Стандартизированный протокол для тестирования предпочтений для оценки благосостояния рыб

Резюме

Фундаментальный аспект оценки благополучия животных в неволе заключается в том, чтобы спросить, есть ли у животных то, что они хотят. Здесь мы представляем протокол для определения жилищных предпочтений в зебрафиш(Danio rerio) в отношении наличия / отсутствия экологического обогащения и доступа к течению воды.

Аннотация

Методы оценки благосостояния животных пытаются принять во внимание конкретные потребности и желания животного в вопросе. Обеспечение обогащения (добавление физических объектов или конспецифических веществ в жилищную среду) часто является способом дать неволе животных возможность выбирать, с кем или с чем они взаимодействуют и как они проводят свое время. Фундаментальным компонентом водной среды, которая часто упускается из виду в неволе, однако, является способность для животного, чтобы выбрать для участия в физических упражнений. Для многих животных, в том числе рыбы, физические упражнения является важным аспектом их истории жизни, и, как известно, имеют много преимуществ для здоровья, в том числе положительные изменения в мозге и поведении. Здесь мы представляем метод оценки предпочтений среды обитания у животных в неволе. Протокол можно легко адаптировать для изучения различных факторов окружающей среды (например, гравия против песка в качестве субстрата, пластиковых растений по сравнению с живыми растениями, низкого потока по сравнению с высоким потоком воды) у различных водных видов или для использования в наземных видах. Статистическая оценка предпочтений проводится с использованием индекса предпочтений Иакова, который оценивает среду обитания с -1 (избегание) до No1 (наиболее предпочтительно). С помощью этой информации, можно определить, что животное хочет с точки зрения благосостояния, в том числе их предпочтительным местом.

Введение

Правила, регулирующие порядок размещения лабораторных животных в неволе, являются четкими и четко определенными. Международная ассоциация по оценке и аккредитации лабораторных животных (AAALAC) осуществляет надзор и управление всеми организациями и учреждениями, которые работают с исследовательскими животными, и имеет конкретные руководящие принципы для животноводства и жилья, соответствующие видам. Например, Руководство AAALAC по вопросам жилья и ухода за зебрафишами, Danio Rerio¹ "решительно поощряет" использование обогащения (добавление физических объектов или специфики в жилищной среде) при жилье зебры в неволе. В руководстве далее говорится: "Обеспечение искусственных растений или структур, которые имитируют среду обитания зебры позволяют животным выбор в их среде".

Фактические данные свидетельствуют о том, что обогащение может стимулировать рост новых нейронов (нейрогенез) в областях мозга, участвующих в обработке пространственной информации², и считается, что эти нервные изменения связаны с расширением способности к обучению³. Влияние обогащения на нейрогенез и обучение были широко изучены в различных таксонов, в том числе рыбы^4,5, птицы⁶, рептилий⁷, и млекопитающих⁸. Хотя эти типы исследований важны для понимания влияния обогащения на мозг и поведение, они не принимают во внимание конкретные выборы или предпочтения животных для конкретной среды над другой.

Фундаментальный вопрос, чтобы спросить при оценке благосостояния животных в неволе является ли или не животные имеют то, что они хотят⁹. Способ исследовать этот вопрос, который предоставляет материальные доказательства, чтобы предоставить животным выбор, который позволяет нам понять их субъективные предпочтения. Например, два исследования исследовали ли зебрарыбы предпочитают доступ к обогащенной или простой окружающей среды, с обоими исследованиями, указывающими предпочтение областей, которые содержат обогащение^10,11. Тем не менее, было также высказано предположение, что зебра рыбы кажутся равнодушными к экологическому обогащению¹², так что ответ на этот вопрос, очевидно, не ясно. Другое применение тестирования предпочтений, связанных с благополучием животных, распространяется на попытки понять, как различные аспекты обогащенной окружающей среды играют определенную роль в выборе отдельного животного. В рыбе только, различные виды обогащения имеют дифференциальное воздействие на мозг и поведение, и эта связь еще более осложняется индивидуальными различиями в чертах личности¹³. Кроме того, тестирование предпочтений может быть полезным для сравнительных исследований по обогащению окружающей среды. Даже в различных видах рыб, обогащение было показано, что влияние на многие различные виды поведения, в том числе агрессии¹⁴, смелость¹⁵, передвижения¹⁶, и рискованное поведение¹⁷.

Индекс предпочтений Иакова является статистическим тестом, который часто используется для количественной оценки жилищных предпочтений¹⁸. Индекс предпочтений Иакова присваивает значение каждой другой среде обитания в зависимости от количества животных, присутствующих в каждом типе среды обитания в разных точках времени, где предпочтения варьируются от -1 (избегание) до 1 (наиболее предпочтительным). Здесь мы описываем метод использования индекса предпочтений Иакова для изучения жилищных предпочтений в рыбе и используем пример оценки двух важных характеристик водной среды: 1) наличие или отсутствие обогащения; и 2) поток воды¹⁹. Однако протокол можно легко адаптировать для изучения различных факторов окружающей среды (например, гравия против песка в качестве субстрата, пластиковых растений по сравнению с живыми растениями, низкого по сравнению с высоким потоком воды) различных видов и ландшафтов (например, водных и наземных).

протокол

Нынешнее исследование имеет одобрение и соответствует всем требованиям по уходу за животными и протоколы использования Университета штата Пенсильвания; МАКУК No 46466.

1. Настройка аппарата предпочтений

1. Получить одобрение от Института по уходу за животными комитета (или эквивалент организации) для всех экспериментальных и животноводства процедур с участием живых животных, прежде чем начать эксперимент.
2. Используйте экспериментальный резервуар из непрозрачного белого пластика. Стены между зонами сделаны из серого акрила, который фиксируется на месте с кремниевым герметиком.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Размер экспериментального резервуара зависит от размера интересующих видов и количества используемых особей (например, для 8 взрослых зебр, рекомендуется бак 76 см L x 76 см W x 30 см Н).
3. Разделите экспериментальный резервуар на четыре зоны, которые различаются в соответствии с конкретными параметрами среды обитания, которые должны быть протестированы. Примеры различных видов обогащения для исследования включают песчаный против скалистого субстрата, искусственные растения против укрытий, или поток воды против присутствия искусственных растений (Рисунок 1).
   1. При использовании потока воды в качестве параметра, представляющих интерес, используйте небольшие насосы для подачи струй воды (см. Таблицу Материалов). Установите насосы на выбранной скорости, чтобы они обеспечивали постоянный и направленный поток воды. Выберите желаемую скорость на основе видов экологии и истории жизни (например, 14 см/с для зебры).
4. В середине экспериментального танка, есть центральная арена, где пища доставляется(рисунок 1). Доступ к центральной арене из каждой зоны осуществляется через небольшое отверстие в разделительных стенах. Открытие достаточно большой для видов, представляющих интерес, чтобы перемещаться между зонами беспрепятственно, но достаточно мал, чтобы уменьшить любые визуальные сигналы рыбы могут возникнуть из других зон.
5. Поместите биофильтр и обогреватель в каждом углу бака, но за пределами экспериментальной области, чтобы не нарушить поток воды и обеспечить постоянную температуру воды во всех зонах.
6. Настройка дополнительных экспериментальных танков, как пространство диктует. Поверните различные зоны в каждом экспериментальном резервуаре, чтобы ограничить любое последовательное смещение. Убедитесь, что все репликационные резервуары имеют одинаковые условия (одинаковые уровни освещений, температура воды и т.д.)
7. Поместите камеры (см. Таблицу Материалов)на штативы непосредственно над каждым экспериментальным резервуаром, чтобы все зоны были видны. Избегайте широкоугольных линз и убедитесь, что карты памяти имеют достаточно места для записи.
8. Установите освещение комнаты на постепенный (например, 1/2 ч) 12 л: 12 D цикл для имитации восхода и захода солнца. Поддерживайте температуру воды на уровне 25 и 1 градусов по Цельсию.

2. Захват, акклиматизация и процедура

1. Храните рыбу в домашних резервуарах, когда они не проходят испытания. Чистая все испытания рыбы из своих домашних танков и место в центре арене экспериментального танка (День 1). Минимизация времени захвата для уменьшения стресса (например, менее 30 с).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Альтернативная процедура для передачи рыбы из своего домашнего резервуара в экспериментальный резервуар, который может свести к минимуму стресс для транспортировки рыбы в стакане резервуарной воды.
2. Держите количество и пол рыбы в каждом экспериментальном баке постоянной через репликации танков и выбрать на основе размера видов и экологии.
3. В дни 1-4 рыбы проводят время, акклиматизируя и исследуя различные зоны. Не собирайте данные в эти дни.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Продлить или уменьшить количество дней для акклиматизации в зависимости от конкретного экспериментального протокола. Тем не менее, период акклиматизации должен быть достаточным, чтобы свести к минимуму последствия обработки, а также получить рыбы привыкли к кормлению в аппарате.
4. В период акклиматизации внимательно следите за качеством воды путем проведения регулярных испытаний качества воды (например, уровень рН, нитрата или нитрита) и заменяете воду при обнаружении каких-либо проблем (см. Таблицу Материалов).
5. Кормите рыбный хлопьев (см. Таблица материалов)на центральной арене с помощью плавающего пищевого кольца (см. Таблица материалов), прикрепленного к стене центральной арены на поверхности воды. Пищевое кольцо обеспечивает, чтобы частицы пищи оставались в пределах центральной арены и не представляли предубеждений для зон из-за дрейфующих продуктов питания.
6. Дайте рыбе .5 h, чтобы накормить объявление libitum перед удалением остатки пищи из экспериментального резервуара с сеткой погружения. Кормите рыбу один раз утром и один раз во второй половине дня.
7. Оцените поведение в дни 5-7. Включите камеры и запишите поведение рыбы в течение 2 ч после каждого запланированного утреннего и дневного кормления. На 8-й день удалите всю рыбу из экспериментальных резервуаров с помощью сетки для погружения и поместите их обратно в свои домашние резервуары.
8. В зависимости от того, сколько водоотливной воды доступно, заменить по крайней мере 1/3 воды в экспериментальном резервуаре со свежей водоотливной водой, чтобы уменьшить любое воздействие гормонов стресса на рыбу в следующих репликаций.
9. Установка экспериментальных танков в соответствии с графиком ротации зон ы на эту неделю. Вращание зоны уменьшает вероятность любого поведенческого смещения, возникающего в результате размещения любой зоны относительно друг друга. Затем начните процесс тестирования снова с новой партии рыбы.

3. Измерения и анализ данных

1. Загрузите видео на компьютер в конце каждого дня записи. Это гарантирует, что есть место на карте памяти перед каждым использованием.
2. Используйте программное обеспечение для видео (см. Таблицу Материалов)для количественной оценки предпочтений зон. Вручную подсчитайте количество рыбы в каждой зоне с интервалом в 5 минут в каждом периоде записи 2 ч (включите центральную арену в эти графы). Определите пол рыбы во время анализа, если по видеоматериалам возможна дифференциация между самцами и самками.
3. Чтобы проанализировать предпочтения среды обитания, вычислите среднее количество рыбы на одну зону для каждого резервуара репликации (т.е. усреднете все данные за 3 дня). Для того, чтобы получить оценку предпочтений для использования структуры, вычислите индекс предпочтений Jacobs¹⁵ как
   
   Дж.К. (г_х хп)/) (р_х и р) - 2"r_хи р.
   
   где x является зоной интереса, r_x является соотношение мили рыбы в зоне x к общему количеству рыбы во всех зонах, а p является доступной долей всех зон в экспериментальном резервуаре. Индекс колеблется от 1 евро для максимальных предпочтений и 1 евро для максимального избежания.
4. Чтобы определить, есть ли какие-либо изменения в скорости, с которой рыба переключается между зонами в течение периода наблюдения, рассчитать скорость переключения, r_sr, в первый и последний 5 мин каждого периода наблюдения, где r_sr является количество раз рыба входит в каждую зону от центральной арены, разделены на общее количество рыбы.
5. Рассмотрим рыбу, которая вступила в зону, когда все тело рыбы пересекает через отверстие, разделяющее зоны. Рассчитайте начальную и отделочные средние скорости переключения для каждого репликационного бака. Провести все поведенческие наблюдения одного и того же экспериментатора, чтобы уменьшить любые предубеждения наблюдения экспериментатора.
6. Используя статистическое программное обеспечение (см. Таблицу материалов),проведите соответствующий статистический анализ. Предлагаемые анализы включают односторонний ANOVA, с индексом предпочтений в качестве зависимой переменной и зоной в качестве переменной предиктора, и парный т-тест на начальном и отделочном среднем частоте переключения для каждого бака.
7. Примените многократное сравнение Тюки после специального теста для дальнейшего изучения сравнений зон, где каждая зона сравнивается друг с другом. Более сложный статистический анализ включает в себя смешанные модели, которые оценивают временные эффекты, эффекты арены, половые эффекты или даже индивидуальные различия в поведении.

Результаты

Мы использовали тест предпочтений для изучения жилищных предпочтений у зебры, учитывая выбор между различным обогащением, включая 1) пластиковые растения и песчаный субстрат; и 2) поток воды. Они были разделены на четыре зоны: i) Только обогащенные; ii) только поток; iii) обогащенный и поток; (...

Обсуждение

Здесь мы представляем экспериментальную конструкцию, которая позволяет исследовать предпочтения рыб для различных типов мест обитания. Некоторые важные шаги, которые имеют важное значение при тестировании предпочтений, включают: 1) обеспечение одинаковых условий для различных репли?...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Artificial Aquarium Plants	Smarlin	B07PDZQ5M5
Artificial Seaweed Water Plants for Aquarium	MyLifeUNIT	PT16L212
Experimental tanks	United State Plastic Corporation	6106
Floating food ring	SunGrow	B07M6VWH9V
Flow meter	YSI	BA1100
Jager Aquarium Thermostat Heater	Ehiem	3619090
Master Water Quality Test Kit	API	34
SPSS Statistics for Macintosh	IBM	Version 25.0
Submersible Pump, SL-	Songlong	SL-381
TetraMin Tropical Flakes	Tetra	16106
Triple Flow Corner Biofilter	Lee's	13405
Video camera	Coleman	TrekHD CVW16HD
Windows Media Player (video software)	Microsoft	Windows Media Player 12