This work was supported by AI101263 from the National Institutes of Health (T.V.B), and by a grant from The Hartwell Foundation (M.L.M). M.L.M. is a member of the Duke Comprehensive Cancer Center.

הערה: כל הליכי הניסוי בתחום השימוש בחולדות נעשו בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי ועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת דיוק. 1. הכנת קנה נשימת אינטובציה הצינורית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את קצה המחט של מחט angiocathether 14 G 2 אינץ &#39;עם מלקחות חיתוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצבוט את לומן של המחט סגורה עם צבת מחט חוטם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את הקטע צבט עד קצה החלק הפתוח לומן עם צבת חיתוך, ואז לחתוך את הקצוות בשני הצדדים של הסוף שנותר ב30-45 מעלות זווית לקצה המחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את 3 התחתון - 4 מ&quot;מ של הצינורית לתוך השטח הפתוח של צבת תלוש-משותף ישר ומושך כלפי מעלה, עד עיקול קל כלפי מעלה כבר נוצר בסוף. הערה: זה יקל בימוי קטטר לתוך קנה הנשימה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בנייר זכוכית עדינה כדי להחליק את הקצוות בסוף הצינורית. </li><li&gt; חזור מכשיר הקהה לתוך צינורות angiocatheter. ודא שהצינור הוא מעט קצר יותר מאשר המחט הקהה. </li></ol> נהלים 2. טרום ניתוחיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקים את האתר להליך על ידי הצבת מיקרוסקופ מוגדר 10X ההגדלה מעל אזור ההפעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח כרית חימום על אזור ההפעלה ולכסות עם כרית הקליטה נקייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את קצב לב ולפקח חמצון דם ליד שדה הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את העכברוש למינון המבוסס על משקל תרופות (למשל, שיכוך כאבים לאחר ניתוח, אנטיביוטיקה, או נוגדן הלימפוציטים מדלדלים). הערה: חולדות מבוגרות טיפוסית שוקלות בין 350-450 g. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקט ורגוע העכברוש עם מתאדה 3% isoflurane-O 2 (3 L / min) באמצעות תא אינדוקציה פרק למערכת הדחה גז הרדמה פסולת המכילה פחם פעיל. לאפשר 5 דקות לזירוז הרדמה לספק הרדמה עמוקה הכרחית לאינטובציה endotracheal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל carprofen או Meloxicane (4.4 מ&quot;ג / קילוגרם) תת עורי לעכברוש לפני שתמשיך עם אינטובציה וניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש קוצץ חשמלי לגלח את הצוואר וחזה של העכברוש הרדים לפני אינטובציה. </li></ol> 3. אינטובציה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את התקנת אינטובציה על ידי שפשוף כמות קטנה של שימון (לדוגמא, ג&#39;ל KY) בסופו של צינורית אינטובציה. הפעל את המאוורר כדי להתחיל את זרימת גז isoflurane דרך צינורות המחבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העכבר למנגנון אינטובציה ולהשעות את העכברוש בסרגל המתכת על ידי השיניים החותכות העליונות (איור 2 א). הערה: מנגנוני אינטובציה מסוימים ניתן לרכוש באינטרנט. המודל המוצג כאן הוא תוצרת הבית באמצעות גיליון אקריליק היצוק של חלקי חתיכה המותני אינץ &#39;2 x 4 באמצעות לפיד בוטאן, ותגבורת מחוברות עם כלורופורם. בר (או חוט המתכת) מצורף על ידי חורי קידוח מעל קלטת מסוך דגש על יםIDE של אקריליק על מנת למנוע פיצול או פיצוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trans-להאיר את צווארה של החולדה על ידי הצבת מקור אור בעוצמה גבוהה גמיש 1 - 2 סנטימטר מפני שטח הגחון של הצוואר (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש זוג מלקחיים דפוס סטנדרטיים תלמיד למשוך את הלשון בעדינות כלפי מעלה ולצדו השני של השיניים התחתונה. גריפ הלשון בין האגודל לאצבע המורה של יד אחת תוך שימת המשטח הפנימי השטוח של צד אחד של המלקחיים נגד הקצה התחתון של הלשון. לחץ ventrally לחשוף את מכסה הקנה וצמצם של הגרון (איור 2 ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דמיין את מיתרי קול ולהנחות הסוף ההפוך, הקהה של צינורית אינטובציה anteriorly דרך מייתרי הקול הפתוחים לתוך קנה הנשימה עד הרכזת של angiocatheter נוגעת חותכות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את stylet המתכת, ולצרף את צינורות הרדמה לפתיחת angiocatheter להתחיל אוורור עם isoflurane. הערה: פלו החמצן הטיפוסישיעור w למכונת הנשמה הוא 3 L / min עם 3% isoflurane. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את מכונת ההנשמה בשיעור של 60 נשימות / דקה במצב הנשמה נפח מבוקרת שמשיג לחץ של ~ 12 - 14 מ&quot;מ כספית. השתמש בלחץ חיובי הסוף-נשיפה (PEEP) של 3 סנטימטר H 2 O. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב קיר התרחבות חזה דו-צדדית בסנכרון עם המאוורר כדי להבטיח מיקום נכון של הטובוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה עיניים מומלצת וטרינר לעיניו של העכברוש כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה וטרינר בעיניים של העכברוש כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאבטח את צינור endotracheal לראש של החולדה עם פס של סרט בד. להבטיח קשר הדוק בין הטובוס וצינורות זרימת חומר ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את חמצון הדם ולפקח על קצב לב לכף הרגל של החולדה ולהתחיל מעקב. לאשר הרדמה תקינה על ידי המאשר שאין תגובה לדואר קמצוץ. </li></ol> 4. פתיחת בית החזה וThymectomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע טכניקת ספטית סטנדרטית לשלמות של ההליך. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את שולחן האזור והפעלת העבודה ולחטא עם פתרון אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בכפפות מנתחים סטרילית במהלך ההליך, וחיטוי כל המכשירים וחומרים המשמשים במהלך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל providone-יוד לאזור החזה כולו ולאפשר לו להתייבש. לאחר מכן לנקות את פני השטח של העור עם אתנול 70% על גזה. מכסה את העכברוש בניילון נצמד ברור חיתוך חור כדי לחשוף את שדה ניתוח סטרילי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את חריץ suprasternal באזור העליון של בית החזה. לעשות חתך קו האמצע של 2 סנטימטרים דרך העור מתחיל 2-3 מ&quot;מ מעל חריץ suprasternal והארכת distally קו האמצע לאורך עצם החזה באמצעות מספריים שיאה קהים שקצהו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע sternotomy 1.5 סנטימטרים חציון מחריץ suprasternal שוב באמצעות מספריים שיאה קהים שקצהו. Kיפ הקצה התחתון של המספריים רק מתחת לעצם החזה ומראש לאט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מפשק Alm קטן רק מתחת לעצם החזה והפתוח המופרדים לחשוף מראש לקנה הנשימה שרירי רצועה (sternohyoid ושרירים sternothyroid). הפרד את שרירי רצועה מראש לקנה הנשימה באמצעות מלקחיים גרפו בוטים. הערה: בשלב זה, ניתן לראות את קנה הנשימה, וצינור ההנשמה צריכה להיות דמיין בתוך קנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השיניים של מפשק Alm הקטן מתחת לשרירי הרצועה המופרדים ועצם החזה. פתח את מפשק לחשוף את ההיבט מעולה של בלוטת התימוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחי דומון קנס כדי לשחרר את הקצוות לרוחב של רקמת בלוטת התימוס ולחשוף את האונות הרתי נמוכות יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את התימוס בעדינות superiorly לאתר החתך הפתוח, מקפיד להימנע ממגע עם כלי וריד נבוב, subclavian ותרדמה מעולים, וכדי למזער את ההפרעה לבטנת pleural העדינה בין התימוס והריאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כtהוא הרתי כלי גזורים וגילו, בעזרת מיקרו-מספריים לחלק אותם. השתמש בצמר גפן כדי להחזיק את לחץ על כלי לעצירת דימום במידת הצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק אונות הרתי הנמוכות לתוך החתך ולאחר מכן באופן חד lyse הקבצים המצורפים האחוריים. הסר את התימוס שלם ולבדוק בזהירות את התימוס מוסר מכל חלקים חסרים. הערה: בלוטות לימפה בבית חזה קטנות יכולות להיות דמיינו המקיפות את בלוטת התימוס ולעתים קרובות קשים להבחין בין רקמת הרתי. אלה יהיו צמתים עגולים דיסקרטיים עם מראה דומה לרקמת הרתי, אך לא יהיה בהמשכיות עם התימוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מפשק Alm ולסגור את שרירי sternohyoid וsternothyoid עם שני קטעו 5-0 תפרי מקסון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 2 טיפות של דבק רקמות cyanoacrylate כיתה כירורגית על פני התפרים לאטום את חלל החזה מתחת לאוורור לחץ חיובי. הערה: זה יקטין את השכיחות של חזה אוויר ושטף דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את sternum עם שתי קטע 4-0 תפרי משי על מחט חיתוך. הכנס את המחט דרך פערים בין הצלעות, מקפיד להנחות את המחט ממש מתחת לעצם החזה כדי למנוע את שכבת השריר הבסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת העור עם תפר ניילון 4-0 ריצה. להפסיק את isoflurane בשלב זה כדי לקצר את תקופת ההחלמה הרדמה לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את אתר החתך ועור שמסביב עם גזה טבולה-מלוחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יישומם של מספר טיפות של Bupivicaine (0.25%) להרדמה מקומית, ואחריו 1 - 2 טיפות של דבק cyanoacrylate על החתך לאטום את החתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להמשיך לאוורר עד העכברוש מראה סימנים של מאמץ נשימה עצמאי ומתחיל להזיז הגפיים שלה. Extubate החולדה ולאפשר לו להתאושש תחת השגחה צמודה בכלוב מונח על כרית חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל עצירות (0.01-0.05 מ&quot;ג / קילוגרם) תת עורי לעכברים מייד לאחר ניתוח ויחזרו כל שעות 8-12 במשך 48 שעות post-אופרטיבי (בדרך כלל 5 מנות בסך הכל). בגיל 24 ו -48 שעות לאחר ניתוח, לנהל carprofen או Meloxicane (4.4 מ&quot;ג / קילוגרם) תת עורי (3 מינונים כולל כוללים המנה טרום הניתוחית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמשיך לעקוב עד החולדה נעה סביב הכלוב. בכל סימנים של מצוקה נשימתית, לבצע מחדש אינטובציה מחדש חקירה של החזה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תשאיר חיה ללא השגחה עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור על כיבה sternal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תחזרו לבעלי חיים שעברו ניתוח לחברה של בעלי חיים אחרים, עד שהתאושש לחלוטין. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את תפרי שכבת עור 1 שבוע לאחר הניתוח. </li></ol>

<ol>
	<li>Hard, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymectomy+in+the+neonatal+rat.">Thymectomy in the neonatal rat.</a> Lab. Anim. 9 (2), 105-110 (1975).</li><li>Kobayashi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+complete+thymectomy+in+adult+rats.">A technique for complete thymectomy in adult rats.</a> J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0 (1994).</li><li>Delrivi&#232;re, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+technique+of+complete+thymectomy+in+adult+rats+without+tracheal+intubation.">New technique of complete thymectomy in adult rats without tracheal intubation.</a> Microsurgery. 18 (1), 6-8 (1998).</li><li>Walker, K. G., Jacques, B. C., Tweedle, J. R., Bradley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simpler+technique+for+open+thymectomy+in+adult+rats.">A simpler technique for open thymectomy in adult rats.</a> J. Immunol. Methods. 175 (1), 141 (1994).</li><li>Na, N., Zhao, D., Huang, Z., Hong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+rat+intubation+and+thymectomy.">An improved method for rat intubation and thymectomy.</a> Chin. Med. J. (Engl). 124 (17), 2723-2727 (2011).</li><li>Kastl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplification+of+rat+intubation+on+inclined+metal+plate).">Simplification of rat intubation on inclined metal plate).</a> Adv. Physiol. Educ. 28 (1-4), 29-34 (2004).</li><li>Weksler, B., Ng, B., Lenert, J., Burt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+endotracheal+intubation+in+the+rat.">A simplified method for endotracheal intubation in the rat.</a> J. Appl. Physiol. 76 (4), 1823-1825 (1994).</li><li>Jou, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+intubation+using+a+new+oropharyngeal+intubation+wedge.">Simplified rat intubation using a new oropharyngeal intubation wedge.</a> J. Appl. Physiol. 89 (5), 1766-1770 (2000).</li><li>Rivard, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+intubation+and+ventilation+for+surgical+research.">Rat intubation and ventilation for surgical research.</a> J. Invest. Surg. 19 (4), 267-274 (2006).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+isolated,+vascular+whole+thymus+transplantation+in+nude+rats.">A model of isolated, vascular whole thymus transplantation in nude rats.</a> Transplant Proc. 44 (5), 1394-1398 (2012).</li><li>AbuAttieh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+maturation+of+antibodies+requires+integrity+of+the+adult+thymus.">Affinity maturation of antibodies requires integrity of the adult thymus.</a> Eur. J. Immunol. 42 (2), 500-510 (2012).</li><li>Reeves, J. P., Reeves, P. A., Chin, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+surgery:+removal+of+the+spleen+or+thymus.">Survival surgery: removal of the spleen or thymus.</a> Curr. Protoc. Immunol. 1 (Unit 1.10), (2001).</li><li>Siemionow, M., Izycki, D., Ozer, K., Ozmen, S., Klimczak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+thymus+in+operational+tolerance+induction+in+limb+allograft+transplant+model.">Role of thymus in operational tolerance induction in limb allograft transplant model.</a> Transplantation. 81 (11), 1568-1576 (2006).</li><li>Satoh, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosuppressive+effect+of+long-term+drainage+of+thoracic+duct+on+immunological+memory+in+adult+thymectomized+rats.+Transplant.">Immunosuppressive effect of long-term drainage of thoracic duct on immunological memory in adult thymectomized rats. Transplant.</a> Proc. 37 (4), 1947-1948 (2005).</li><li>Groen, H., Klatter, F., Pater, J., Nieuwenhuis, P., Rozing, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporary,+but+Essential+Requirement+of+CD8++T+Cells+Early+in+the+Pathogenesis+of+Diabetes+in+BB+Rats+as+Revealed+by+Thymectomy+and+CD8+Depletion.">Temporary, but Essential Requirement of CD8+ T Cells Early in the Pathogenesis of Diabetes in BB Rats as Revealed by Thymectomy and CD8 Depletion.</a> Clin. Dev. Immunol. 10 (2-4), 141-151 (2003).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

הפרוטוקול הנוכחי לthymectomy מלא מספק גישה פולשנית עם סגירת חתך שלוש שכבה עם יישום דבק כירורגים נועד למזער את הסיבוכים. הסרה מלאה של בלוטת התימוס הודגמה על ידי האובדן של תאי T נאיביים ועל ידי צביעת IHC של רקמת הלימפה mediastinal לcytokeratin. ההליך...

מאז שנתי ה -1960 המוקדמות, התימוס הוכר על תפקידה החיוני בפיתוח של סובלנות חיסונית מרכזית. thymectomy מכרסמים הוכיח להיות הליך חיוני בהגדרת תפקידו של התימוס בבידול הלימפוציטים, סובלנות עצמית, וסבילות חיסונית בהגדרה של השתלת שתל וגרורות סרטנית. הסרת בלוטת התימוס העכברוש מאפשרת למחקרים שכלל דלדול T-cell או העברת המאמצת של אוכלוסיות תאי T מוגדרות ללא ההתעוררות המחודשת של תאי T נאיביים ילידים. Thymectomies במכרסמים בילוד יכול להיות מושלם תוך שימוש בטכניקת יניקה עם תוצאות אמינות 1. בחולדות מבוגרות, טכניקה זו קשורה עם שיעור תמותה של 20% בקירוב, ולעתים קרובות גורמת לthymectomy שלם 2. כדי להשיג thymectomy מלא בחולדות מבוגרות באופן עקבי, נדרשת חשיפה פתוחה של חלל החזה באמצעות sternotomy חציון. עם זאת, זההליך קשור בסיבוכים הכוללים פגיעה לקנה הנשימה, דימום וחזה אוויר שמוביל לשיעורי תמותה כוללת החל 1.5-6% 2- 4. בשני העשורים האחרונים שיפורים בטכניקות thymectomy ירדו סיבוכים סביב ניתוח ושפרו את שיעורי הישרדות. אינטובציה endotracheal מאפשרת אוורור לחץ חיובי פחתה שיעורי pneumothorax 5. שיטות של אינטובציה שתוארו קודם לכן מגוון מחשיפה פתוחה לקנה הנשימה לשיטות פחות פולשניות באמצעות הדמיה מייתרי קול ישירה. סיבוכים הקשורים בהליך אינטובציה כוללים פגיעה לקנה הנשימה, קרע מייתר קול, אינטובציה הוושט לא מכוונת, ודימום כתוצאה מדיקור או קריעה של הווריד הנבוב מעולה לב. בנוסף, בסמיכות של האונות הרתי הנמוכות לרירית פלאורלי יכולות לגרום לחזה אוויר. כאן אנו מתארים טכניקה שלthymectomy דרך חתך בעור 2 סנטימטר פולשנית הבאים בשיטה פשוטה של ​​אינטובציה endotracheal באמצעות angiocatheter הקהה-סוף ותאורה לקנה הנשימה transcutaneous. Thymectomy כרוך sternotomy 1.5 סנטימטר וסגירת שלוש שכבה עם יישום דבק כירורגים לאטום את חלל החזה ולמזער את השכיחות של דימום וסיבוכים בדרכי הנשימה. שיטה זו באופן מהימן תוצאות בthymectomy מלא כפי שמעידה היעלמותו של CD4 + CD8 + ותאי T הנאיביים הבאים thymectomy והעדר רקמת הרתי על צביעת IHC. פעמים אופרטיביות ותמותת פרי פרוצדורליים נשמרות למינימום.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="718">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:117px;">Company</td>
			<td style="width:152px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">2&#34; 14-gauge angiocatheter</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Operating microscope</td>
			<td style="width:117px;">Zeiss</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Warming pad</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:283px;">Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors</td>
			<td style="width:117px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:152px;">ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor)</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top)</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;">See Figure 2&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:283px;">Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank</td>
			<td style="width:117px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:152px;">ST1 72-6420</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:283px;">Small animal ventilator with tubing</td>
			<td style="width:117px;">CWE</td>
			<td style="width:152px;">12-02000 (ventilator)and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats)</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">High-intensity Fiber-Optic Illuminator</td>
			<td style="width:117px;">Dolan Jenner</td>
			<td style="width:152px;">EEG 2823M</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Student standard pattern forceps</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">91100-16</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Fine straight scissors</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">14060-09</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Blunt-tipped Shea scissors</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">14105-12</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Small Alm retractor (for sternum)</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">17008-07</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Blunt Graefe forceps</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">11050-10</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Fine Dumont forceps</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">5-0 Maxon sutures</td>
			<td style="width:117px;">Ethicon</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">4-0 Silk sutures (with cutting needle)</td>
			<td style="width:117px;">Ethicon</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">6-0 Nylon suture</td>
			<td style="width:117px;">Ethicon</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Cyanoacrylate glue (Endermil)</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Lubrication gel</td>
			<td style="width:117px;">Akorn Animal Health</td>
			<td style="width:152px;">NDC 17478-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

complete thymectomy in adult rats with non-invasive endotracheal intubation

Thymectomy במכרסמים בילוד הוא נוהל שקבע ואמין ללימודים חיסוניים. עם זאת, בחולדות מבוגרות, סיבוכים של דימום וחזה אוויר מהפרעת pleural יכולים לגרום לתמותה משמעותית. פרוטוקול זה הוא שיטה פשוטה של ​​thymectomy העכברוש שמנצל אינטובציה מיני sternotomy וendotracheal. אינטובציה מושגת באמצעות שיטה לא פולשנית ושחזור בקלות ומאפשרת אוורור חיובי לחץ כדי למנוע pneumothorax ודרכי נשימה מבוקרת המאפשרת מספיק זמן לנתיחה התימוס זהיר כדי למזער את ההפרעה pleural. חתך sternal 1.5 סנטימטר מקטין מגע עם כלי דם והצדר mediastinal, תוך מתן הדמיה מלאה של בלוטת התימוס. בעקבות חשיפה של חלל החזה, התימוס הוסר על ידי נתיחה בוטה תחת הגדלה. חלל pleural אטום לאחר מכן על ידי סגירת תפר של השרירים לפני ואחרי לקנה הנשימה על ידי היישום של דבק כירורגים.בית החזה סגור ולאחר מכן על ידי סגירת תפר של עצם החזה, ואחרי סגירת תפר של העור. כל thymectomies היו מלא כפי שמעידים immunohistochemical מכתים (IHC) של רקמת mediastinal, והעדר תאי T הנאיביים על ידי cytometry זרימה, והיה לי הליך שיעור הישרדות 96%. שיטה זו מתאימה כאשר thymectomy להשלים עם סיבוכים מינימאליים הוא רצויה ללימודים חיסוניים נוספים בחולדות מבוגרות athymic.

הליך זה בוצע על חולדות מבוגרות לואיס (n = 26). זמן הפעולה הממוצע היה 15 ± 3 דקות. לא הייתה תמותה במהלך ניתוח. הזמן הממוצע אינטובציה - ממיקום של חולדה על מכשיר אינטובציה להקמת אוורור - היה 45 ± 5 שניות. היו לי 24 חולדות החלמה מלאה מהניתוח ללא עדות לקשיים או דימום בדרכי הנשימה דרך ?...

Watch this Scientific Journal Video about Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation at JoVE.com

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described.

Thymectomy מלא בחולדות מבוגרות עם לא פולשני endotracheal אינטובציה

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

complete-thymectomy-adult-rats-with-non-invasive-endotracheal

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

16.4K Views.  Duke University Medical Center. Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described. 

Video: Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists. The value of 2P microscopy is that it provides rich spatiotemporal information regarding cell behaviors within intact tissues and in live mice. Leukocyte recruitment plays a significant role in host defense against infection and when unchecked, can contribute to inflammatory and autoimmune diseases. Studying leukocyte recruitment in vivo is technically challenging since cells are moving rapidly within vessels located deep within light scattering tissues. To date, most intravital imaging studies require surgical preparation to expose the blood vessels and tissues. To avoid the tissue damage and inflammation induced by surgery itself, here, we describe a non-invasive single-cell imaging approach that can be used to study leukocyte trafficking in the mouse footpad and phalanges. We discuss the technical aspects of our 2P imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Here, we describe a non-invasive two-photon (2P) microscopy approach to study leukocyte homing in the mouse footpad. We discuss the technical aspects of our tissue imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

לא פולשני הדמיה של ביות ליקוציט והגירה In vivo</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 to 40% attributable mortality6. Systemic candidiasis is normally controlled by innate immunity, and individuals with genetic defects in innate immune cell components such as phagocyte NADPH oxidase are more susceptible to candidemia7-9. Very little is known about the dynamics of C. albicans interaction with innate immune cells in vivo. Extensive in vitro studies have established that outside of the host C. albicans germinates inside of macrophages, and is quickly destroyed by neutrophils10-14. In vitro studies, though useful, cannot recapitulate the complex in vivo environment, which includes time-dependent dynamics of cytokine levels, extracellular matrix attachments, and intercellular contacts10, 15-18. To probe the contribution of these factors in host-pathogen interaction, it is critical to find a model organism to visualize these aspects of infection non-invasively in a live intact host. 
The zebrafish larva offers a unique and versatile vertebrate host for the study of infection. For the first 30 days of development zebrafish larvae have only innate immune defenses2, 19-21, simplifying the study of diseases such as disseminated candidiasis that are highly dependent on innate immunity. The small size and transparency of zebrafish larvae enable imaging of infection dynamics at the cellular level for both host and pathogen. Transgenic larvae with fluorescing innate immune cells can be used to identify specific cells types involved in infection22-24. Modified anti-sense oligonucleotides (Morpholinos) can be used to knock down various immune components such as phagocyte NADPH oxidase and study the changes in response to fungal infection5. In addition to the ethical and practical advantages of using a small lower vertebrate, the zebrafish larvae offers the unique possibility to image the pitched battle between pathogen and host both intravitally and in color. 
The zebrafish has been used to model infection for a number of human pathogenic bacteria, and has been instrumental in major advances in our understanding of mycobacterial infection3, 25. However, only recently have much larger pathogens such as fungi been used to infect larva5, 23, 26, and to date there has not been a detailed visual description of the infection methodology. Here we present our techniques for hindbrain ventricle microinjection of prim25 zebrafish, including our modifications to previous protocols. Our findings using the larval zebrafish model for fungal infection diverge from in vitro studies and reinforce the need to examine the host-pathogen interaction in the complex environment of the host rather than the simplified system of the Petri dish5.

The rapid development, small size and transparency of zebrafish are tremendous advantages for the study of innate immune control of infection1-4. Here we demonstrate techniques for infecting zebrafish larvae using the fungal pathogen Candida albicans by microinjection, methodology recently used to implicate phagocyte NADPH oxidase activity in control of fungal dimorphism5.

הדמיה לא פולשנית של פטרת מופצת הזחלים דג הזברה

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

The lymphatic vascular system is an important component of the circulatory system that maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and mediates fat absorption in the gut. Yet despite its critical function, there is comparatively little understanding of how the lymphatic system adapts to serve these functions in health and disease1. Recently, we have demonstrated the ability to dynamically image lymphatic architecture and lymph "pumping" action in normal human subjects as well as in persons suffering lymphatic dysfunction using trace administration of a near-infrared fluorescent (NIRF) dye and a custom, Gen III-intensified imaging system2-4. NIRF imaging showed dramatic changes in lymphatic architecture and function with human disease. It remains unclear how these changes occur and new animal models are being developed to elucidate their genetic and molecular basis. In this protocol, we present NIRF lymphatic, small animal imaging5,6 using indocyanine green (ICG), a dye that has been used for 50 years in humans7, and a NIRF dye-labeled cyclic albumin binding domain (cABD-IRDye800) peptide that preferentially binds mouse and human albumin8. Approximately 5.5 times brighter than ICG, cABD-IRDye800 has a similar lymphatic clearance profile and can be injected in smaller doses than ICG to achieve sufficient NIRF signals for imaging8. Because both cABD-IRDye800 and ICG bind to albumin in the interstitial space8, they both may depict active protein transport into and within the lymphatics. Intradermal (ID) injections (5-50 &mu;l) of ICG (645 &mu;M) or cABD-IRDye800 (200 &mu;M) in saline are administered to the dorsal aspect of each hind paw and/or the left and right side of the base of the tail of an isoflurane-anesthetized mouse. The resulting dye concentration in the animal is 83-1,250 &mu;g/kg for ICG or 113-1,700 &mu;g/kg for cABD-IRDye800. Immediately following injections, functional lymphatic imaging is conducted for up to 1 hr using a customized, small animal NIRF imaging system. Whole animal spatial resolution can depict fluorescent lymphatic vessels of 100 microns or less, and images of structures up to 3 cm in depth can be acquired9. Images are acquired using V++ software and analyzed using ImageJ or MATLAB software. During analysis, consecutive regions of interest (ROIs) encompassing the entire vessel diameter are drawn along a given lymph vessel. The dimensions for each ROI are kept constant for a given vessel and NIRF intensity is measured for each ROI to quantitatively assess "packets" of lymph moving through vessels.

Recently developed imaging techniques using near-infrared fluorescence (NIRF) may help elucidate the role the lymphatic system plays in cancer metastasis, immune response, wound repair, and other lymphatic-associated diseases.

דימות אופטי לא פולשנית של כלי דם הלימפה של עכבר

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and pathological processes such as CNS maturation in development, multiple sclerosis, and spinal cord injury. Microglia can be activated and recruited to action by neuronal injury or stimulation, such as axonal damage seen in MS or ischemic brain trauma resulting from stroke. These immunocompetent members of the CNS are also thought to have roles in synaptic plasticity under non-pathological conditions. We employ protocols for culturing microglia from the neonatal and adult tissues that are aimed to maximize the viable cell numbers while minimizing confounding variables, such as the presence of other CNS cell types and cell culture debris. We utilize large and easily discernable CNS components (e.g. cortex, spinal cord segments), which makes the entire process feasible and reproducible. The use of adult cells is a suitable alternative to the use of neonatal brain microglia, as many pathologies studied mainly affect the postnatal spinal cord. These culture systems are also useful for directly testing the effect of compounds that may either inhibit or promote microglial activation. Since microglial activation can shape the outcomes of disease in the adult CNS, there is a need for in vitro systems in which neonatal and adult microglia can be cultured and studied.

We outline methods for the efficient and quick isolation/culture of viable microglia from the neonatal cerebral cortex and adult spinal cord. The dissection and plating of cortical microglia can be accomplished within 90 minutes, with the subsequent microglial harvest taking place ~ 10 days following the initial dissection.

Microglia culturing ממערכת העצבים המרכזי וילודים למבוגרים

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal features of the natural infection. This protocol describes procedures for the establishment and evaluation of systemic infection due to neuropathogenic Escherichia coli K1 in the neonatal rat. Colonization of the gastrointestinal tract leads to dissemination of the pathogen along the gut-lymph-blood-brain course of infection and the model displays strong age dependency. A strain of E. coli O18:K1 with enhanced virulence for the neonatal rat produces exceptionally high rates of colonization, translocation to the blood compartment and invasion of the meninges following transit through the choroid plexus. As in the human host, penetration of the central nervous system is accompanied by local inflammation and an invariably lethal outcome. The model is of proven utility for studies of the mechanism of pathogenesis, for evaluation of therapeutic interventions and for assessment of bacterial virulence.

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Here, a procedure is described for the establishment of systemic infection in the neonatal rat with cultures of Escherichia coli K1. This non-invasive procedure permits colonization of the gastrointestinal tract, translocation of the pathogen to the systemic circulation, and invasion of the central nervous system at the choroid plexus.

דגם לא פולשנית של Neuropathogenic<em&gt; Coli Escherichia</em&gt; זיהום בעכברוש הילודים

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of causing systemic disease in both fish and humans. A better understanding of S. iniae disease pathogenesis requires an appropriate model system. The genetic tractability and the optical transparency of the early developmental stages of zebrafish allow for the generation and non-invasive imaging of transgenic lines with fluorescently tagged immune cells. The adaptive immune system is not fully functional until several weeks post fertilization, but zebrafish larvae have a conserved vertebrate innate immune system with both neutrophils and macrophages. Thus, the generation of a larval infection model allows the study of the specific contribution of innate immunity in controlling S. iniae infection.
The site of microinjection will determine whether an infection is systemic or initially localized. Here, we present our protocols for otic vesicle injection of zebrafish aged 2-3 days post fertilization as well as our techniques for fluorescent confocal imaging of infection. A localized infection site allows observation of initial microbe invasion, recruitment of host cells and dissemination of infection. Our findings using the zebrafish larval model of S. iniae infection indicate that zebrafish can be used to examine the differing contributions of host neutrophils and macrophages in localized bacterial infections. In addition, we describe how photolabeling of immune cells can be used to track individual host cell fate during the course of infection.

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Here, we present a protocol for the generation and imaging of a localized bacterial infection in the zebrafish otic vesicle.

הדמיה לא פולשנית של התגובה החיסונית המולדת בדגם דג הזברה הזחל של<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; זיהום

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant preclinical advances in our understanding of the underlying cellular and molecular pathogenesis. In vivo mouse models capture the integrated physiology and resilience of the host defense response in a manner not revealed by alternative, simplified ex vivo approaches. Several methods have been described in the literature for intrapulmonary inoculation of bacteria in mice, including aerosolization, intranasal delivery, peroral endotracheal cannulation under &#39;blind&#39; and visualized conditions, and transcutaneous endotracheal cannulation. All methods have relative merits and limitations. Herein, we describe in detail a non-invasive, technically non-intensive, inexpensive, and rapid method for intratracheal delivery of bacteria that involves aspiration (i.e., inhalation) by the mouse of an infectious inoculum pipetted into the oropharynx while under general anesthesia. This method can be used for pulmonary delivery of a wide variety of non-caustic biological and chemical agents, and is relatively easy to learn, even for laboratories with minimal prior experience with pulmonary procedures. In addition to describing the aspiration pneumonia method, we also provide step-by-step procedures for assaying the subsequent in vivo pulmonary innate immune response of the mouse, in particular, methods for quantifying bacterial clearance and the cellular immune response of the infected airway. This integrated and simple approach to pneumonia assessment allows for rapid and robust evaluation of the effect of genetic and environmental manipulations upon pulmonary innate immunity.

Several methods have been described in the literature for modeling bacterial pneumonia in mice. Herein, we describe a non-invasive, inexpensive, rapid method for inducing pneumonia via aspiration (i.e., inhalation) of a bacterial inoculum pipetted into the oropharynx. Downstream methods for assessment of the pulmonary innate immune response are also detailed.

שיטה לא פולשנית הטכנית ללא עתירי עבור אינדוקצית phenotyping של דלקת ריאות חיידקית הניסויית עכברים

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo fluorescence optical imaging (OI), in two different mouse models of inflammation: a rheumatoid arthritis (RA) and a contact hypersensitivity reaction (CHR) model. Light with a wavelength in the near infrared (NIR) window (650 - 950 nm) allows a deeper tissue penetration and minimal signal absorption compared to wavelengths below 650 nm. The major advantages using fluorescence OI is that it is cheap, fast and easy to implement in different animal models.
Activatable fluorescent probes are optically silent in their inactivated states, but become highly fluorescent when activated by a protease. Activated MMPs lead to tissue destruction and play an important role for disease progression in delayed-type hypersensitivity reactions (DTHRs) such as RA and CHR. Furthermore, MMPs are the key proteases for cartilage and bone degradation and are induced by macrophages, fibroblasts and chondrocytes in response to pro-inflammatory cytokines. Here we use a probe that is activated by the key MMPs like MMP-2, -3, -9 and -13 and describe an imaging protocol for near infrared fluorescence OI of MMP activity in RA and control mice 6 days after disease induction as well as in mice with acute (1x challenge) and chronic (5x challenge) CHR on the right ear compared to healthy ears.

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

This paper explains the application of fluorescent imaging using an activatable optical imaging probe to visualize the in vivo activity of key matrix metalloproteinases in two different experimental models of inflammation.

לא פולשני<em&gt; בויבו</em&gt; פלואורסצנטי הדמיה אופטית של פעילות MMP דלקתית באמצעות Activatable פלואורסצנטי סוכן הדמיה

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte extravasation might result in pathophysiological changes in the CNS. Thus, investigation of lymphocyte migration into the CNS is important to understand inflammatory CNS diseases and to develop new therapy approaches. Here we present an in vitro model of the human blood-brain barrier to study lymphocyte extravasation. Human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) are confluently grown on a porous polyethylene terephthalate transwell insert to mimic the endothelium of the blood-brain barrier. Barrier function is validated by zonula occludens immunohistochemistry, transendothelial electrical resistance (TEER) measurements as well as analysis of evans blue permeation. This model allows investigation of the diapedesis of rare lymphocyte subsets such as CD56brightCD16dim/- NK cells. Furthermore, the effects of other cells, cytokines and chemokines, disease-related alterations, and distinct treatment regimens on the migratory capacity of lymphocytes can be studied. Finally, the impact of inflammatory stimuli as well as different treatment regimens on the endothelial barrier can be analyzed.

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Here, we describe a human blood-brain barrier model enabling to investigate lymphocyte transmigration into the central nervous system in vitro.

ניתוח של לימפוציטים extravasation שימוש<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של מחסום אנושי דם-מוח

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is that they may induce traumatic lesions on the surface of the eye, which can progress to scarring, eyelid deformity, limbal stem cell deficiency and in some cases, cause great discomfort to the subject. To avoid these clinical problems, impression cytology (IC) was developed to diagnose dry eye disease and later neoplasia, atopic disease, vernal keratoconjunctivitis and keratoconjunctivitis sicca. Typically, clinicians manually cut filter papers into required shapes and apply these to the ocular surface. Here, we describe how to perform IC using a commercially available medical device. This technique is explained here followed by immunophenotyping by flow cytometry. This technique requires less manual handling and causes less injury to the ocular surface.

The exposed normal ocular surface consists of cornea and conjunctiva. Epithelial cells, goblet cells and immune cells are present in the conjunctiva. Here, a non-invasive, technique of impression cytology is described using an impression cytology device and flow cytometry to analyze immune cells in the conjunctiva.

דרך לא פולשנית לבודד תאים פנוטיפ מן הקונגרס

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...