Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Сосудистое сплетение (ХП), малоизученная ткань в неврологии, играет ключевую роль в здоровье и заболеваниях центральной нервной системы. Этот протокол описывает метод микродиссекции для выделения CP и использование сканирующей электронной микроскопии для получения общего представления о его клеточной структуре.
Сосудистое сплетение (ХП), сильно васкуляризированная структура, выступающая в желудочки головного мозга, является одной из наиболее малоизученных тканей в неврологии. Поскольку становится все более очевидным, что эта крошечная структура играет решающую роль в здоровье и заболеваниях центральной нервной системы (ЦНС), крайне важно правильно рассечь ДЦП из желудочков головного мозга таким образом, чтобы обеспечить последующую обработку, начиная от функционального и заканчивая структурным анализом. Здесь описана изоляция ЦП бокового и четвертого желудочков головного мозга мыши без необходимости использования специализированных инструментов или оборудования. Этот метод изоляции сохраняет жизнеспособность, функцию и структуру клеток внутри CP. Из-за высокой васкуляризации CP можно визуализировать плавающим внутри желудочковых полостей мозга с помощью бинокулярного микроскопа. Однако транскардиальная перфузия, необходимая для последующего анализа, может усложнить идентификацию ткани ЦП. В зависимости от дальнейших этапов обработки (например, анализ РНК и белка) это может быть решено путем визуализации CP с помощью транскардиальной перфузии бромфеноловым синим. После выделения CP может быть обработан с использованием нескольких методов, включая анализ РНК, белка или отдельных клеток, чтобы получить более глубокое понимание функции этой особой структуры мозга. Здесь сканирующая электронная микроскопия (SEM) на всей монтировке CP используется для получения общего представления о структуре.
Жесткие барьеры отделяют центральную нервную систему (ЦНС) от периферии, включая гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) и гемато-спинномозговой жидкость (СМЖ). Эти барьеры защищают ЦНС от внешних воздействий и обеспечивают сбалансированную и контролируемую микросреду 1,2,3. В то время как ГЭБ широко изучался с течением времени, гемато-ликворный барьер, расположенный в сосудистом сплетении (ХП), только приобрел растущий исследовательский интерес в течение последнего десятилетия. Этот последний барьер может быть обнаружен в четырех желудочках головного мозга (рис. 1A, B) и характери....
Все эксперименты на животных, описанные в этом исследовании, были проведены в соответствии с национальным (Бельгийский закон 14/08/1986 и 22/12/2003, Бельгийский королевский указ 06/04/2010) и европейским законодательством (Директивы ЕС 2010/63/ЕС, 86/609/ЕЭС). Все эксперименты на мышах и животных были одобрены комитетом по этике Гентского университета (номера разрешений LA1400091 и EC 2017-026).
1. Подготовка
Описанный протокол способствует эффективному выделению CP из бокового (рис. 2A-C) и четвертого (рис. 2D-F) желудочков головного мозга мыши. После изоляции всего мозга щипцы используются для сагиттальной гемисекции мозга и .......
Здесь описан способ выделения сосудистого сплетения (ХП) из бокового желудочка и четвертого желудочка мозга мыши. Весь этот метод монтажа CP облегчает дальнейший анализ с использованием репертуара методов, чтобы получить полное представление о морфологии CP, клеточном составе, транскри.......
Авторам раскрывать нечего.
Эта работа была поддержана Бельгийским фондом исследований болезни Альцгеймера (SAO; номер проекта: 20200032), Исследовательским фондом Фландрии (FWO Vlaanderen; номера проектов: 1268823N, 11D0520N, 1195021N) и Фондом Байе Латура. Мы благодарим VIB BioImaging Core за обучение, поддержку и доступ к инструментальному парку.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
26G x 1/2 needle | Henke Sass Wolf | 4710004512 | |
Aluminium specimen mounts | EM Sciences | 75220 | |
Cacodylate buffer | EM Sciences | 11652 | |
Carbon steel surgial blades | Swann-Morton | 0210 | size: 0.45 mm x 12 mm |
Carbon adhesive tabs -12 mm | EM Sciences | 77825-12 | |
Critical point dryer | Bal-Tec | CPD030 | |
Crossbeam 540 | Zeiss | SEM system | |
Forceps | Fine Science Tools GmbH | 91197-00 | |
Glutaraldehyde | EM Sciences | 16220 | |
Heparin | Sigma-Aldrich | H-3125 | |
Ismatec Reglo ICC Digital Peristaltic pump 2-channel | Metrohm Belgium N.V | CPA-7800160 | |
Osmium Tetroxide | EM Sciences | 19170 | |
Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | |
Phosphate buffered saline (PBS) | Lonza | BE17-516F | |
Platinum | Quorum | Q150T ES | PBS without Ca++ Mg++ or phenol red; sterile filtered |
Sodium pentobarbital | Kela NV | 514 | |
Specimen Basket Stainless Steel | EM Sciences | 70190-01 | |
Stemi DV4 Stereo microscope | Zeiss | ||
Surgical scissors | Fine Science Tools GmbH | 91460-11 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеСмотреть дополнительные статьи
This article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены