Получение диссоциации личинок Wildtype и Transgenic данио-рерио и целых личинок WildType

Начните с получения икры дикого типа и трансгенных рыбок данио из соответствующего племенного плана. Возьмите 15-сантиметровую чашку Петри, содержащую HEPES-буферизованную среду Е3 или Е3. И соберите соответствующее количество оплодотворенной икры из желаемой установки для разведения данио-рерио. Инкубируйте оплодотворенные яйца в Е3 при температуре 28 градусов Цельсия с соответствующим светлым и темным циклом.

Через один день после оплодотворения удалите все неоплодотворенные яйцеклетки и дайте оплодотворенным развиваться до пяти dpf. Выберите трансгенных личинок данио-рерио по одному dpf. Прежде чем приступить к диссоциации целых личинок, обезболите пять личинок дикого типа dpf, используя 0,016% трикаина, и перенесите 30 личинок под наркозом в чашку Петри, содержащую один миллилитр 10-кратного раствора трипсина-ЭДТА.

Затем с помощью лезвия бритвы измельчите личинки на мелкие кусочки в чашке Петри. Переложите измельченных личинок в микроцентрифужную пробирку с двумя миллилитрами 10-кратного раствора трипсина-ЭДТА и оставьте пробирку на льду на три часа. Каждый час пипеткой P1000 пипетка выводит содержимое вверх и вниз, чтобы стимулировать диссоциацию.