Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Гипоксия является отличительной чертой микроокружения опухоли и играет решающую роль в прогрессировании рака. В этой статье описывается процесс изготовления гипоксического рака на чипе на основе технологии 3D-печати клеток для повторения патологии рака, связанной с гипоксией.

Аннотация

Рак микроокружения оказывает значительное влияние на прогрессирование заболевания. В частности, гипоксия является ключевым фактором выживания при раке, инвазии и хеморазистанции. Хотя для изучения патологии рака, связанной с гипоксией, было разработано несколько моделей in vitro, сложное взаимодействие микроокружения рака, наблюдаемое in vivo, еще не было воспроизведено из-за отсутствия точного пространственного контроля. Вместо этого были предложены подходы к 3D-биофабрикации для создания микрофизиологических систем для лучшей эмуляции экологии рака и точной оценки противоопухолевого лечения. Здесь мы предлагаем подход к 3D-клеточной печати для изготовления гипоксического рака на чипе. Вызывающие гипоксию компоненты в чипе были определены на основе компьютерного моделирования распределения кислорода. Концентрические кольца Рак-строма были напечатаны с использованием биолинь, содержащих клетки глиобластомы и эндотелиальные клетки, для рекапитуляции типа солидного рака. Полученный чип реализовал центральную гипоксию и усугубил злокачественность при раке с образованием репрезентативных патофизиологических маркеров. В целом, ожидается, что предлагаемый подход к созданию микрофизиологической системы с твердым раком и миметикой преодолеет разрыв между моделями in vivo и in vitro для исследований рака.

Введение

Микроокружение рака является критическим фактором, стимулирующим прогрессирование рака. Множественные компоненты, включая биохимические, биофизические и клеточные сигналы, определяют патологические особенности рака. Среди них гипоксия тесно связана с выживаемостью при раке, пролифрацией и инвазией1. Из-за неограниченного роста и деления раковых клеток питательные вещества и кислород непрерывно истощаются, и генерируется гипоксический градиент. В условиях низкого содержания кислорода клетки активируют молекулярный каскад, связанный с гипоксией индуцируемым транскрипционным фактором (HIF). Этот процесс индуцирует некротическое ядро, запускает мет....

протокол

1. Компьютерное моделирование образования градиента кислорода

  1. Генерация 3D-геометрической модели для гипоксической печати рака на чипе
    1. Запустите программное обеспечение 3D CAD.
    2. Набросок геометрической модели гипоксического рака на чипе. Нажмите на Sketch и выберите нужную плоскость, чтобы нарисовать геометрию. Обратитесь к чертежу(рисунок 2A)для детального масштабирования каждой детали.
    3. Установите толщину геометрии, нажав на Feature-Protrusion Boss/Base. Введите желаемую толщину (см. рисунок 2A)в пустое поле и выбери....

Результаты

Гипоксический рак на чипе был разработан с использованием автоматизированной технологии 3D-печати клеток для повторения гипоксии и патологии, связанной с раком(рисунок 1). Транспортировка и потребление кислорода моделировались с использованием 3D-геом.......

Обсуждение

В этом исследовании мы описываем процесс изготовления гипоксического рака на чипе на основе технологии 3D-печати клеток. Формирование гипоксического градиента в проектируемом чипе было предсказато с помощью компьютерного моделирования. Среда, которая может индуцировать гетерогенный.......

Раскрытие информации

Авторы не раскрывают информацию.

Благодарности

Это исследование было поддержано Национальным исследовательским фондом Кореи (NRF), финансируемым Министерством образования (No 2020R1A6A1A03047902 и NRF-2018H1A2A1062091) и правительством Кореи (MSIT) (No. NRF-2019R1C1C1009606 и NRF-2019R1A3A3005437).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Cells
Human umbilical vein endothelial cellsPromocellC-12200
U-87 MG cellsATCCATCC HTB-14
Disposable
0.2 μm syringe filterSartorius16534-K
10 mL disposable syringeJung Rim10ml 21G32
10 mL glass vialHubenaA0039
10 mL Serological pipette tipSPL lifescience91010
15 mL conical tubeSPL lifescience50015
18G plastic needleMusashi engineeringPN-18G-B
20G plastic tapered dispense tipMusashi engineeringTPND-20G-U
22x50 glass coverMARIENFIELD0101142
25 mL Serological pipette tipSPL lifescience90125
3 mL disposable syringesHENKE-JET4020-X00V0
40 µm cell strainerFalcon352360
5 mL Serological pipette tipSPL lifescience91005
50 mL conical tubeSPL lifescience50050
50 mL Serological pipette tipSPL lifescience90150
50N precision nozzleMusashi engineeringHN-0.5ND
Aluminum foilSINKWANG
Capillary tipsGilsonCP1000
Cell-scrapperSPL lifescience90030
Confocal dishSPL lifescience200350
ParafilmBemisPM996
Pre-coated histology slideMATSUNAMIMAS-11
ReservoirSPL lifescience23050
T-75 cell culture flaskSPL lifescience70075
Equipment
3DX printerT&R Biofab
AutoclaveJEIOTECHAC-12
CentrifugerCyrozen1580MGR
Confocal laser microscopyOlympus Life ScienceFV 1000
Fluorescence microscopeFISHER SCEINTIFICO221S366
ForcepKorea Ace ScientificHC.203-30
Hand tally counterKTRIO
HemocytometerMARIENFIELD0650030
IncubatorPanasonicMCO-170AIC
Laminar flow cabinetDAECHUNG SCIENCECB-BMMS C-001
Metal syringeIWASHITA engineeringSUS BARREL 10CC
Operating ScissorsHiroseHC.13-122
OvenJEIOTECHOF-12, H070023
Positive displacement pipetteGILSONNJ05652
RefrigeratorSAMSUNGCRFD-1141
Voltex MixerDAIHAN scientificVM-10
Water bathDAIHAN SCIENTIFICWB-11
Water purifierWASSER LABDI-GR
Materials
0.25 % Trypsin-EDTAGibco25200-072
10x PBSIntronIBS-BP007a
4% ParaformaldehydeBiosesang
70% EthanolDaejung4018-4410
Anti-CD31 antibodyAbcamab28364
Anti-HIF-1 alpha antibodyAbcamab16066
Anti-SHMT2/SHMT antibodyAbcamab88664
Anti-SOX2 antibodyAbcamab75485
Bovine Serum AlbuminThermo scientificJ10857-22
Collagen from porcine skinDalim tissenPC-001-1g
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)ThermofisherD1306
Endothelial Cell Growth Medium-2PromocellC22011
Fetal bovine serumGibco12483-020
Goat anti-Mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488TheromofisherA-11001
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 594TheromofisherA-11012
High-glucose Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)HycloneSH30243-0
Hydrochloric acidSigma-Aldrich311413-100ML
Live/dead assay kitInvitrogenL3224
Mouse IgG1, kappa monoclonal [15-6E10A7] - Isotype ControlAbcamab170190
Penicillin/streptomycinGibco15140-122
Phenol red solutionSigma-AldrichP0290-100ML
Poly(ethylene-vinyl acetate) Poly science06108-500
PolydimethylsiloxaneDowhitechsylgard 184
Rabbit IgG, polyclonal - Isotype ControlAbcamab37415
Sodium hydroxide solutionSamchunS0610
Triton X-100BiosesangTRI020-500-50
Trypan BlueSigma-AldrichT8154
Software
COMSOL Multiphysics 3.5aCOMSOL AB
IMS beamerin-house software
SolidWorks PackageDassault Systems SolidWorks Corporation

Ссылки

  1. Jing, X., et al. Role of hypoxia in cancer therapy by regulating the tumor microenvironment. Molecular Cancer. 18 (1), 157 (2019).
  2. Al Tameemi, W., Dale, T. P., Al-Jumaily, R. M. K., Forsyth, N. R. Hypoxia-modified cancer cell metabolism.<....

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

1673D3D

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены