1 h / h) hipotonik tedaviden sonra, sabitleyici eşit hacimde (4 mL) ekleyin 15 ml bir tüp içinde ve tersini tüp yavaşça karıştırın.
  8. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g'de santrifüj ve supernatant atın.
  9. bir kaç saniye için hafifçe girdap ardından kılavuz çekme ile hücre pelletini parçalamak ve sabit şekilde çalkalanarak damla sabitleyici çözeltisi damla 3 ml.
  10. Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca inkübe edin ve daha sonra 5 dakika boyunca 400 x g'de santrifüj.
  11. Süpernatantı gent ile hücre pelet kırmakle dokunarak ve 3 ml taze fiksatif ekleyin.
  12. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g'de santrifüj ve supernatant çıkarın. nazik dokunarak hücre pelet kadar Break ve taze 3 ml fiksatif ekleyin.
  13. Adımı yineleyin 3.12 kez daha fazla.
  14. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g'de santrifüj ve hücre topağı bozmadan supernatant çıkarın. Ardından 600 uL fiksatif ile 400 ekleyebilir ve pipetleme ile iyice karıştırın.
  15. 45 ° açıyla eğimli ön temizlenir ve ıslak slaytlar üzerine 30 ul sabit hücrelerin damla ve tamamen bir gecede havada kurumaya slaytlar izin verir.

mFISH tarafından 4. Fare Kromozom Boyama

  1. kromozom denatürasyonu
    1. Oda sıcaklığında 2 dakika için 2X SSC metafaz hücre yayılır içeren slayt yerleştirin.
    2. % 70 2 dakika her biri,% 80 ve% 100, seri etanol yıkanarak slayt kurutmak. 65 ° C'de 60 dakika boyunca inkübe edin.
    3. Ön ısıtma 40 ml denatürasyon çözeltisi (% 70 formamid / 2 x SS° C; 30 dakika boyunca, bir cam kavanoz içinde Coplin 70 ° C (± 2 ° C), pH 7.0). 1.5 dakika - 1 için önceden ısıtılmış denatürasyon çözeltisi slayt inkübe edilerek kromozom denatüre.
    4. 2 dakikalık denatürasyon işlemini durdurmak için hem de yeniden tavlama ile ilgili denatüre kromozom önlemek için buz soğukluğunda% 70 etanol içinde hemen slayt söndürün. Daha sonra 2 dakika süreyle% 80 etanol ile yıkanarak dihidrat. 2 dakika boyunca% 100 etanol ile etanol yıkama tekrarlayın. Tamamen oda sıcaklığında slayt kurulayın.
  2. Denatürasyon ve Probe Karışımı Hibridizasyon
    1. Kısaca, üretici tarafından sağlanan prob karışımı santrifüj, 7 dakika boyunca bir su banyosu içinde 80 ° C (± 2 ° C) inkübe edilerek kap santrifüj tüpü ek 500 mcL prob karışımı 10 ul transfer ve denatüre.
    2. 10 dakika boyunca 37 ° C'de bir su banyosu içinde prob karışımı ile santrifüj tüpü yerleştirin.
    3. denatüre chromoso ile slayt üzerine denatüre prob karışımı uygulayınmes.
    4. Dikkatle 18 mm x 18 mm cam kapak slip ile alanı kapsayacak ve çok yavaşça kaymasına kapak kayma basarak herhangi bir görünür hava kabarcıklarını ortadan kaldırır. Kauçuk çimento ile kapak kayma dört tarafı kapatın ve hibridizasyon için nemli bir oda içinde 37 ° C'de karanlıkta, 16 saat, 12 saat süre ile inkübe edilir.
  3. Mesaj Hibridizasyon Yıkama ve Algılama
    1. Dikkatle kauçuk çimento ve kapak kayma çıkarın.
    2. 5 dakika boyunca 74 ° C (± 2 ° C) önceden ısıtılmış 0.4x SSC yeri slayt.
    3. 2 dakika boyunca yıkama çözeltisi II (4x SSC /% 0.1 Tween-20) yıkayın kayar.
    4. DAPI karşıt (1.5 ug / mL) ile anti-solmaya montaj orta 20 mcL ve bir cam kapak ile kaplayın. hafifçe laboratuvar dokusu ile lamel basın hava kabarcıkları ve aşırı montaj çözüm kaldırmak için. oje ile lamel kenarları mühür.
    5. uygun filtreler ile donatılmış bir floresan mikroskop kullanılarak Görünüm slaytlar.

5. Spektral Karyotipleme Fare Kromozomlar (SKY)

  1. Kromozom ve Probe denatürasyonu
    1. çalkalamadan, 2 dakika süre ile, oda sıcaklığında 2 x SSC, slayt dengelenmesi.
    2. Oda sıcaklığında 2 dakika her biri için, bir etanol seri slayt (% 70,% 80 ve% 100 etanol) kurutmak. Tamamen etanolü çıkarmak için slayt hava-kurutun.
    3. Sıcak 40 ml denatürasyon çözeltisi (% 70 formamid / 2 x SSC, pH 7.0), 30 dakika için bir cam Coplin kavanoz.
    4. 1 ila 1.5 dakika süreyle önceden ısıtılmış denatürasyon çözeltisi slayt inkübe edin.
    5. 2 dk denatürasyon işlemini durdurmak için hem de yeniden tavlama gelen denatüre kromozom önlemek için hemen buz gibi soğuk% 70 etanol içine slayt batırmayın.
    6. Oda sıcaklığında 2 dakika boyunca% 100 etanol içinde, daha sonra 2 dakika süreyle% 80 etanol içine yerleştirerek ve slayt kurutmak.
    7. 80 ° C (± 2 ° C) ayarlanmış bir su banyosu içinde sky prob (üretici tarafından sağlanan flakon # 1) denatüre7 dakika boyunca, ve sonra hemen, 10 dakika boyunca 37 ° C'ye kadar, farklı bir su banyosuna yerleştirin.
  2. Probe Melezleme
    1. denatüre kromozomlar üzerine denatüre SKY probu 10 mcL ekleyin.
    2. hava kabarcıkları lamel altında sıkışıp böylece dikkatle SKY prob üzerine 18 mm x 18 mm cam lamel yerleştirin.
    3. lastik çimento ile lamel kenarları mühür.
    4. nemli bir ışık geçirmeyen bölme slayt yerleştirin ve 36 saat, 24 saat boyunca 37 ° C'de karanlıkta inkübe edilir.
  3. Sonrası hibridizasyon yıkama ve floresans saptama
    1. lamel bozmadan çok dikkatli kauçuk çimento çıkarın.
    2. sabit şekilde çalkalanarak 5 dakika boyunca 72 ° C (± 2 ° C) önceden ısıtılmış, hızlı yıkama çözeltisi (0.4x SSC) içinde slayt yerleştirin. Yıkama çözeltisi III (4x SSC /% 0.1 Tween 20) içine slayt daldırın ve çalkalanarak 1 dakika inkübe edilir.
    3. İsteğe bağlı: engelleme reaktif 80 uL ekleyinmelezleşme alanı üzerine (üretici tarafından sağlanan flakon # 2), 24 mm x 60 mm plastik lamel ve nemlendirilmiş odacıkta 30 dakika boyunca 37 ° C'de karanlıkta inkübe edilir.
    4. Yavaşça plastik lamel kaldırmak ve 5 dakika boyunca önceden ısıtılmış (45 ºC) yıkama solüsyonu III slayt yıkayın.
    5. 80 uL Cy5 boyama reaktif (üretici tarafından sağlanan flakon # 3) uygulanır, 24 mm x 60 mm plastik lamel ve nemlendirilmiş bir odada 40 dakika süreyle karanlıkta 37 ° C'de inkübe edin.
    6. içeren bir cam Coplin kavanoza slayt Dip önceden ısıtılmış (45 ° C) yıkama çözeltisi III (4x SSC /% 0.1 Tween 20) ile çalkalanarak 2 dakika için bir su banyosu içinde 45 ° C'de inkübe edin. Bu yıkama adımı 3 kez tekrarlayın.
    7. 80 uL Cy5.5 boyanması reaktifi (üretici tarafından sağlanan flakon # 4) uygulanır, 24 mm x 60 mm plastik lamel ve nemlendirilmiş bir odada 40 dakika süreyle karanlıkta 37 ° C'de inkübe edin.
    8. (Önceden ısıtılmış ile slayt 3 kere yıkayın45 ºC) yıkama solüsyonu III.
    9. Fazla sıvıyı boşaltmak için bir kağıt havlu karşı eğik pozisyonda slayt tutun. 20 uL, anti-solmaya DAPI ayıracı (üretici tarafından sağlanan flakon # 5) ekleyin ve dikkatlice hava kabarcıklarını tanıtan olmadan 24 mm x 60 mm cam lamel yerleştirin. oje ile lamel kenarları mühür ve SKY görüntüleri yakalamak için donatılmış bir Epifloresans mikroskop ile gözlemlemek.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Total vücut ışınlaması ışınlanmış farelerde kemik iliği hücrelerinde çok sayıda kromozom sapmaları neden olur. Mevcut protokolü radyasyona maruz kaldıktan sonra, kemik iliği hücreleri, in vivo mitotic durmanın için optimize edilmiştir, yoğunluk gradyanlı santrifüj metafaz hücre mamullerin hazırlanmasında, ve daha sonra ışınlanmış farelerde, kemik iliği tek çekirdekli hücreleri tecrit arka ayakları arasında kemik iliği hücrelerinin hasat mF...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Birkaç kritik adımlar mFISH ve SKY başarısını belirler. İlk ve en önemli adım kemik iliği mononükleer hücrelerin in vivo mitotik tutuklama kolşisin tedavisi optimize etmektir. kolşisin konsantrasyonu ve tedavi süresi ayrı ayrı ya da konser etkili kromozom boyama mitotik indeksi yanı sıra kromozom yoğunlaşma iki önemli önkoşul belirler. Yüksek Kolşisin konsantrasyonu veya daha uzun tedavi süresi uygun denatürasyon ve hibridizasyon için uyumsuz son derece yoğun kromozom yol açar. Ay...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

The authors declare that they have no competing financial interests.

Teşekkürler

Bu çalışma Ulusal Havacılık ve Uzay Dairesi aracılığıyla Arkansas Uzay Grant Konsorsiyumu ve Ulusal Uzay Biyomedikal Araştırma Enstitüsü tarafından desteklenen, hibe NNX15AK32A (RP) ve RE03701 (MH-J), ve P20 GM109005 (MH-J) ve US Veterans Administration ( MH-J). Biz yazının hazırlanmasında editoryal yardım için Christopher Fettes, Arkansas Tıbbi Bilimler Üniversitesi Çevre ve İş Sağlığı Bölümü Program Koordinatörü, teşekkür ederim.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
FormamideSigma-Aldrich221198-100ML
SSC Buffer 20× ConcentrateSigma-AldrichS6639-1L
SKY Laboratory Reagent for MouseApplied Spectral ImagingFPRPR0030/M40
CAD - Concentrated Antibody Detection KitApplied Spectral ImagingFPRPR0033
Single Paints Customized - 3 Colors; Mouse chromosome 1: Red, Mouse chromosome 2: Green, Mouse chromosome 3: AquaApplied Spectral ImagingFPRPR0182/10
Glass coverslipsFisher Scientific12-545B
Tween 20Fisher ScientificBP337-100
Hydrochloric acid, 37%, Acros OrganicsFisher ScientificAC45055-0025 
Fisherbrand Glass Staining Dishes  with Screw CapFisher Scientific08-816
KaryoMAX Potassium Chloride Solution Life Technologies10575-090
Fisherbrand Superfrost Plus Microscope SlidesFisher Scientific12-550-15
Colcemid powderFisher Scientific50-464-757 
Histopaque-1083 Sigma-Aldrich10831
Shepherd Mark I, model 25 137Cs irradiatorJ. L. Shepherd & AssociatesModel 484B
Syringe 1 mLBD Biosciences647911
Ethyl Alcohol, 200 ProofFisher ScientificMEX02761
PBS, (1x PBS Liq.), w/o Calcium and MagnesiumFisher ScientificICN1860454
Fetal Bovine SerumFisher Scientific10-437-010
MethanolFisher ScientificA454SK-4
Glacial acetic acidFisher ScientificAC295320010
Zeiss MicroscopeZeissAXIO Imager.Z2

Referanslar

  1. Kodama, Y., et al. Stable chromosome aberrations in atomic bomb survivors: results from 25 years of investigation. Radiat Res. 156, 337-346 (2001).
  2. Lucas, J. N. Cytogenetic signature for ionizing radiation. Int J Radiat Biol. 73, 15-20 (1998).
  3. Zaccaria, A., Barbieri, E., Mantovani, W., Tura, S. Chromosome radiation-induced aberrations in patients with Hodgkin's disease. Possible correlation with second malignancy? Boll. Ist. Sieroter. Milan. 57, 76-83 (1978).
  4. Fisher, N. L., Starr, E. D., Greene, T., Hoehn, H. Utility and limitations of chromosome banding in pre- and postnatal service cytogenetics. Am J Med Genet. 5, 285-294 (1980).
  5. Hande, M. P., et al. Complex chromosome aberrations persist in individuals many years after occupational exposure to densely ionizing radiation: an mFISH study. Genes Chromosomes. Cancer. 44, 1-9 (2005).
  6. Gall, J. G., Pardue, M. L. Formation and detection of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations. Proc Natl Acad Sci U S A. 63, 378-383 (1969).
  7. Bauman, J. G., Wiegant, J., Borst, P., van, D. P. A new method for fluorescence microscopical localization of specific DNA sequences by in situ hybridization of fluorochromelabelled RNA. Exp Cell Res. 128, 485-490 (1980).
  8. Hopman, A. H., et al. Bi-color detection of two target DNAs by non-radioactive in situ hybridization. Histochemistry. 85, 1-4 (1986).
  9. Nederlof, P. M., et al. Three-color fluorescence in situ hybridization for the simultaneous detection of multiple nucleic acid sequences. Cytometry. 10, 20-27 (1989).
  10. Nederlof, P. M., et al. Multiple fluorescence in situ hybridization. Cytometry. 11, 126-131 (1990).
  11. Szeles, A., Joussineau, S., Lewensohn, R., Lagercrantz, S., Larsson, C. Evaluation of spectral karyotyping (SKY) in biodosimetry for the triage situation following gamma irradiation. Int J Radiat Biol. 82, 87-96 (2006).
  12. Camparoto, M. L., Ramalho, A. T., Natarajan, A. T., Curado, M. P., Sakamoto-Hojo, E. T. Translocation analysis by the FISH-painting method for retrospective dose reconstruction in individuals exposed to ionizing radiation 10 years after exposure. Mutat. Res. 530, 1-7 (2003).
  13. Edwards, A. A critique of 'Collaborative exercise on the use of FISH chromosome painting for retrospective biodosimetry of Mayak nuclear-industrial personnel. Int J Radiat Biol. 78, 867-871 (2002).
  14. Bauchinger, M., et al. Collaborative exercise on the use of FISH chromosome painting for retrospective biodosimetry of Mayak nuclear-industrial personnel. Int J Radiat Biol. 77, 259-267 (2001).
  15. Hieber, L., et al. Chromosomal rearrangements in post-Chernobyl papillary thyroid carcinomas: evaluation by spectral karyotyping and automated interphase FISH. J Biomed. Biotechnol. 2011, 693691(2011).
  16. Cohen, N., et al. detection of chromosome rearrangements in two cases of tMDS with a complex karyotype. Cancer Genet Cytogenet. 138, 128-132 (2002).
  17. Pathak, R., et al. The Vitamin E Analog Gamma-Tocotrienol (GT3) Suppresses Radiation-Induced Cytogenetic Damage. Pharm Res. , (2016).
  18. Spurbeck, J. L., Zinsmeister, A. R., Meyer, K. J., Jalal, S. M. Dynamics of chromosome spreading. Am J Med Genet. 61, 387-393 (1996).
  19. Deng, W., Tsao, S. W., Lucas, J. N., Leung, C. S., Cheung, A. L. A new method for improving metaphase chromosome spreading. Cytometry A. 51, 46-51 (2003).
  20. Hande, M. P., et al. Past exposure to densely ionizing radiation leaves a unique permanent signature in the genome. Am J Hum Genet. 72, 1162-1170 (2003).
  21. Tug, E., Kayhan, G., Kan, D., Guntekin, S., Ergun, M. A. The evaluation of long-term effects of ionizing radiation through measurement of current sister chromatid exchange (SCE) rates in radiology technologists, compared with previous SCE values. Mutat. Res. 757, 28-30 (2013).
  22. Kanda, R., et al. Non-fluorescent chromosome painting using the peroxidase/diaminobenzidine (DAB) reaction. Int J Radiat Biol. 73, 529-533 (1998).
  23. Kakazu, N., et al. Development of spectral colour banding in cytogenetic analysis. Lancet. 357, 529-530 (2001).
  24. Rithidech, K. N., Honikel, L., Whorton, E. B. mFISH analysis of chromosomal damage in bone marrow cells collected from CBA/CaJ mice following whole body exposure to heavy ions (56Fe ions). Radiat Environ Biophys. 46, 137-145 (2007).
  25. Abrahams, B. S., et al. Metaphase FISHing of transgenic mice recommended: FISH and SKY define BAC-mediated balanced translocation. Genesis. 36, 134-141 (2003).
  26. Savage, J. R., Simpson, P. On the scoring of FISH-"painted" chromosome-type exchange aberrations. Mutat. Res. 307, 345-353 (1994).
  27. Savage, J. R., Simpson, P. FISH "painting" patterns resulting from complex exchanges. Mutat. Res. 312, 51-60 (1994).
  28. Tucker, J. D., et al. PAINT: a proposed nomenclature for structural aberrations detected by whole chromosome painting. Mutat. Res. 347, 21-24 (1995).
  29. Knehr, S., Zitzelsberger, H., Bauchinger, M. FISH-based analysis of radiation-induced chromosomal aberrations using different nomenclature systems. Int J Radiat Biol. 73, 135-141 (1998).
  30. Lucas, J. N., et al. Rapid translocation frequency analysis in humans decades after exposure to ionizing radiation. Int J Radiat Biol. 62, 53-63 (1992).
  31. Braselmann, H., et al. SKY and FISH analysis of radiation-induced chromosome aberrations: a comparison of whole and partial genome analysis. Mutat. Res. 578, 124-133 (2005).
  32. Sokolova, I. A., et al. The development of a multitarget, multicolor fluorescence in situ hybridization assay for the detection of urothelial carcinoma in urine. J Mol Diagn. 2, 116-123 (2000).
  33. Lindholm, C., et al. Biodosimetry after accidental radiation exposure by conventional chromosome analysis and FISH. Int J Radiat Biol. 70, 647-656 (1996).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

GenetikSay 119kromozomal anormalliklerspektral karyotiplemeoklu floresan In situ Melezle tirmeradyasyonsitogenetik al ma fare kemik ili i h crelerikromozom boyama

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır