Прямой синтез ЭМ-видимых наночастиц золота в клетках для анализа локализации белка с хорошо сохранившейся ультраструктурой

Обнаружение и локализация белка имеют важное значение в биологических исследованиях. Наш протокол описывает новую технологию электромагнитной маркировки с использованием генетически кодируемых меток, которая позволяет визуализировать одну молекулу in situ с хорошо сохранившейся ультраструктурой. Крайне важно избегать чрезмерной фиксации.

Метод мечения основан на активности цистеинов в метках, которые обладают высокой чувствительностью к альдегидному сшиванию. Наш протокол исключает использование альдегидных фиксаторов и сохраняет активность меток и ультраструктуру. в то же время.

Маркировка ЭМ всегда была сложной задачей, страдая от плохой морфологии или неэффективной маркировки. Наши протоколы синтезируют наночастицы in situ непосредственно на отдельных белках, чтобы обеспечить четкую и точную локализацию целевых белков с высоким отношением сигнал/шум, высокой эффективностью и специфичностью. До сих пор мы достигли отличной маркировки в изолированных белках, клетках E.coli, дрожжевых клетках и клетках HeLa.

Мы изучим и оптимизируем метод для нанесения на образцы тканей. Объединение преобладающих крио-FIB и крио-ЭМ технологий позволит нам решать важные биологические вопросы.