This work was supported by AI101263 from the National Institutes of Health (T.V.B), and by a grant from The Hartwell Foundation (M.L.M). M.L.M. is a member of the Duke Comprehensive Cancer Center.

ПРИМЕЧАНИЕ: Все экспериментальные процедуры, связанные с использованием крыс было сделано в соответствии с процедурами, утвержденными уходу и использованию комитета животных Университета Дьюка в. 1. Подготовка интубации трахеи канюли <ol><li> Отрежьте конец иглы для 2 дюйма 14 G angiocathether иглы с кусачками. </li><li> Pinch просвет иглы закрыты игл носом плоскогубцами. </li><li> Отрежьте ущипнул раздел вниз к краю открытой просвета части с кусачками, а затем вырезать края с обеих сторон оставшийся конец в 30 - под углом 45 ° к иглы края. </li><li> Поместите нижнюю 3 - 4 мм канюли в открытом пространстве прямых раструбную плоскогубцами и вытяните вверх, пока небольшой восходящей кривой не была сформирована в конце. ПРИМЕЧАНИЕ: Это будет способствовать направляя катетер в трахею (рисунок 1). </li><li> Использование тонкой наждачной бумагой, чтобы сгладить кромки на конце канюли. </li><li&gt; Вернуться ослабленный инструмент в трубку ангиокатетера. Убедитесь, что трубка немного короче, чем закругленным иглы. </li></ol> 2. Предварительное хирургических процедур <ol><li> Настройте сайт для процедуры путем размещения операционного микроскопа установлен на 10-кратным увеличением над рабочей зоны. </li><li> Поставьте потепления накладка на рабочей зоны и накройте чистой поглощающей панели. </li><li> Настройка частоты сердечных сокращений и насыщения крови кислородом монитора вблизи операционного поля. </li><li> Взвесьте крысы по весу, на основе лекарственных доз (например, послеоперационного обезболивания, антибиотиков, или лимфоцитов истощения антитела). ПРИМЕЧАНИЕ: Типичная взрослых крыс весом от 350 - 450 г. </li><li> Седативный крыс с испаренной 3% изофлуран-O 2 (3 л / мин) с использованием индукционной камеру выпускают в системе газа поглощать отходы анестетика, содержащего активированный уголь. Разрешить 5 мин для индукции анестезии, чтобы обеспечить глубокого наркоза, необходимое для интубации трахеи. </li><li> Администрирование Carprofen или Meloxicane (4,4 мг / кг) подкожно крысе до перехода с интубации и хирургии. </li><li> Используйте электрические ножницы брить шею и грудную клетку под наркозом крысы до интубации. </li></ol> 3. Интубация <ol><li> Подготовка установки интубации путем трения небольшое количество смазки (например, KY гель) на конце канюли интубации. Включите вентилятора начать подачу изофлуран газа через трубопровод разъема. </li><li> Трансфер крысы интубации аппарата и приостановить крысу на металлическом стержне своим верхним резцов (рис 2А). ПРИМЕЧАНИЕ: Некоторые интубации устройства могут быть приобретены в Интернете. Модель, показанная здесь домашний помощью акрилового листа формируются вокруг разделов 2 х 4 дюйма поясничной части с помощью бутан факел, и подкрепления крепятся хлороформом. Бар (или металлической проволоки) крепится путем сверления отверстий более липкой лентой, размещенных на SIDE акрилового чтобы предотвратить раскол и трещин. </li><li> Транс-освещения шею крысы, поместив гибче высокоинтенсивного источника света 1 - 2 см от вентральной поверхности шеи (рис 2б). </li><li> Используйте пару студенческих стандартная схема щипцов, чтобы вытащить язык нежно вверх и в сторону нижних зубов. Власть язык между большим и указательным пальцами одной руки при размещении плоской внутренней поверхности одной стороны пинцетом против нижней части языка. Пресс-вентрально, чтобы разоблачить надгортанник и диафрагмы гортани (рис 2С). </li><li> Представьте голосовые связки и направлять вздернутый, тупого конца интубации канюли впереди через открытую голосовую щель в трахею, пока ступица ангиокатетер не коснется резцы. </li><li> Снимите металлическую стилет, и приложить трубку для анестезии открытия ангиокатетера начать вентиляцию изофлураном. ПРИМЕЧАНИЕ: типичный Flo кислородаВт Скорость на ИВЛ 3 л / мин с 3% изофлуран. <ol><li> Установка вентилятора со скоростью 60 дыханий / мин в объеме контролируемых режиме вентилятора, который достигает давление ~ 12 - 14 мм рт. Используйте положительное давление в конце выдоха (ПДКВ) 3 см Н 2 О. </li></ol></li><li> Соблюдайте двустороннего груди расширение стенки в синхронизации с вентилятором для обеспечения правильного размещения эндотрахеальной трубки. </li><li> Применить ветеринар-рекомендуется глазная мазь для глаз крысы, чтобы предотвратить сухость в то время как под наркозом. </li><li> Применить ветеринар мазь на глазах крысы, чтобы предотвратить сухость в то время как под наркозом. </li><li> Закрепите эндотрахеальной трубки в голову крысы с полосой ткани ленты. Обеспечить прочное соединение между эндотрахеальной трубкой и обезболивающий труб притока. </li><li> Прикрепите крови кислородом, монитор сердечного ритма до ног крысы и начать мониторинг. Подтвердите надлежащего обезболивания, подтвердив нет никакой реакции на ке-пинч. </li></ol> 4. Thoracotomy и Тимэктомия <ol><li> Следуйте стандартной асептической техники для полноты процедуры. <ol><li> Очистите рабочую зону и операционный стол рабочий и дезинфицировать с 70% -ным раствором этанола. </li><li> Используйте стерильные хирургические перчатки во время процедуры, и автоклав все инструменты и материалы, используемые во время процедуры. </li><li> Применить провидон-йод для всей области груди и дайте ему высохнуть. Затем очистите поверхность кожи с 70% этанола на марлю. Обложка крысу с прозрачной пластиковой пленкой, резки отверстие, чтобы выставить стерильную операционную поле. </li></ol></li><li> Определить suprasternal выемку в верхней грудной области. Сделайте 2 см срединный разрез через кожу, начиная 2 - 3 мм выше suprasternal выемку и проходящей дистальнее средней линии вдоль грудины тупыми наконечниками ножницы Ши. </li><li> Выполните 1,5 см средний стернотомию от suprasternal паз снова тупыми наконечниками ножницы Ши. КEep нижний край ножницами только под грудиной и заранее медленно. </li><li> Вставьте небольшую Альм втягивающим прямо под отделенной грудины и открывая предварительно трахеи ремень мышцы (sternohyoid и sternothyroid мышцы). Отделите до трахеи мышц ремень тупыми щипцами Грефе. Примечание: В этот момент трахеи можно видеть, а интубации трубка должна быть визуализированы внутри трахеи. </li><li> Поместите штыри небольшой Альм втягивающего под отделенных мышц ремень и грудины. Откройте втягивающего подвергайте превосходную аспект тимуса. </li><li> Используйте тонкий пинцет, Дюмон, чтобы освободить боковых краев ткани вилочковой железы и подвергать нижние тимуса долей. </li><li> Потяните тимус мягко сверху в открытом месте разреза, заботясь, чтобы избежать контакта с верхней полой вены, подключичной и сонной сосудов, и свести к минимуму нарушения хрупкого плевральной прокладки между тимуса и легких. </li><li> Так как Tон тимуса сосуды рассечены и показал, используйте микро-ножницы, чтобы разделить их. Используйте ватный тампон, если это необходимо удерживать давление на сосуды для остановки кровотечения. </li><li> Доставка нижние тимуса долей в разрез, а затем резко лизировать задние вложения. Удалить нетронутыми тимус и внимательно осмотрите удален тимус для любого пропавшего разделах. Примечание: Небольшие грудные лимфатические узлы могут быть визуализированы, окружающий тимус и часто трудно отличить от тимуса ткани. Они будут дискретные круглые узлы с аналогичным внешнему виду тимуса ткани, но не будет в непрерывности с тимусе. </li><li> Снимите ретрактор Альм и закрыть sternohyoid и sternothyoid мышцы с двумя прерывается 5-0 Maxon швов. </li><li> Применить 2 капли клея цианоакрилат ткани хирургическое класса по швов для герметизации средостения при хорошей вентиляции с положительным давлением. ПРИМЕЧАНИЕ: Это позволит уменьшить частоту развития пневмоторакса и гематомы. </li><li> Закройте улernum с двумя прерывается 4-0 шелковые швы на разделочной иглы. Вставьте иглу через зазоры между ребрами, заботясь, чтобы направлять иглу прямо под грудиной, чтобы избежать основной слой мышц. </li><li> Закройте слой кожи с запущенным 4-0 нейлон шва. Прекратить изофлурана на данном этапе сократить послеоперационный период выхода из наркоза. </li><li> Очистите сайт разрез и окружающую кожу с физиологическим раствором смачивают марлю. </li><li> Нанесите несколько капель бупивакаина (0,25%) для местной анестезии, а затем по 1 - 2 капли цианакрилатного клея на разрез, чтобы запечатать разрез. </li><li> Продолжить, чтобы проветрить до крыса показывает признаки независимого дыхательных усилий и начинает двигаться свои конечности. Экстубации крысу и дать ему восстановиться под пристальным наблюдением в клетке, размещенной на потепление площадку. </li><li> Администрирование бупренорфин (0,01 - 0,05 мг / кг) подкожно крысе сразу же после операции и повторить каждые 8-12 ч в течение 48 ч пероральноСанкт-оперативно (обычно 5 суммарные дозы). В 24 и 48 часов после операции, управлять Carprofen или Meloxicane (4,4 мг / кг) подкожно (3 Суммарные дозы в том числе предоперационной дозы). </li><li> Продолжайте следить за пока крысы не движется вокруг клетки. В каких-либо признаков респираторного дистресса, выполните повторное зондирование и повторное исследование органов грудной клетки. <ol><li> Не оставляйте животное без присмотра, пока он не пришел в достаточной сознание поддерживать грудины лежачее положение. </li><li> Не возвращать животное, которое перенес операцию на компании других животных, пока полностью выздоровел. </li></ol></li><li> Удалить слой кожи швы 1 неделю после операции. </li></ol>

<ol>
	<li>Hard, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymectomy+in+the+neonatal+rat.">Thymectomy in the neonatal rat.</a> Lab. Anim. 9 (2), 105-110 (1975).</li><li>Kobayashi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+complete+thymectomy+in+adult+rats.">A technique for complete thymectomy in adult rats.</a> J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0 (1994).</li><li>Delrivi&#232;re, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+technique+of+complete+thymectomy+in+adult+rats+without+tracheal+intubation.">New technique of complete thymectomy in adult rats without tracheal intubation.</a> Microsurgery. 18 (1), 6-8 (1998).</li><li>Walker, K. G., Jacques, B. C., Tweedle, J. R., Bradley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simpler+technique+for+open+thymectomy+in+adult+rats.">A simpler technique for open thymectomy in adult rats.</a> J. Immunol. Methods. 175 (1), 141 (1994).</li><li>Na, N., Zhao, D., Huang, Z., Hong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+rat+intubation+and+thymectomy.">An improved method for rat intubation and thymectomy.</a> Chin. Med. J. (Engl). 124 (17), 2723-2727 (2011).</li><li>Kastl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplification+of+rat+intubation+on+inclined+metal+plate).">Simplification of rat intubation on inclined metal plate).</a> Adv. Physiol. Educ. 28 (1-4), 29-34 (2004).</li><li>Weksler, B., Ng, B., Lenert, J., Burt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+endotracheal+intubation+in+the+rat.">A simplified method for endotracheal intubation in the rat.</a> J. Appl. Physiol. 76 (4), 1823-1825 (1994).</li><li>Jou, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+intubation+using+a+new+oropharyngeal+intubation+wedge.">Simplified rat intubation using a new oropharyngeal intubation wedge.</a> J. Appl. Physiol. 89 (5), 1766-1770 (2000).</li><li>Rivard, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+intubation+and+ventilation+for+surgical+research.">Rat intubation and ventilation for surgical research.</a> J. Invest. Surg. 19 (4), 267-274 (2006).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+isolated,+vascular+whole+thymus+transplantation+in+nude+rats.">A model of isolated, vascular whole thymus transplantation in nude rats.</a> Transplant Proc. 44 (5), 1394-1398 (2012).</li><li>AbuAttieh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+maturation+of+antibodies+requires+integrity+of+the+adult+thymus.">Affinity maturation of antibodies requires integrity of the adult thymus.</a> Eur. J. Immunol. 42 (2), 500-510 (2012).</li><li>Reeves, J. P., Reeves, P. A., Chin, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+surgery:+removal+of+the+spleen+or+thymus.">Survival surgery: removal of the spleen or thymus.</a> Curr. Protoc. Immunol. 1 (Unit 1.10), (2001).</li><li>Siemionow, M., Izycki, D., Ozer, K., Ozmen, S., Klimczak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+thymus+in+operational+tolerance+induction+in+limb+allograft+transplant+model.">Role of thymus in operational tolerance induction in limb allograft transplant model.</a> Transplantation. 81 (11), 1568-1576 (2006).</li><li>Satoh, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosuppressive+effect+of+long-term+drainage+of+thoracic+duct+on+immunological+memory+in+adult+thymectomized+rats.+Transplant.">Immunosuppressive effect of long-term drainage of thoracic duct on immunological memory in adult thymectomized rats. Transplant.</a> Proc. 37 (4), 1947-1948 (2005).</li><li>Groen, H., Klatter, F., Pater, J., Nieuwenhuis, P., Rozing, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporary,+but+Essential+Requirement+of+CD8++T+Cells+Early+in+the+Pathogenesis+of+Diabetes+in+BB+Rats+as+Revealed+by+Thymectomy+and+CD8+Depletion.">Temporary, but Essential Requirement of CD8+ T Cells Early in the Pathogenesis of Diabetes in BB Rats as Revealed by Thymectomy and CD8 Depletion.</a> Clin. Dev. Immunol. 10 (2-4), 141-151 (2003).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Настоящий Протокол для полного тимэктомии обеспечивает минимально инвазивный подход с трехслойной закрытия разреза с хирургическим нанесением клея предназначена для сведения к минимуму осложнения. Полное удаление тимуса была продемонстрирована потери наивных Т-клеток и IHC окрашив?...

С начала 1960-х годов, тимус был признан за его важной роли в развитии центральной иммунологической толерантности. Грызунов тимэктомия оказался процедурой, необходимой для определения роли тимуса в лимфоцитов дифференциации, аутотолерантности и immunotolerance в условиях трансплантации аллотрансплантата и метастазирования опухоли. Удаление крысы тимуса позволяет исследований, связанных с истощением Т-клеток или приемного передачу определенных групп населения Т-клеток без повторного появления родных наивных Т-клеток. Thymectomies неонатальной грызунов может быть достигнуто методом всасывания с надежными результатами 1. У взрослых крыс, этот метод связан с приблизительной смертности на 20% и часто приводит к неполному тимэктомии 2. Последовательно достичь полного тимэктомия у взрослых крыс, открытая экспозиция средостения через срединную стернотомию требуется. Тем не менее, этотпроцедура, связанная с осложнениями, которые включают в себя повреждение трахеи, кровоизлияния и пневмоторакс, ведущие к общей смертности в пределах от 1,5 - 6% 2- 4. За последние два десятилетия совершенствования методов Тимэктомия снизились послеоперационные осложнения и улучшению показателей выживаемости. Интубация трахеи позволяет вентиляции с положительным давлением уменьшилось пневмоторакс ставки 5. Методы интубации описано ранее диапазон от открытого воздействия трахеи менее инвазивных методов, использующих прямой визуализации голосовых связок. Осложнения, связанные с процедурой интубации включают трахеи травмы, вокальный разрыв мозга, непреднамеренное интубация пищевода и кровотечение в результате пункции сердца или рваная рана верхней полой вены. Кроме того, близкое расположение нижних долей тимуса в плевральной подкладке может привести к пневмоторакс. Здесь мы опишем техникутимэктомия через минимально инвазивной 2 см разрез кожи после простой метод интубации трахеи с использованием притупляются класса ангиокатетера и чрескожной освещение трахеи. Тимэктомия включает в себя 1,5 см стернотомию и закрытие трехслойную с хирургической нанесением клея для герметизации средостения и свести к минимуму случаи кровоизлияния и респираторных осложнений. Этот метод надежно приводит к полному тимэктомии о чем свидетельствует исчезновение CD4 + и CD8 + наивных Т-клеток следующим тимэктомии и отсутствие тимуса ткани на окрашивание IHC. Оперативные раз и пригородных процессуальное смертность сведена к минимуму.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="718">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:117px;">Company</td>
			<td style="width:152px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">2&#34; 14-gauge angiocatheter</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Operating microscope</td>
			<td style="width:117px;">Zeiss</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Warming pad</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:283px;">Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors</td>
			<td style="width:117px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:152px;">ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor)</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top)</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;">See Figure 2&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:283px;">Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank</td>
			<td style="width:117px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:152px;">ST1 72-6420</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:283px;">Small animal ventilator with tubing</td>
			<td style="width:117px;">CWE</td>
			<td style="width:152px;">12-02000 (ventilator)and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats)</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">High-intensity Fiber-Optic Illuminator</td>
			<td style="width:117px;">Dolan Jenner</td>
			<td style="width:152px;">EEG 2823M</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Student standard pattern forceps</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">91100-16</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Fine straight scissors</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">14060-09</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Blunt-tipped Shea scissors</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">14105-12</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Small Alm retractor (for sternum)</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">17008-07</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Blunt Graefe forceps</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">11050-10</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Fine Dumont forceps</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">5-0 Maxon sutures</td>
			<td style="width:117px;">Ethicon</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">4-0 Silk sutures (with cutting needle)</td>
			<td style="width:117px;">Ethicon</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">6-0 Nylon suture</td>
			<td style="width:117px;">Ethicon</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Cyanoacrylate glue (Endermil)</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Lubrication gel</td>
			<td style="width:117px;">Akorn Animal Health</td>
			<td style="width:152px;">NDC 17478-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

complete thymectomy in adult rats with non-invasive endotracheal intubation

Тимэктомия у новорожденных грызунов солидной и надежной порядок иммунологических исследований. Тем не менее, у взрослых крыс, осложнения кровоизлияния и пневмоторакса из плевральной нарушения могут привести к значительной смертности. Этот протокол является простым способом крыс тимэктомии, который использует мини-Стернотомия и эндотрахеальной интубации. Интубация осуществляется с неинвазивным и легко воспроизводимый метод и позволяет для вентиляции с положительным давлением, чтобы предотвратить пневмоторакс и контролируемого дыхательных путей, что позволяет достаточно времени для тщательного вилочковой вскрытия, чтобы минимизировать плевральной нарушения. 1,5 см грудины разрез уменьшается контакт с средостения сосудов и плевры, в то же время обеспечивая полную визуализацию тимуса. После облучения средостения, тимус удаляется тупым под увеличением. Плевральной полости затем герметизируют путем закрытия шва из предварительно трахеи мышц с последующим применением хирургического клея.грудной клетки затем закрывается закрытия шва грудины, с последующим закрытием шва кожи. Все thymectomies были полными, о чем свидетельствует иммуногистохимического (IHC) окрашиванием медиастинальной ткани, и отсутствие наивных Т-клеток с помощью проточной цитометрии, и процедура была выживаемость 96%. Этот метод подходит, если полная тимэктомия с минимальными осложнениями требуется для дальнейших иммунологических исследований в безтимусных взрослых крыс.

Эта процедура была выполнена на взрослых крыс Льюиса (п = 26). Среднее время операции составило 15 ± 3 мин. Там не было интраоперационной смертности. Среднее время интубации - от размещения крысы на интубации аппарата к созданию вентиляции - составила 45 ± 5 сек. 24 крыс были полное восстановле?...

Watch this Scientific Journal Video about Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation at JoVE.com

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described.

Полный Тимэктомия у крыс взрослых с неинвазивной интубации трахеи

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

complete-thymectomy-adult-rats-with-non-invasive-endotracheal

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

16.4K Views.  Duke University Medical Center. Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described. 

Video: Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists. The value of 2P microscopy is that it provides rich spatiotemporal information regarding cell behaviors within intact tissues and in live mice. Leukocyte recruitment plays a significant role in host defense against infection and when unchecked, can contribute to inflammatory and autoimmune diseases. Studying leukocyte recruitment in vivo is technically challenging since cells are moving rapidly within vessels located deep within light scattering tissues. To date, most intravital imaging studies require surgical preparation to expose the blood vessels and tissues. To avoid the tissue damage and inflammation induced by surgery itself, here, we describe a non-invasive single-cell imaging approach that can be used to study leukocyte trafficking in the mouse footpad and phalanges. We discuss the technical aspects of our 2P imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Here, we describe a non-invasive two-photon (2P) microscopy approach to study leukocyte homing in the mouse footpad. We discuss the technical aspects of our tissue imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Неинвазивная Визуализация лейкоцитов самонаведения и миграции В естественных условиях</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 to 40% attributable mortality6. Systemic candidiasis is normally controlled by innate immunity, and individuals with genetic defects in innate immune cell components such as phagocyte NADPH oxidase are more susceptible to candidemia7-9. Very little is known about the dynamics of C. albicans interaction with innate immune cells in vivo. Extensive in vitro studies have established that outside of the host C. albicans germinates inside of macrophages, and is quickly destroyed by neutrophils10-14. In vitro studies, though useful, cannot recapitulate the complex in vivo environment, which includes time-dependent dynamics of cytokine levels, extracellular matrix attachments, and intercellular contacts10, 15-18. To probe the contribution of these factors in host-pathogen interaction, it is critical to find a model organism to visualize these aspects of infection non-invasively in a live intact host. 
The zebrafish larva offers a unique and versatile vertebrate host for the study of infection. For the first 30 days of development zebrafish larvae have only innate immune defenses2, 19-21, simplifying the study of diseases such as disseminated candidiasis that are highly dependent on innate immunity. The small size and transparency of zebrafish larvae enable imaging of infection dynamics at the cellular level for both host and pathogen. Transgenic larvae with fluorescing innate immune cells can be used to identify specific cells types involved in infection22-24. Modified anti-sense oligonucleotides (Morpholinos) can be used to knock down various immune components such as phagocyte NADPH oxidase and study the changes in response to fungal infection5. In addition to the ethical and practical advantages of using a small lower vertebrate, the zebrafish larvae offers the unique possibility to image the pitched battle between pathogen and host both intravitally and in color. 
The zebrafish has been used to model infection for a number of human pathogenic bacteria, and has been instrumental in major advances in our understanding of mycobacterial infection3, 25. However, only recently have much larger pathogens such as fungi been used to infect larva5, 23, 26, and to date there has not been a detailed visual description of the infection methodology. Here we present our techniques for hindbrain ventricle microinjection of prim25 zebrafish, including our modifications to previous protocols. Our findings using the larval zebrafish model for fungal infection diverge from in vitro studies and reinforce the need to examine the host-pathogen interaction in the complex environment of the host rather than the simplified system of the Petri dish5.

The rapid development, small size and transparency of zebrafish are tremendous advantages for the study of innate immune control of infection1-4. Here we demonstrate techniques for infecting zebrafish larvae using the fungal pathogen Candida albicans by microinjection, methodology recently used to implicate phagocyte NADPH oxidase activity in control of fungal dimorphism5.

Неинвазивная визуализация диссеминированный кандидоз в Личинки данио рерио

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

The lymphatic vascular system is an important component of the circulatory system that maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and mediates fat absorption in the gut. Yet despite its critical function, there is comparatively little understanding of how the lymphatic system adapts to serve these functions in health and disease1. Recently, we have demonstrated the ability to dynamically image lymphatic architecture and lymph "pumping" action in normal human subjects as well as in persons suffering lymphatic dysfunction using trace administration of a near-infrared fluorescent (NIRF) dye and a custom, Gen III-intensified imaging system2-4. NIRF imaging showed dramatic changes in lymphatic architecture and function with human disease. It remains unclear how these changes occur and new animal models are being developed to elucidate their genetic and molecular basis. In this protocol, we present NIRF lymphatic, small animal imaging5,6 using indocyanine green (ICG), a dye that has been used for 50 years in humans7, and a NIRF dye-labeled cyclic albumin binding domain (cABD-IRDye800) peptide that preferentially binds mouse and human albumin8. Approximately 5.5 times brighter than ICG, cABD-IRDye800 has a similar lymphatic clearance profile and can be injected in smaller doses than ICG to achieve sufficient NIRF signals for imaging8. Because both cABD-IRDye800 and ICG bind to albumin in the interstitial space8, they both may depict active protein transport into and within the lymphatics. Intradermal (ID) injections (5-50 &mu;l) of ICG (645 &mu;M) or cABD-IRDye800 (200 &mu;M) in saline are administered to the dorsal aspect of each hind paw and/or the left and right side of the base of the tail of an isoflurane-anesthetized mouse. The resulting dye concentration in the animal is 83-1,250 &mu;g/kg for ICG or 113-1,700 &mu;g/kg for cABD-IRDye800. Immediately following injections, functional lymphatic imaging is conducted for up to 1 hr using a customized, small animal NIRF imaging system. Whole animal spatial resolution can depict fluorescent lymphatic vessels of 100 microns or less, and images of structures up to 3 cm in depth can be acquired9. Images are acquired using V++ software and analyzed using ImageJ or MATLAB software. During analysis, consecutive regions of interest (ROIs) encompassing the entire vessel diameter are drawn along a given lymph vessel. The dimensions for each ROI are kept constant for a given vessel and NIRF intensity is measured for each ROI to quantitatively assess "packets" of lymph moving through vessels.

Recently developed imaging techniques using near-infrared fluorescence (NIRF) may help elucidate the role the lymphatic system plays in cancer metastasis, immune response, wound repair, and other lymphatic-associated diseases.

Неинвазивная оптических изображений из лимфатических сосудов от мыши

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and pathological processes such as CNS maturation in development, multiple sclerosis, and spinal cord injury. Microglia can be activated and recruited to action by neuronal injury or stimulation, such as axonal damage seen in MS or ischemic brain trauma resulting from stroke. These immunocompetent members of the CNS are also thought to have roles in synaptic plasticity under non-pathological conditions. We employ protocols for culturing microglia from the neonatal and adult tissues that are aimed to maximize the viable cell numbers while minimizing confounding variables, such as the presence of other CNS cell types and cell culture debris. We utilize large and easily discernable CNS components (e.g. cortex, spinal cord segments), which makes the entire process feasible and reproducible. The use of adult cells is a suitable alternative to the use of neonatal brain microglia, as many pathologies studied mainly affect the postnatal spinal cord. These culture systems are also useful for directly testing the effect of compounds that may either inhibit or promote microglial activation. Since microglial activation can shape the outcomes of disease in the adult CNS, there is a need for in vitro systems in which neonatal and adult microglia can be cultured and studied.

We outline methods for the efficient and quick isolation/culture of viable microglia from the neonatal cerebral cortex and adult spinal cord. The dissection and plating of cortical microglia can be accomplished within 90 minutes, with the subsequent microglial harvest taking place ~ 10 days following the initial dissection.

Культивирование Микроглии от новорожденных и взрослых центральной нервной системы

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal features of the natural infection. This protocol describes procedures for the establishment and evaluation of systemic infection due to neuropathogenic Escherichia coli K1 in the neonatal rat. Colonization of the gastrointestinal tract leads to dissemination of the pathogen along the gut-lymph-blood-brain course of infection and the model displays strong age dependency. A strain of E. coli O18:K1 with enhanced virulence for the neonatal rat produces exceptionally high rates of colonization, translocation to the blood compartment and invasion of the meninges following transit through the choroid plexus. As in the human host, penetration of the central nervous system is accompanied by local inflammation and an invariably lethal outcome. The model is of proven utility for studies of the mechanism of pathogenesis, for evaluation of therapeutic interventions and for assessment of bacterial virulence.

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Here, a procedure is described for the establishment of systemic infection in the neonatal rat with cultures of Escherichia coli K1. This non-invasive procedure permits colonization of the gastrointestinal tract, translocation of the pathogen to the systemic circulation, and invasion of the central nervous system at the choroid plexus.

Неинвазивного Модель Neuropathogenic<em&gt; Кишечная палочка</em&gt; Инфекция в новорожденной крысы

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of causing systemic disease in both fish and humans. A better understanding of S. iniae disease pathogenesis requires an appropriate model system. The genetic tractability and the optical transparency of the early developmental stages of zebrafish allow for the generation and non-invasive imaging of transgenic lines with fluorescently tagged immune cells. The adaptive immune system is not fully functional until several weeks post fertilization, but zebrafish larvae have a conserved vertebrate innate immune system with both neutrophils and macrophages. Thus, the generation of a larval infection model allows the study of the specific contribution of innate immunity in controlling S. iniae infection.
The site of microinjection will determine whether an infection is systemic or initially localized. Here, we present our protocols for otic vesicle injection of zebrafish aged 2-3 days post fertilization as well as our techniques for fluorescent confocal imaging of infection. A localized infection site allows observation of initial microbe invasion, recruitment of host cells and dissemination of infection. Our findings using the zebrafish larval model of S. iniae infection indicate that zebrafish can be used to examine the differing contributions of host neutrophils and macrophages in localized bacterial infections. In addition, we describe how photolabeling of immune cells can be used to track individual host cell fate during the course of infection.

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Here, we present a protocol for the generation and imaging of a localized bacterial infection in the zebrafish otic vesicle.

Неинвазивная Визуализация врожденного иммунного ответа в данио рерио личинок модели<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Инфекция

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant preclinical advances in our understanding of the underlying cellular and molecular pathogenesis. In vivo mouse models capture the integrated physiology and resilience of the host defense response in a manner not revealed by alternative, simplified ex vivo approaches. Several methods have been described in the literature for intrapulmonary inoculation of bacteria in mice, including aerosolization, intranasal delivery, peroral endotracheal cannulation under &#39;blind&#39; and visualized conditions, and transcutaneous endotracheal cannulation. All methods have relative merits and limitations. Herein, we describe in detail a non-invasive, technically non-intensive, inexpensive, and rapid method for intratracheal delivery of bacteria that involves aspiration (i.e., inhalation) by the mouse of an infectious inoculum pipetted into the oropharynx while under general anesthesia. This method can be used for pulmonary delivery of a wide variety of non-caustic biological and chemical agents, and is relatively easy to learn, even for laboratories with minimal prior experience with pulmonary procedures. In addition to describing the aspiration pneumonia method, we also provide step-by-step procedures for assaying the subsequent in vivo pulmonary innate immune response of the mouse, in particular, methods for quantifying bacterial clearance and the cellular immune response of the infected airway. This integrated and simple approach to pneumonia assessment allows for rapid and robust evaluation of the effect of genetic and environmental manipulations upon pulmonary innate immunity.

Several methods have been described in the literature for modeling bacterial pneumonia in mice. Herein, we describe a non-invasive, inexpensive, rapid method for inducing pneumonia via aspiration (i.e., inhalation) of a bacterial inoculum pipetted into the oropharynx. Downstream methods for assessment of the pulmonary innate immune response are also detailed.

Неинвазивным и технически неинтенсивное метод индукции и Фенотипирование экспериментальной бактериальной пневмонии у мышей

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo fluorescence optical imaging (OI), in two different mouse models of inflammation: a rheumatoid arthritis (RA) and a contact hypersensitivity reaction (CHR) model. Light with a wavelength in the near infrared (NIR) window (650 - 950 nm) allows a deeper tissue penetration and minimal signal absorption compared to wavelengths below 650 nm. The major advantages using fluorescence OI is that it is cheap, fast and easy to implement in different animal models.
Activatable fluorescent probes are optically silent in their inactivated states, but become highly fluorescent when activated by a protease. Activated MMPs lead to tissue destruction and play an important role for disease progression in delayed-type hypersensitivity reactions (DTHRs) such as RA and CHR. Furthermore, MMPs are the key proteases for cartilage and bone degradation and are induced by macrophages, fibroblasts and chondrocytes in response to pro-inflammatory cytokines. Here we use a probe that is activated by the key MMPs like MMP-2, -3, -9 and -13 and describe an imaging protocol for near infrared fluorescence OI of MMP activity in RA and control mice 6 days after disease induction as well as in mice with acute (1x challenge) and chronic (5x challenge) CHR on the right ear compared to healthy ears.

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

This paper explains the application of fluorescent imaging using an activatable optical imaging probe to visualize the in vivo activity of key matrix metalloproteinases in two different experimental models of inflammation.

Неинвазивная<em&gt; In Vivo</em&gt; Флуоресцентная оптическая визуализация воспалительной активности ММП с использованием активируемого флуоресцентного средства визуализации

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte extravasation might result in pathophysiological changes in the CNS. Thus, investigation of lymphocyte migration into the CNS is important to understand inflammatory CNS diseases and to develop new therapy approaches. Here we present an in vitro model of the human blood-brain barrier to study lymphocyte extravasation. Human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) are confluently grown on a porous polyethylene terephthalate transwell insert to mimic the endothelium of the blood-brain barrier. Barrier function is validated by zonula occludens immunohistochemistry, transendothelial electrical resistance (TEER) measurements as well as analysis of evans blue permeation. This model allows investigation of the diapedesis of rare lymphocyte subsets such as CD56brightCD16dim/- NK cells. Furthermore, the effects of other cells, cytokines and chemokines, disease-related alterations, and distinct treatment regimens on the migratory capacity of lymphocytes can be studied. Finally, the impact of inflammatory stimuli as well as different treatment regimens on the endothelial barrier can be analyzed.

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Here, we describe a human blood-brain barrier model enabling to investigate lymphocyte transmigration into the central nervous system in vitro.

Анализ лимфоцитов экстравазации спользование<em&gt; In Vitro</em&gt; Модель человеческого гематоэнцефалический барьер

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is that they may induce traumatic lesions on the surface of the eye, which can progress to scarring, eyelid deformity, limbal stem cell deficiency and in some cases, cause great discomfort to the subject. To avoid these clinical problems, impression cytology (IC) was developed to diagnose dry eye disease and later neoplasia, atopic disease, vernal keratoconjunctivitis and keratoconjunctivitis sicca. Typically, clinicians manually cut filter papers into required shapes and apply these to the ocular surface. Here, we describe how to perform IC using a commercially available medical device. This technique is explained here followed by immunophenotyping by flow cytometry. This technique requires less manual handling and causes less injury to the ocular surface.

The exposed normal ocular surface consists of cornea and conjunctiva. Epithelial cells, goblet cells and immune cells are present in the conjunctiva. Here, a non-invasive, technique of impression cytology is described using an impression cytology device and flow cytometry to analyze immune cells in the conjunctiva.

Неинвазивный способ выделения и фенотипических клеток из конъюнктивы

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...