JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Описан надежный и легко воспроизводимый метод подготовки функционируемых, ближнеинжегруппирующих фотолюминесцентных золотых нанокластеров и их непосредственного обнаружения внутри клеток HeLa с помощью цитометрии потока и конфокальной лазерной сканирующей микроскопии.

Аннотация

За последнее десятилетие флуоресцентные золотые нанокластеры (AuNCs) стали свидетелями растущей популярности в биологических приложениях, и огромные усилия были направлены на их развитие. В этом протоколе подробно описан недавно разработанный легковой метод приготовления водорастворимых, биосовместимых и коллоидно стабильных ближнеинжекрасных испускающих АУНК. Этот комнатной температуры, снизу вверх химический синтез обеспечивает легко функциональные AuNCs ограничен тиоктической кислоты и тиол-модифицированный полиэтиленгликоль в водной растворе. Синтетический подход не требует ни органических растворителей, ни дополнительного обмена лигандами, ни обширных знаний о синтетической химии для воспроизведения. Полученные AuNCs предлагают свободные поверхностные карбоксиловые кислоты, которые могут быть функционализированы с различными биологическими молекулами, несущими свободную группу амина без негативного влияния на фотолюминесцентные свойства AuNCs. Была также описана быстрая, надежная процедура цитометрической количественной оценки потока и конфокальной микроскопической визуализации поглощения AuNC клетками HeLa. В связи с большим сдвигом Стокса, надлежащая установка фильтров в цитометрии потока и конфокальной микроскопии необходима для эффективного обнаружения ближнего инфракрасного фотолюминесценции AuNCs.

Введение

В последнее десятилетие, ультрамалые (2 нм) фотолюминесцентных золотых нанокластеров (PL AuNCs) стали перспективными зондами для фундаментальных исследований и практических применений1,22,33,4,5,6,7,8,9,10. Их многочисленные желательные характеристики включают высокую фотостабильность, tunable максима выбросов, длительные сроки выбросов, большие сдвиги Стокса, низкая токсичность, хорошая биосовместимость, почечная очистка и поверхностное биоконъюгация. PL AuNCs может обеспечить фотолюминесценцию от синего до ближнего инфракрасного (NIR) спектральной области, в зависимости от количества атомов в кластере11 и характера поверхностного лиганда12. NIR (650-900 нм) испуская AuNCs особенно перспективны для долгосрочного in vitro и in vivo изображений клеток и тканей, так как они предлагают высокое соотношение сигнала к шуму из-за минимального перекрытия с внутренней аутофлуоресценции, слабое рассеяние и поглощение, и высокое проникновение тканей NIR света13,14.

В последние годы, различные подходы, которые используют преимущества Au-S ковалентных взаимодействий были разработаны для подготовки NIR-PL AuNCs ограничен с различными тиол-содержащих лигандов13,15,16,17. Для биомедицинских применений AuNCs должны быть функционализированы с биологическим компонентом для облегчения связывающих взаимодействий. Таким образом, AuNCs с высокой коллоидной стабильностью, которые легко функционально функционируют в вавном растворителе, очень желательны. Общая цель текущего протокола заключается в описании ранее сообщалось18 подготовки AuNCs с functionalizable группы карбоксиловой кислоты на поверхности, используя тиоциловую кислоту и полиэтиленгликоль (PEG) в водной среде в подробно и их спряжения с молекулами, несущими первичный амин после кислотно-аминального метода. Из-за простоты синтеза и высокой воспроизводимости, этот протокол может быть использован и адаптирован исследователями из нехимических фонов.

Одним из ключевых необходимых для применения AuNCs в биомедицинских исследованиях является способность наблюдать и измерять AuNCs внутри клеток. Среди методов, доступных для мониторинга поглощения наночастиц клетками, цитометрии потока (FCM) и конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) предлагают надежные, высокопроизводительные методы, которые позволяют быстро измерять интернализацию флуоресцентных наноматериалов в большом количестве клеток19. Здесь также были представлены методFC и CLSM для прямого измерения и анализа PL AuNCs внутри клеток без необходимости в дополнительных красителей.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

1. Подготовка ближнего инфракрасного излучающего AuNCs (1)

  1. Добавьте 7,8 мг (37,8 мкм) тиоктической кислоты (TA) и 60 л от 2 МН НаОГ до 23,4 мл ультрачистой воды (резистика 18,2 МЗ.см при 25 градусах Цельсия) и перемешайте (не менее 1000 об/мин) до полного растворения (15-20 мин). Для более быстрого растворения TA, sonicate смеси. Для синтеза рекомендуется свежеприготовленный раствор TA.
  2. Добавьте в раствор 10,2 л HAuCl4Х3H2O (470 мг/мл) вавого раствора.
  3. После 15 мин, добавить 480 кл. NaBH4 (1,9 мг/мл) при энергичном перемешивании (не менее 1000 об/ ч) и перемешать реакционную смесь в тех же условиях на ночь.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Свежеприготовленный раствор NaBH4 в ледяной ультрачистой воде и добавить в реакционную смесь сразу после приготовления.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Синтез AuNCs легко масштабируется. До 2 L AuNCs был синтезирован в одной партии, без каких-либо изменений в оптических свойствах частиц.
  4. (Критически) На следующий день очистите раствор, применяя три цикла центрифугирования/фильтрации с помощью мембранного фильтрационного устройства с молекулярным отсечкой веса 3 кДа. Без этой процедуры очистки следующий шаг не работает должным образом.
  5. Добавить тиол-прекратить полиэтиленгликоль (MW 2000; 15,6 мг; 7,8 моль) в раствор, настроить рН до 7-7,5 и перемешать смесь на ночь, чтобы получить 1. Очистите дисперсию, применяя три цикла центрифугации/фильтрации с помощью мембранного устройства фильтрации с молекулярным отсечкой веса 3 кДа.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Корректировка рН до 7-7,5 чрезвычайно важна. Более высокий рН может привести к синей сдвиг ехнии максимы.

2. Спряжение 3--(аминопропил)трифенилфосфосфоний бромид (ТЭС) на поверхности 1

  1. Смешайте 1 раствор (24 мл), приготовленный на предыдущем этапе, и 3-(аминопропил)трифенилфосфоний бромид (12 мг, 30 мкм). Отрегулируйте рН до 4,5 с 1 М HCl.
    ПРИМЕЧАНИЕ: 3-(Aminopropyl)трифенилфосфоний (TPP) бромидная соль была подготовлена, как описано в литературе20.
  2. Начните реакцию, добавив избыток N-(3-диметил-аминопропил)-N-этилкарбодимид гидрохлорид (EDC) HCl) (60 мг, 312 моль). РН раствора будет увеличиваться и не должно выходить за пределы 6. Мониторинг рН реакционной смеси в течение первого часа. Если рН увеличивается выше 6, уменьшите его до 4,5-6, добавив 1 M HCl.
  3. Перемешать реакционную смесь на ночь при комнатной температуре.
  4. Очистите дисперсию, применяя три цикла центрифугации/фильтрации с помощью мембранного устройства фильтрации с молекулярным отсечкой веса 3 kDa для получения 2. Разбавить 2, полученной здесь с ультрачистой водой, до первоначального объема 24 мл. Концентрация АУ в растворе составляет 200 мкг/мл.

3. Клеточная культура

  1. Культурные клетки HeLa (коллекция культуры HPA) в модифицированном Eagle's Medium Dulbecco дополнены 10% сыворотки крупного рогатого скота плода в 5% CO2 при 37 градусах Цельсия.
  2. Разделите и процвируйте клетки, когда они достигают слияния 80%. Чтобы свести к минимуму приобретение новых мутантов, количество размножений клеток не должно превышать 30.

4. Интернализация AuNC в клетки HeLa

  1. Семя клеток в 12-хорошей пластине при плотности 20000 клеток /мл (1 мл/хорошо). Цель состоит в том, чтобы достичь 50% слияния после 48 ч.
  2. На 48 ч после посева, аспирировать культуры среды и добавить 400 злител полной среде культуры (для необработанных элементов управления) или 500 мкг наночастиц в 400 л полной культиваемых среды (для обработанных образцов) к каждой скважине. Верните культуры в инкубатор 37 градусов по Цельсию.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Добавление больших объемов раствора AuNC отрицательно влияет на жизнеспособность клеток. Решения AuNC должны быть сконцентрированы. Таким образом 2 полученные в шаге 2.4 сконцентрированы 100 времен. 40 мЛ AuNC был сконцентрирован до 400 л. Для получения желаемой концентрации AuNC к 400 множам культуры ячеек было добавлено 25 qL aquot этого концентрированного раствора.
  3. После 2 ч интернализации, отсоединить клетки стандартной трипсинизации в соответствии с протоколом производителя.
  4. Соберите образцы в полипропиленовых микроцентрифуговых трубках и центрифугах в течение 5 мин при 350 х г при 4 градусах Цельсия.
  5. Подготовьте следующий буфер FCM: предварительно охлажденный фосфат буферный солен (PBS; 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 4.3 mM Na2HPO4, 1.47 mM 2 PO4,pH 7.4) дополнено с 2% альбомином сыворотки крупного рогатого скота при 44
  6. Вымойте гранулы с 1 мл буфера FCM и центрифуги в течение 5 минут при 350 х г при 4 градусах По Цельсию.
  7. Отрежь гранулы в 500 qL буфера FCM и храните образцы при 4 градусах Цельсия до анализа.

5. Анализ цитометрии потока

  1. Фильтр все образцы с помощью 5 мл полистирола кругло-дно трубки с клеточной крышкой.
  2. Перед получением данных с помощью программного обеспечения прибора укажите конфигурацию цитометра.
  3. Формат все точки-сюжеты и гистограммы для "Приобретения".
  4. Участок двух параметров точки участка области переднего рассеяния (FSC-A) и боковой области рассеяния (SSC-A), чтобы показать распределение ячеек. Чтобы исключить дублеты, создайте двухпараметрный точечный участок высоты FSC (FSC-H) против FSC-A. Чтобы контролировать относительную интенсивность флуоресценции в образце, нарисуйте однопараметрную гистограмму для флуоресцентного канала (FL-A). Используйте линейную шкалу для изображения данных FSC и SSC, а также логарифмическую шкалу для всех флуоресцентных параметров.
  5. Приобрести необработанный образец (без наночастиц) с низкой скоростью потока, чтобы свести к минимуму совпадающие события (если это разрешено прибором). Во время приобретения, настроить фотомультипликатор трубки (PMT) напряжения, чтобы получить необработанной популяции в масштабе на участке FSC против SSC. При необходимости отрегулируйте напряжение PMT для канала FL, чтобы поместить неокрашенную популяцию в левом углу гистограммы.
  6. Выберите конкретную вкладку «ворота» в программном обеспечении и нарисуйте соответствующие ворота вокруг желаемого населения. Ячейки внутри ворот будут перемещаться к следующему контрольно-пропускному пункту.
  7. Запись 10 000 событий на выборку.
  8. Запись всех образцов под одинаковыми настройками инструмента.
  9. Используйте соответствующую программу для анализа данных цитометрии потока.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Некоторые приложения могут потребовать настройки фильтров. Для обмена фильтрами всегда следуйте рекомендациям производства в руководстве пользователя.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Эксперимент может быть сохранен и перезагружен, чтобы сохранить настройки инструмента и стратегию gating.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Высота бокового рассеяния (SSC-H) против области бокового рассеяния (SSC-A) также может быть использована для исключения дублетов. Этот тип gating может быть более чувствительным, как детектор FSC, как правило, не PMT.

6. Интернализация 2 в клетки HeLa для конфокального лазерного сканирования микроскопии (CLSM)

  1. Семя клетки на 4-камерное стекло нижней 35 мм блюдо при плотности 250000 клеток / мл (0,5 мл/ камерой). Держите камеру в инкубаторе 37 градусов с 5% CO2 атмосферы. Цель состоит в том, чтобы достичь 50% слияния после 24 ч.
  2. На 24 ч после посева, добавить 100 мкг 2 (или 10 юртей из бульона раствор 10 мг/мл) в каждой тарелке камеры, содержащей 0,5 мл среды с клетками (для обработанных образцов).
  3. Верните блюдо в инкубатор. Пусть клетки интернализировать AuNCs в течение 24 ч до их использования для CLSM.
  4. После периода интернализации отбросьте среду и промойте клетки предварительно разогретой свежей средой в течение 5 мин. Повторите шаг стирки еще раз. Затем заполните каждую камеру с 800 л свежей среде.

7. CLSM Изображение живых клеток Hela помечены 2

  1. Для микроскопической визуализации используйте 63x масло (n no 1.518) объектив объективной линзы (NA No 1.4) в конфокальном микроскопе с планом-апохроматом.
  2. Смонтировать блюдо на микроскоп инвертированной сцене с камерой нагревается до 37 градусов по Цельсию и поставляется с увлажненным 5% CO2 атмосферы.
  3. Для обнаружения интернализированного AuNC используйте лазер 405 нм мощностью 2% с соответствующим пучевым сплиттером. Установите диапазон длин волн обнаружения между 650 и 760 нм.
  4. Установите разрешение изображения на 2048 x 2048 пикселей. В настройке скорости приобретения, цель для пикселей оставить время около 4 й. Приобрести изображение с 2x усреднения (режим линии, средний метод усреднения). Установите пинхол до 1 Airy единицы (для 405 нм света). Для повышения чувствительности используйте режим фотон-счета.
  5. Для правильного освещения в передаваемом свете с дифференциальным интерференционным контрастом (DIC) используйте настройку конденсатора конденсатора и полевой остановки Кёлера. Для приобретения передаваемого света используйте лазер мощностью 488 нм мощностью 0,7% без назначенного детектора флуоресценции. Установите соответствующий сплиттер пучка для длины волны лазера.
  6. Приобретите по два изображения для каждого трека (красная флуоресценция и DIC). Отслеживайте AuNCs по их красной флуоресценции; границы клеток легко определяются в передаваемом свете с помощью изображений DIC.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

NIR PL AuNCs были подготовлены из Au3 "в присутствии TA, а затем тиол-прекратить PEG (MW 2000) был связан на поверхности AuNC, чтобы получить 1 после рабочего процесса показано на рисунке 1. Амидиционная связь между 1 и 3 -(аминопропил) трифенилфосфоном (ТЭС) бромист?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

NIR-излучающих AuNCs были синтезированы с использованием подхода снизу вверх, в котором раствор прекурсора золота (HAuCl4) был обработан с подходящими лигандой тиола, а затем уменьшение au3 " Сокращение ионов металла в ваквомом растворе, как правило, агрегируется и приводит к крупны?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

Некоторые части методов и результатов были ранее представлены в статье Pramanik et al.18 Здесь эти методы были преобразованы в практические протоколы по пункту. Авторы не заявляют о каких-либо конкурирующих финансовых интересах.

Благодарности

Авторы благодарны Алзбете Магдоленовой за помощь в цитометрии потока. Авторы признают финансовую поддержку проекта GACR Nr. 18-12533S. Микроскопия была проведена в лаборатории конфокальной и флуоресценции микроскопии совместно финансируемых Европейским фондом регионального развития и государственного бюджета Чешской Республики, проекты нет. К.1.05/4.1.00/16.0347 и КЗ.2.16/3.1.00/21515, при поддержке чешско-BioImaging большой проект RI LM2015062.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochlorideTCI ChemicalsD1601https://www.tcichemicals.com/eshop/en/eu/commodity/D1601/;jsessionid=3AD046E5389206AAE33C8AAB5036CDD6?gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYrO69K6Np3tYeSsAouqGndUvzzsy1hStBPuHG-X3cpTIsAqq9z0cDBoC76MQAvD_BwE
Bovine serum albuminSigma-AldrichA4161https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/a4161?lang=en&region=CZ
Disodium hydrogen phosphate dihydratePENTA s.r.o.15130-31000https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_281.pdf
DL-Thioctic acid, 98%Alfa AesarL04711https://www.alfa.com/en/catalog/L04711/
Hydrochloric acid 35%PENTA s.r.o.19350-11000https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_512.pdf
Hydrogen tetrachloroaurate(III) trihydrate, ACS, 99.99% (metals basis), Au 49.0% minAlfa Aesar36400https://www.alfa.com/en/catalog/036400/
O-(2-Mercaptoethyl)-O′-methylpolyethylene glycol 2000Sigma-Aldrich743127https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/743127?lang=en&region=CZ
Potassium chloridePENTA s.r.o.16200-31000https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_346.pdf
Sodium borohydrideSigma-Aldrich452882https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/452882?lang=en&region=CZ&gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYuoZKvdK_fH24F1gGugG4pamF2FFZLd36YyZmRTdGgkbm5SbyGP0jBoCoo0QAvD_BwE
Sodium chloridePENTA s.r.o.16610-31000https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_376.pdf
Sodium dihydrogenphosphate dihydratePENTA s.r.o.12330-31000https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_124.pdf
Sodium hydroxide pelletsPENTA s.r.o.15740-31000https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_307.pdf
XTT (sodium 2, 3-bis (2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)-carbonyl]-2H-tetrazolium inner salt)Thermo Fisher ScientificX12223https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/X12223#/X12223

Ссылки

  1. Wang, Y., Chen, J., Irudayaraj, J. Nuclear Targeting Dynamics of Gold Nanoclusters for Enhanced Therapy of HER2+ Breast Cancer. ACS Nano. 5 (12), 9718-9725 (2011).
  2. Chen, L. Y., Wang, C. W., Yuan, Z., Chang, H. T. Fluorescent Gold Nanoclusters: Recent Advances in Sensing and Imaging. Analytical Chemistry. 87 (1), 216-229 (2015).
  3. Dongyun, C., Zhentao, L., Li, N., Lee, J. Y., Xie, J., Lu, J. Jianmei Amphiphilic Polymeric Nanocarriers with Luminescent Gold Nanoclusters for Concurrent Bioimaging and Controlled Drug Release. Advanced Functional Materials. 23 (35), 4324-4331 (2013).
  4. Tan, X., Jin, R. Ultrasmall metal nanoclusters for bio-related applications. Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and Nanobiotechnology. 5 (6), 569-581 (2013).
  5. Yuan, X., Luo, Z., Yu, Y., Yao, Q., Xie, J. Luminescent Noble Metal Nanoclusters as an Emerging Optical Probe for Sensor Development. Chemistry - An Asian Journal. 8 (5), 858-871 (2013).
  6. Zheng, K., Setyawati, M. I., Leong, D. T., Xie, J. Antimicrobial Gold Nanoclusters. ACS Nano. 11 (7), 6904-6910 (2017).
  7. Li, Q., et al. Design and mechanistic study of a novel gold nanocluster-based drug delivery system. Nanoscale. 10 (21), 10166-10172 (2018).
  8. Zhang, X. D., et al. Ultrasmall Au10-12(SG)10-12 Nanomolecules for High Tumor Specificity and Cancer Radiotherapy. Advanced Materials. 26 (26), 4565-4568 (2014).
  9. Zhang, X. D., et al. Ultrasmall Glutathione-Protected Gold Nanoclusters as Next Generation Radiotherapy Sensitizers with High Tumor Uptake and High Renal Clearance. Scientific Reports. 5, 8669(2015).
  10. Zhang, X. D., et al. Enhanced Tumor Accumulation of Sub-2 nm Gold Nanoclusters for Cancer Radiation Therapy. Advanced Healthcare Materials. 3 (1), 133-141 (2014).
  11. Zheng, J., Zhang, C., Dickson, R. M. Highly Fluorescent, Water-Soluble, Size-Tunable Gold Quantum Dots. Physical Review Letters. 93 (7), 077402(2004).
  12. Wu, Z., Jin, R. On the Ligand's Role in the Fluorescence of Gold Nanoclusters. Nano Letters. 10 (7), 2568-2573 (2010).
  13. Lin, C. A. J., et al. Synthesis, Characterization, and Bioconjugation of Fluorescent Gold Nanoclusters toward Biological Labeling Applications. ACS Nano. 3 (2), 395-401 (2009).
  14. Yang, L., Shang, L., Nienhaus, G. U. Mechanistic aspects of fluorescent gold nanocluster internalization by live HeLa cells. Nanoscale. 5 (4), 1537-1543 (2013).
  15. Mishra, D., et al. Aqueous Growth of Gold Clusters with Tunable Fluorescence Using Photochemically Modified Lipoic Acid-Based Ligands. Langmuir. 32 (25), 6445-6458 (2016).
  16. Wu, Z., Gayathri, C., Gil, R. R., Jin, R. Probing the Structure and Charge State of Glutathione-Capped Au25(SG)18 Clusters by NMR and Mass Spectrometry. Journal of the American Chemical Society. 131 (18), 6535-6542 (2009).
  17. Stamplecoskie, K. G., Kamat, P. V. Size-Dependent Excited State Behavior of Glutathione-Capped Gold Clusters and Their Light-Harvesting Capacity. Journal of the American Chemical Society. 136 (31), 11093-11099 (2014).
  18. Pramanik, G., et al. Gold nanoclusters with bright near-infrared photoluminescence. Nanoscale. 10 (8), 3792-3798 (2018).
  19. Salvati, A., et al. Quantitative measurement of nanoparticle uptake by flow cytometry illustrated by an interlaboratory comparison of the uptake of labelled polystyrene nanoparticles. NanoImpact. 9, 42-50 (2018).
  20. Zhang, C. J., et al. Mechanism-Guided Design and Synthesis of a Mitochondria-Targeting Artemisinin Analogue with Enhanced Anticancer Activity. Angewandte Chemie. 128 (44), 13974-13978 (2016).
  21. Shang, L., Dong, S., Nienhaus, G. U. Ultra-small fluorescent metal nanoclusters: Synthesis and biological applications. Nano Today. 6 (4), 401-418 (2011).
  22. Higaki, T., et al. Controlling the Atomic Structure of Au30 Nanoclusters by a Ligand-Based Strategy. Angewandte Chemie International Edition. 55 (23), 6694-6697 (2016).
  23. Li, G., et al. Tailoring the Electronic and Catalytic Properties of Au25 Nanoclusters via Ligand Engineering. ACS Nano. 10 (8), 7998-8005 (2016).
  24. Kim, A., Zeng, C., Zhou, M., Jin, R. Surface Engineering of Au36(SR)24 Nanoclusters for Photoluminescence Enhancement. Particle & Particle Systems Characterization. 34 (8), 1600388(2017).
  25. Chevrier, D. M., et al. Molecular-Scale Ligand Effects in Small Gold–Thiolate Nanoclusters. Journal of the American Chemical Society. 140 (45), 15430-15436 (2018).
  26. Yuan, X., Goswami, N., Chen, W., Yao, Q., Xie, J. Insights into the effect of surface ligands on the optical properties of thiolated Au25 nanoclusters. Chemical Communications. 52 (30), 5234-5237 (2016).
  27. Yuan, X., Goswami, N., Mathews, I., Yu, Y., Xie, J. Enhancing stability through ligand-shell engineering: A case study with Au25(SR)18 nanoclusters. Nano Research. 8 (11), 3488-3495 (2015).
  28. Jiang, J., et al. Oxidation at the Core-Ligand Interface of Au Lipoic Acid Nanoclusters That Enhances the Near-IR Luminescence. The Journal of Physical Chemistry C. 118 (35), 20680-20687 (2014).
  29. Padelford, J. W., Wang, T., Wang, G. Enabling Better Electrochemical Activity Studies of H2O-Soluble Au Clusters by Phase Transfer and a Case Study of Lipoic-Acid-Stabilized Au22. ChemElectroChem. 3 (8), 1201-1205 (2016).
  30. Wang, T., Wang, D., Padelford, J. W., Jiang, J., Wang, G. Near-Infrared Electrogenerated Chemiluminescence from Aqueous Soluble Lipoic Acid Au Nanoclusters. Journal of the American Chemical Society. 138 (20), 6380-6383 (2016).
  31. Aldeek, F., Muhammed, M. A. H., Palui, G., Zhan, N., Mattoussi, H. Growth of Highly Fluorescent Polyethylene Glycol- and Zwitterion-Functionalized Gold Nanoclusters. ACS Nano. 7 (3), 2509-2521 (2013).
  32. Oh, E., Susumu, K., Goswami, R., Mattoussi, H. One-Phase Synthesis of Water-Soluble Gold Nanoparticles with Control over Size and Surface Functionalities. Langmuir. 26 (10), 7604-7613 (2010).
  33. Nair, L. V., Nazeer, S. S., Jayasree, R. S., Ajayaghosh, A. Fluorescence Imaging Assisted Photodynamic Therapy Using Photosensitizer-Linked Gold Quantum Clusters. ACS Nano. 9 (6), 5825-5832 (2015).
  34. Porret, E., et al. Hydrophobicity of Gold Nanoclusters Influences Their Interactions with Biological Barriers. Chemistry of Materials. 29 (17), 7497-7506 (2017).
  35. Shang, L., et al. One-Pot Synthesis of Near-Infrared Fluorescent Gold Clusters for Cellular Fluorescence Lifetime Imaging. Small. 7 (18), 2614-2620 (2011).
  36. Wu, M., et al. Solution NMR Analysis of Ligand Environment in Quaternary Ammonium-Terminated Self-Assembled Monolayers on Gold Nanoparticles: The Effect of Surface Curvature and Ligand Structure. Journal of the American Chemical Society. 141 (10), 4316-4327 (2019).
  37. Gao, X., Cui, Y., Levenson, R. M., Chung, L. W. K., Nie, S. In vivo cancer targeting and imaging with semiconductor quantum dots. Nature Biotechnology. 22 (8), 969-976 (2004).
  38. Bartczak, D., Kanaras, A. G. Preparation of Peptide-Functionalized Gold Nanoparticles Using One Pot EDC/Sulfo-NHS Coupling. Langmuir. 27 (16), 10119-10123 (2011).
  39. Dutta, D., Sailapu, S. K., Chattopadhyay, A., Ghosh, S. S. Phenylboronic Acid Templated Gold Nanoclusters for Mucin Detection Using a Smartphone-Based Device and Targeted Cancer Cell Theranostics. ACS Applied Materials & Interfaces. 10 (4), 3210-3218 (2018).
  40. Retnakumari, A., et al. CD33 monoclonal antibody conjugated Au cluster nano-bioprobe for targeted flow-cytometric detection of acute myeloid leukaemia. Nanotechnology. 22 (28), 285102(2011).
  41. Pyo, K., et al. Highly Luminescent Folate-Functionalized Au22 Nanoclusters for Bioimaging. Advanced Healthcare Materials. 6 (16), 1700203(2017).
  42. Fernández, T. D., et al. Intracellular accumulation and immunological properties of fluorescent gold nanoclusters in human dendritic cells. Biomaterials. 43, 1-12 (2015).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

157

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены