Мышиная модель хронического панкреатита с помощью инфузии TNBS желчных протоков

Резюме

Хронический панкреатит (ХП) – это заболевание, характеризующееся воспалением и фиброзом поджелудочной железы, часто связанное с трудноизлечимыми болями в животе. Эта статья посвящена совершенствованию метода генерации мышиной модели CP с помощью инфузии желчных протоков с 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислотой (TNBS).

Аннотация

Хронический панкреатит (ХП) является сложным заболеванием, включающим воспаление и фиброз поджелудочной железы, атрофию желез, боль в животе и другие симптомы. Для изучения ДЦП было разработано несколько моделей грызунов, из которых инфузионная модель желчного протока 2,4,6-тринитробензоловой сульфоновой кислоты (TNBS) воспроизводит особенности невропатичной боли, наблюдаемой при ДЦП. Тем не менее, инфузия препарата желчных протоков у мышей технически сложна. Данный протокол демонстрирует процедуру инфузии TNBS желчных протоков для генерации модели мыши CP. TNBS вливали в поджелудочную железу через ампулу Фатера в двенадцатиперстной кишки. Этот протокол оптимизировал объем препарата, хирургические методы и обращение с лекарствами во время процедуры. Мыши, получаемые TNBS, показали особенности CP, отраженные в снижении массы тела и веса поджелудочной железы, изменениях в поведении, связанном с болью, и аномальной морфологии поджелудочной железы. С этими улучшениями смертность, связанная с инъекцией TNBS, была минимальной. Эта процедура не только имеет решающее значение для создания моделей заболеваний поджелудочной железы, но также полезна для местной доставки лекарств поджелудочной железе.

Введение

Хронический панкреатит (ХП) является хроническим воспалительным заболеванием, характеризующимся атрофией поджелудочной железы, фиброзом, болью в животе и возможной потерей как экзокринных, так и эндокринных функций^1. Современные медицинские и хирургические методы лечения не являются лечебными, но предпринимаются для облегчения симптомов, которые являются следствием заболевания: рефрактерная боль в животе, эндокринная и экзокриновая дисфункция. Поэтому срочно необходимы более эффективные методы^{лечения 2.} Животные модели обеспечивают важный инструмент для развития лучшего понимания заболевания и исследования потенциальных ....

протокол

Все процедуры были проведены с одобрения институциональных комитетов по уходу за животными и их использованию в Медицинском университете Южной Каролины и Медицинском центре Ральфа Х. Джонсона. В этом исследовании использовались самцы мышей C57BL/6J в возрасте от 8 до 10 недель. Мышей размещали по стандартному циклу 12 светлых/ 12 темных с ad libitum доступом к пище и воде.

1. Приготовление раствора TNBS для инъекций

1. Готовят 10% этанол в 0,9% физиологического раствора. Растворить запас TNBS (см. Таблицу материалов)в 10% этаноле до конечной концентрации 7,5 мМ путем добавления 7,5 мкл TNBS в 1 мл 10% этанола.
   ВНИ....

Результаты

Процедуры инфузии желчных протоков были оптимизированы для снижения смертности мышей, связанной с этой процедурой^10. TNBS впервые давали в общем объеме 35 мкл или 50 мкл. Инъекция ТНБС в объеме 50 мкл может достичь всей поджелудочной железы и вызвать более однородный фенотип заб.......

Обсуждение

Инфузия желчных протоков TNBS для индуцирования хронического панкреатита технически сложна у мышей, так как до 22,5% мышей могут умереть в течение 3-4 дней после инфузии препарата^10. Здесь этот отчет уточнил процедуру, основанную на предыдущих исследованиях, и снизил раннюю смер.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% Neutral buffered formalin v/v	Fisher Scientific	23426796
Alcohol prep pads, sterile	Fisher Scientific	22-363-750
Animal Anesthesia system	VetEquip, Inc.	901806
Buprenorphine hydrochloride, injection	Par Sterile Products, LLC	NDC 42023-179-05
Centrifuge tubes, 15 mL	Fisher Scientific	0553859A
Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade	Fisher Scientific	BP2818500
Extra fine Micro Dissecting scissors 4” straight sharp	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5882
Graefe forceps 4” extra delicate tip	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5136
Heated pad	Amazon	B07HMKMBKM
Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25”	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-7850
Insulin syringe with 31-gauge needle	BD	324909
Iodine prep pads	Fisher Scientific	19-027048
Isoflurane	Piramal Critical Care	NDC 66794-017-25
Micro clip applying forceps 5.5”	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5410
Micro clip, straight strong curved 1x6mm	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5433
Micro clip, straight, 0.75mm clip width	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5420
Picrylsulfonic acid solution, TNBS, 1M in H2O	Millipore Sigma	92822-1ML
Polypropylene Suture 4-0	Med-Vet International	MV-8683
Polypropylene Suture 5-0	Med-Vet International	MV-8661
Sodium chloride, 0.9% intravenous solution	VWR	2B1322Q
Surgical drape, sterile	Med-Vet International	DR1826
Tissue Cassette	Fisher Scientific	22-272416
Von Frey filaments	Bioseb	EB2-VFF