This work was supported by AI101263 from the National Institutes of Health (T.V.B), and by a grant from The Hartwell Foundation (M.L.M). M.L.M. is a member of the Duke Comprehensive Cancer Center.

ملاحظة: تم القيام به جميع الإجراءات التجريبية التي تنطوي على استخدام الجرذان وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة رعاية واستخدام الحيوان في جامعة ديوك. 1. إعداد تنبيب الرغامي قنية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع نهاية الإبرة من 2 بوصة 14 G angiocathether إبرة مع كماشة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قرصة التجويف من الإبرة مغلق مع كماشة إبرة الانف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع قسم مقروص وصولا الى حافة الجزء التجويف المفتوح مع كماشة القطع، ثم قطع حواف على جانبي نهاية المتبقية في 30 - 45 درجة زاوية إلى حافة الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع أسفل 3-4 ملم قنية في منطقة مفتوحة من كماشة الانزلاق مشترك على التوالي، وسحب صعودا حتى تم تشكيل منحنى صاعد طفيف في نهاية المطاف. ملاحظة: وسوف يسهل هذا توجيه قسطرة في القصبة الهوائية (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الصنفرة غرامة لضمان سلاسة أسفل حواف في نهاية قنية. </li><li&gt; العودة الصك اضعافها في أنابيب angiocatheter. تأكد من أن أنابيب أقصر قليلا من الإبرة أضعفت. </li></ol> إجراءات 2. قبل الجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد موقع لإجراء العملية عن طريق وضع مجهر التشغيل المقرر أن 10X التكبير على المنطقة التشغيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع وسادة الاحترار على منطقة التشغيل وتغطية مع وسادة الاستيعابية نظيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشكيل لمعدل ضربات القلب ورصد الأوكسجين في الدم بالقرب من حقل الجراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الفئران في الوزن القائم على الدواء الجرعات (على سبيل المثال، تسكين بعد العملية الجراحية، والمضادات الحيوية، أو اللمفاويات المستنفدة الضد). ملاحظة: النموذجية الجرذان الكبار تزن ما بين 350-450 جرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رزين الفئران مع تبخيرها 3٪ الأيزوفلورين-O 2 (3 لتر / دقيقة) باستخدام غرفة الاستقراء تنفيس إلى نظام الكسح الغاز مخدر النفايات المحتوية على الفحم المنشط. سماح 5 دقائق للتخدير الحث على توفير التخدير العميق ضروري لالتنبيب الرغامي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة كاربروفين أو Meloxicane (4.4 ملغ / كلغ) تحت الجلد لالفئران قبل الشروع في التنبيب والجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام كليبرز الكهربائية لحلاقة الرقبة والصدر من الفئران تخدير قبل التنبيب. </li></ol> 3. التنبيب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير الإعداد التنبيب عن طريق فرك كمية صغيرة من تزييت (على سبيل المثال، هلام KY) على نهاية قنية التنبيب. بدوره على جهاز التنفس الصناعي لبدء تدفق الغاز الأيزوفلورين من خلال أنابيب الموصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الفئران إلى جهاز التنبيب وتعليق الفئران على قضيب معدني التي كتبها العلوي القاطعة الأسنان (الشكل 2A). ملاحظة: يمكن شراء الأجهزة التنبيب بعض على الانترنت. محلية الصنع نموذج هو موضح هنا باستخدام الاكريليك ورقة مصبوب حول أجزاء من 2 × 4 بوصة قطعة قطني باستخدام شعلة غاز البوتان، وتعلق تعزيزات مع الكلوروفورم. يتم إرفاق شريط (أو الأسلاك المعدنية) من خلال حفر ثقوب على اخفاء الشريط وضعت على الصورةبيئة تطوير متكاملة من الاكريليك لمنع انشقاق أو تكسير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عبر تسليط الضوء على رقبة الفئران عن طريق وضع مرنة مصدر ضوء عالي الكثافة 1 - 2 سم من السطح البطني من الرقبة (الشكل 2B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام زوج من الطلاب ملقط نمط القياسية لسحب اللسان بلطف صعودا وإلى جانب الأسنان السفلية. قبضة اللسان بين الإبهام والسبابة من يد واحدة في حين وضع السطح داخل شقة من جانب واحد من ملقط ضد الطرف الأدنى من اللسان. الصحافة البطني لفضح سان المزمار وفتحة الحنجرة (الشكل 2C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصور الحبال الصوتية وتوجيه مقلوبة، نهاية قلل من قنية التنبيب الأمامية من خلال المزمار مفتوحة إلى القصبة الهوائية حتى محور angiocatheter اللمسات القواطع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مرود المعدنية، وإرفاق أنابيب التخدير لافتتاح angiocatheter لبدء التهوية مع isoflurane. ملاحظة: فلو الأوكسجين نموذجيمعدل ث إلى التنفس الصناعي هو 3 لتر / دقيقة مع 3٪ الأيزوفلورين. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط التنفس الصناعي بمعدل 60 التنفس / دقيقة في حجم تسيطر وضع جهاز التنفس الصناعي الذي يحقق ضغط ~ 12-14 مم زئبق. استخدام إيجابي ضغط نهاية الزفير (اللمحة) 3 سم H 2 O. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الصدر التوسع الثنائي جدار متزامنا مع التنفس الصناعي لضمان تحديد المكان المناسب من الأنبوب الرغامي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق الموصى بها الطبيب البيطري العين مرهم للعيون الفئران لمنع جفاف بينما تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم البيطري في عيون الفئران لمنع جفاف بينما تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين أنبوب القصبة الهوائية لرئيس الفئران مع شريط من شريط من القماش. ضمان اتصال قوي بين الأنبوب الرغامي وتدفق أنابيب مخدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق الأوكسجين في الدم ورصد معدل ضربات القلب إلى القدم الفئران ويبدأ الرصد. تأكيد التخدير المناسبة التي تؤكد عدم وجود رد فعل لقرصة ه. </li></ol> 4. بضع الصدر والتيموس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الأسلوب العقيم القياسية لمجمل العملية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف الطاولة المنطقة والتشغيل العمل وتطهير مع حل الإيثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام القفازات الجراحية المعقمة أثناء إجراء، والأوتوكلاف جميع الأدوات والمواد المستخدمة أثناء العملية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق providone اليود إلى منطقة الصدر بالكامل واتركه حتى يجف. ثم تنظيف سطح الجلد مع الايثانول 70٪ على الشاش. تغطية الفئران مع التفاف واضح من البلاستيك قطع حفرة لفضح مجال التشغيل العقيمة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الشق فوق القص في منطقة الصدر العلوية. جعل 2 سم شق خط الوسط من خلال الجلد ابتداء من 2 - 3 مم فوق الشق فوق القص وتمتد بشكل أقصى خط الوسط على طول القص باستخدام مقص شي حادة ذات الرؤوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء القص 1.5 سم متوسط ​​من الشق فوق القص مرة أخرى باستخدام مقص شي حادة ذات الرؤوس. Kالآثار البيئية الحافة السفلية من مقص فقط تحت القص والتقدم ببطء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج ضام ALM صغير فقط تحت عظمة القص فصل ومفتوحة لتكشف عن عضلات حزام قبل القصبة الهوائية (العضلة القصية والعضلات قصي درقي). فصل عضلات حزام قبل القصبة الهوائية باستخدام ملقط غريف حادة. ملاحظة: عند هذه النقطة، يمكن أن ينظر إلى القصبة الهوائية، وينبغي تصور أنبوب التنبيب داخل القصبة الهوائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع شوكات من ضام ALM صغير تحت عضلات حزام يفصل والقص. فتح ضام لفضح الجانب متفوقة من الغدة الصعترية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط دومون غرامة للافراج عن الحواف الجانبية للأنسجة الغدة الصعترية وفضح فصوص الغدة الصعترية أقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب الغدة الصعترية بلطف متفوق في موقع شق مفتوح، مع الحرص على تجنب الاتصال مع الوريد الأجوف، تحت الترقوة والأوعية السباتية متفوقة، وتقليل تعطل بطانة الجنبي الحساسة بين الغدة الصعترية والرئتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما رانه الغدة الصعترية يتم تشريح السفن وكشف، استخدم مقص الدقيقة لتفريقهم. استخدام قطعة من القطن لعقد الضغط على السفن لالارقاء إذا لزم الأمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقديم فصوص الغدة الصعترية أقل في شق ثم ليز بحدة المرفقات الخلفي. إزالة الغدة الصعترية سليمة وتفتيش بعناية الغدة الصعترية إزالة لأية أقسام عداد المفقودين. ملاحظة: قد يكون تصور الغدد الليمفاوية الصدرية الصغيرة المحيطة الغدة الصعترية وغالبا ما يصعب تمييزها عن نسيج الغدة الصعترية. وستكون هذه العقد جولة منفصلة مع مظهر مماثل لأنسجة الغدة الصعترية ولكن لن يكون في تواصل مع الغدة الصعترية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة ضام ألم وإغلاق عضلات القصية اللامية وsternothyoid مع اثنين من توقف 5-0 الغرز ماكسون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 2 قطرات من الصف الجراحية لاصقة الأنسجة cyanoacrylate عبر الغرز لختم المنصف تحت التهوية بالضغط الإيجابي. ملاحظة: هذا سيقلل من حدوث استرواح الصدر وورم دموي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق شارعernum مع اثنين من توقف 4-0 خيوط الحرير على إبرة القطع. أدخل الإبرة من خلال الفجوات بين الأضلاع، مع الحرص على توجيه الإبرة فقط تحت القص لتجنب طبقة العضلات الأساسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق طبقة الجلد مع تشغيل 4-0 نايلون خياطة. وقف الأيزوفلورين في هذه المرحلة لتقصير فترة الشفاء التخدير بعد الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف الموقع وشق الجلد المحيط مع مبلل المالحة الشاش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق عدة قطرات من Bupivicaine (0.25٪) لتخدير موضعي، تليها 1 - 2 قطرات من الغراء cyanoacrylate خلال شق لختم الجرح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مواصلة لتهوية حتى يظهر الفئران علامات من الجهد التنفسي مستقل ويبدأ التحرك الأطراف فيها. ينزع الأنبوب الفئران والسماح لها لاسترداد تحت مراقبة وثيقة في قفص وضعها على وسادة الاحترار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة البوبرينورفين (0،01-0،05 ملغ / كلغ) تحت الجلد لالفئران مباشرة بعد العملية وتكرار كل 8-12 ساعة لمدة 48 ساعة بوالحادي والجراحة (عادة 5 جرعات الإجمالية). في 24 و 48 ساعة بعد العملية، وإدارة كاربروفين أو Meloxicane (4.4 ملغ / كلغ) تحت الجلد (3 مجموع الجرعات بما في ذلك جرعة ما قبل المنطوق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تواصل رصد حتى الفئران تتحرك حول القفص. في أي علامات ضيق التنفس، وأداء إعادة التنبيب وإعادة استكشاف للالصدر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا تترك حيوان غير المراقب حتى استعاد وعيه أنه كاف للحفاظ على الاستلقاء القصية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا يعودون الحيوان الذي خضع لعملية جراحية للشركة من الحيوانات الأخرى حتى تعافى تماما. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الغرز طبقة الجلد 1 أسبوع بعد العملية. </li></ol>

<ol>
	<li>Hard, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymectomy+in+the+neonatal+rat.">Thymectomy in the neonatal rat.</a> Lab. Anim. 9 (2), 105-110 (1975).</li><li>Kobayashi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+complete+thymectomy+in+adult+rats.">A technique for complete thymectomy in adult rats.</a> J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0 (1994).</li><li>Delrivi&#232;re, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+technique+of+complete+thymectomy+in+adult+rats+without+tracheal+intubation.">New technique of complete thymectomy in adult rats without tracheal intubation.</a> Microsurgery. 18 (1), 6-8 (1998).</li><li>Walker, K. G., Jacques, B. C., Tweedle, J. R., Bradley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simpler+technique+for+open+thymectomy+in+adult+rats.">A simpler technique for open thymectomy in adult rats.</a> J. Immunol. Methods. 175 (1), 141 (1994).</li><li>Na, N., Zhao, D., Huang, Z., Hong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+rat+intubation+and+thymectomy.">An improved method for rat intubation and thymectomy.</a> Chin. Med. J. (Engl). 124 (17), 2723-2727 (2011).</li><li>Kastl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplification+of+rat+intubation+on+inclined+metal+plate).">Simplification of rat intubation on inclined metal plate).</a> Adv. Physiol. Educ. 28 (1-4), 29-34 (2004).</li><li>Weksler, B., Ng, B., Lenert, J., Burt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+endotracheal+intubation+in+the+rat.">A simplified method for endotracheal intubation in the rat.</a> J. Appl. Physiol. 76 (4), 1823-1825 (1994).</li><li>Jou, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+intubation+using+a+new+oropharyngeal+intubation+wedge.">Simplified rat intubation using a new oropharyngeal intubation wedge.</a> J. Appl. Physiol. 89 (5), 1766-1770 (2000).</li><li>Rivard, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+intubation+and+ventilation+for+surgical+research.">Rat intubation and ventilation for surgical research.</a> J. Invest. Surg. 19 (4), 267-274 (2006).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+isolated,+vascular+whole+thymus+transplantation+in+nude+rats.">A model of isolated, vascular whole thymus transplantation in nude rats.</a> Transplant Proc. 44 (5), 1394-1398 (2012).</li><li>AbuAttieh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+maturation+of+antibodies+requires+integrity+of+the+adult+thymus.">Affinity maturation of antibodies requires integrity of the adult thymus.</a> Eur. J. Immunol. 42 (2), 500-510 (2012).</li><li>Reeves, J. P., Reeves, P. A., Chin, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+surgery:+removal+of+the+spleen+or+thymus.">Survival surgery: removal of the spleen or thymus.</a> Curr. Protoc. Immunol. 1 (Unit 1.10), (2001).</li><li>Siemionow, M., Izycki, D., Ozer, K., Ozmen, S., Klimczak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+thymus+in+operational+tolerance+induction+in+limb+allograft+transplant+model.">Role of thymus in operational tolerance induction in limb allograft transplant model.</a> Transplantation. 81 (11), 1568-1576 (2006).</li><li>Satoh, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosuppressive+effect+of+long-term+drainage+of+thoracic+duct+on+immunological+memory+in+adult+thymectomized+rats.+Transplant.">Immunosuppressive effect of long-term drainage of thoracic duct on immunological memory in adult thymectomized rats. Transplant.</a> Proc. 37 (4), 1947-1948 (2005).</li><li>Groen, H., Klatter, F., Pater, J., Nieuwenhuis, P., Rozing, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporary,+but+Essential+Requirement+of+CD8++T+Cells+Early+in+the+Pathogenesis+of+Diabetes+in+BB+Rats+as+Revealed+by+Thymectomy+and+CD8+Depletion.">Temporary, but Essential Requirement of CD8+ T Cells Early in the Pathogenesis of Diabetes in BB Rats as Revealed by Thymectomy and CD8 Depletion.</a> Clin. Dev. Immunol. 10 (2-4), 141-151 (2003).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

يوفر هذا البروتوكول لالتيموس الكامل نهج مينيملي مع شق ثلاث طبقات الإغلاق مع تطبيق الغراء الجراحية مصممة لتقليل المضاعفات. وقد تجلى إزالة كاملة من الغدة الصعترية عن فقدان خلايا T ساذجة وIHC تلطيخ من الأنسجة اللمفاوية المنصفية لcytokeratin. <p class="jove_content" style=";text-align:right;direction...

منذ أوائل 1960s، وقد تم الاعتراف الغدة الصعترية لدوره الحيوي في تنمية التحمل المناعي المركزي. وقد ثبت القوارض التيموس أن يكون الإجراء أساسي في تحديد دور الغدة الصعترية في تمايز الخلايا اللمفاوية والتسامح الذات، وتحمل مناعي في تحديد زرع المزروع وورم خبيث. إزالة الغدة الصعترية الفئران تسمح للدراسات التي تنطوي على استنزاف T-الخلية أو نقل بالتبني من سكان الخلية T محددة دون عودة ظهور خلايا T ساذجة الأم. Thymectomies في القوارض حديثي الولادة ويمكن تحقيق ذلك باستخدام تقنية الشفط مع نتائج يمكن الاعتماد عليها 1. في الفئران البالغات، ويرتبط هذا الأسلوب مع معدل وفيات تقريبي 20٪ والنتائج في كثير من الأحيان في التيموس غير مكتمل 2. لتحقيق باستمرار التيموس الكامل في الفئران الكبار، مطلوب التعرض المفتوحة للالمنصف من خلال القص المتوسط. ومع ذلك، هذاويرتبط الإجراء مع المضاعفات التي تشمل إصابة القصبة الهوائية، والنزف واسترواح الصدر مما يؤدي إلى معدل الوفيات الإجمالي تتراوح 1،5-6٪ 2- 4. وعلى مدى العقدين الماضيين تحسينات في تقنيات التيموس انخفضت مضاعفات المحيطة بالجراحة وتحسنت معدلات البقاء على قيد الحياة. التنبيب الرغامي السماح للتهوية بالضغط الإيجابي قد تراجعت معدلات استرواح الصدر 5. طرق التنبيب وصف في وقت سابق مجموعة من التعرض مفتوحة إلى القصبة الهوائية إلى أساليب أقل الغازية باستخدام التصور الحبال الصوتية المباشر. المضاعفات المرتبطة إجراء التنبيب وتشمل إصابة القصبة الهوائية، وتمزق الحبال الصوتية، التنبيب المريء غير مقصود، ونزيف الناتجة عن ثقب في القلب أو تهتك من الوريد الأجوف العلوي. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن مقربة من فصوص الغدة الصعترية السفلى لبطانة الجنبي يؤدي إلى استرواح الصدر. نحن هنا وصف تقنيةالتيموس من خلال مينيملي 2 سم شق الجلد التالية طريقة بسيطة لالتنبيب الرغامي باستخدام angiocatheter اضعافها نهاية والقصبة الهوائية عبر الجلد الإضاءة. والتيموس ينطوي على 1.5 سم القص وإغلاق ثلاث طبقات مع تطبيق الغراء الجراحي لختم المنصف والحد من حدوث النزف ومضاعفات في الجهاز التنفسي. هذه الطريقة يؤدي بشكل موثوق في التيموس كاملة كما يتضح من اختفاء CD4 + CD8 + وخلايا T ساذجة التالية التيموس وعدم وجود أنسجة الغدة الصعترية على IHC تلطيخ. يتم الاحتفاظ مرات المنطوق وفيات شبه الإجرائية إلى أدنى حد ممكن.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="718">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:117px;">Company</td>
			<td style="width:152px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">2&#34; 14-gauge angiocatheter</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Operating microscope</td>
			<td style="width:117px;">Zeiss</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Warming pad</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:283px;">Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors</td>
			<td style="width:117px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:152px;">ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor)</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top)</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;">See Figure 2&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:283px;">Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank</td>
			<td style="width:117px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:152px;">ST1 72-6420</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:283px;">Small animal ventilator with tubing</td>
			<td style="width:117px;">CWE</td>
			<td style="width:152px;">12-02000 (ventilator)and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats)</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">High-intensity Fiber-Optic Illuminator</td>
			<td style="width:117px;">Dolan Jenner</td>
			<td style="width:152px;">EEG 2823M</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Student standard pattern forceps</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">91100-16</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Fine straight scissors</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">14060-09</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Blunt-tipped Shea scissors</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">14105-12</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Small Alm retractor (for sternum)</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">17008-07</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Blunt Graefe forceps</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">11050-10</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Fine Dumont forceps</td>
			<td style="width:117px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:152px;">11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">5-0 Maxon sutures</td>
			<td style="width:117px;">Ethicon</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">4-0 Silk sutures (with cutting needle)</td>
			<td style="width:117px;">Ethicon</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">6-0 Nylon suture</td>
			<td style="width:117px;">Ethicon</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Cyanoacrylate glue (Endermil)</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Lubrication gel</td>
			<td style="width:117px;">Akorn Animal Health</td>
			<td style="width:152px;">NDC 17478-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

complete thymectomy in adult rats with non-invasive endotracheal intubation

التيموس في القوارض حديثي الولادة هي إجراءات المتبعة وموثوق بها للدراسات المناعية. ومع ذلك، في الفئران البالغات، ومضاعفات النزف واسترواح الصدر من اضطراب الجنبي يمكن أن يؤدي إلى معدل وفيات كبيرة. هذا البروتوكول هو طريقة بسيطة لاستئصال التوتة الفئران التي تستخدم مصغرة القص والتنبيب الرغامي. ويتم إنجاز التنبيب مع طريقة غير الغازية واستنساخه بسهولة، ويسمح للتهوية بالضغط الإيجابي لمنع استرواح الصدر والشعب الهوائية للرقابة التي تتيح الوقت الكافي للدقيق الغدة الصعترية تشريح للحد من انقطاع الجنبي. وهناك 1.5 سم شق القصية يقلل اتصال مع السفن المنصفية وغشاء الجنب، في حين لا يزال توفير التصور الكامل للالغدة الصعترية. بعد التعرض للالمنصف، يتم إزالة الغدة الصعترية التي كتبها تشريح حادة تحت التكبير. ثم يتم مختومة الفضاء الجنبي من قبل الإغلاق خياطة العضلات قبل القصبة الهوائية تليها تطبيق الغراء الجراحي. الثم يتم إغلاق الصدر بإغلاق خياطة من القص، تليها إغلاق خياطة الجلد. كانوا جميعا thymectomies كاملة كما يتضح من المناعى (IHC) تلطيخ من الأنسجة المنصفية، وغياب T-خلايا ساذجة التدفق الخلوي، وكان الإجراء معدل البقاء على قيد الحياة 96٪. هذا الأسلوب هو مناسبة عندما هو المطلوب التيموس الكامل مع الحد الأدنى من المضاعفات لمزيد من الدراسات المناعية في الفئران الكبار athymic.

تم تنفيذ هذا الإجراء على الفئران لويس البالغين (ن = 26). كان الوقت تشغيل متوسط ​​15 ± 3 دقائق. لم يكن هناك أي وفيات أثناء العملية. كان 45 ± 5 ثانية - في الوقت نفسه التنبيب - من وضع الفئران على الجهاز التنبيب لإنشاء التهوية. وكان 24 الفئران الشفاء التام من العملية مع أي دليل على ...

Watch this Scientific Journal Video about Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation at JoVE.com

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described.

التيموس كاملة في الجرذان الكبار مع غير الغازية التنبيب الرغامي

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

complete-thymectomy-adult-rats-with-non-invasive-endotracheal

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

16.4K Views.  Duke University Medical Center. Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described. 

Video: Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists. The value of 2P microscopy is that it provides rich spatiotemporal information regarding cell behaviors within intact tissues and in live mice. Leukocyte recruitment plays a significant role in host defense against infection and when unchecked, can contribute to inflammatory and autoimmune diseases. Studying leukocyte recruitment in vivo is technically challenging since cells are moving rapidly within vessels located deep within light scattering tissues. To date, most intravital imaging studies require surgical preparation to expose the blood vessels and tissues. To avoid the tissue damage and inflammation induced by surgery itself, here, we describe a non-invasive single-cell imaging approach that can be used to study leukocyte trafficking in the mouse footpad and phalanges. We discuss the technical aspects of our 2P imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Here, we describe a non-invasive two-photon (2P) microscopy approach to study leukocyte homing in the mouse footpad. We discuss the technical aspects of our tissue imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

غير الغازية تصوير الزاجل كريات بيضاء والهجرة في الجسم الحي</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 to 40% attributable mortality6. Systemic candidiasis is normally controlled by innate immunity, and individuals with genetic defects in innate immune cell components such as phagocyte NADPH oxidase are more susceptible to candidemia7-9. Very little is known about the dynamics of C. albicans interaction with innate immune cells in vivo. Extensive in vitro studies have established that outside of the host C. albicans germinates inside of macrophages, and is quickly destroyed by neutrophils10-14. In vitro studies, though useful, cannot recapitulate the complex in vivo environment, which includes time-dependent dynamics of cytokine levels, extracellular matrix attachments, and intercellular contacts10, 15-18. To probe the contribution of these factors in host-pathogen interaction, it is critical to find a model organism to visualize these aspects of infection non-invasively in a live intact host. 
The zebrafish larva offers a unique and versatile vertebrate host for the study of infection. For the first 30 days of development zebrafish larvae have only innate immune defenses2, 19-21, simplifying the study of diseases such as disseminated candidiasis that are highly dependent on innate immunity. The small size and transparency of zebrafish larvae enable imaging of infection dynamics at the cellular level for both host and pathogen. Transgenic larvae with fluorescing innate immune cells can be used to identify specific cells types involved in infection22-24. Modified anti-sense oligonucleotides (Morpholinos) can be used to knock down various immune components such as phagocyte NADPH oxidase and study the changes in response to fungal infection5. In addition to the ethical and practical advantages of using a small lower vertebrate, the zebrafish larvae offers the unique possibility to image the pitched battle between pathogen and host both intravitally and in color. 
The zebrafish has been used to model infection for a number of human pathogenic bacteria, and has been instrumental in major advances in our understanding of mycobacterial infection3, 25. However, only recently have much larger pathogens such as fungi been used to infect larva5, 23, 26, and to date there has not been a detailed visual description of the infection methodology. Here we present our techniques for hindbrain ventricle microinjection of prim25 zebrafish, including our modifications to previous protocols. Our findings using the larval zebrafish model for fungal infection diverge from in vitro studies and reinforce the need to examine the host-pathogen interaction in the complex environment of the host rather than the simplified system of the Petri dish5.

The rapid development, small size and transparency of zebrafish are tremendous advantages for the study of innate immune control of infection1-4. Here we demonstrate techniques for infecting zebrafish larvae using the fungal pathogen Candida albicans by microinjection, methodology recently used to implicate phagocyte NADPH oxidase activity in control of fungal dimorphism5.

غير الغازية التصوير من المبيضات المنتشر في يرقات اسماك الزرد

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

The lymphatic vascular system is an important component of the circulatory system that maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and mediates fat absorption in the gut. Yet despite its critical function, there is comparatively little understanding of how the lymphatic system adapts to serve these functions in health and disease1. Recently, we have demonstrated the ability to dynamically image lymphatic architecture and lymph "pumping" action in normal human subjects as well as in persons suffering lymphatic dysfunction using trace administration of a near-infrared fluorescent (NIRF) dye and a custom, Gen III-intensified imaging system2-4. NIRF imaging showed dramatic changes in lymphatic architecture and function with human disease. It remains unclear how these changes occur and new animal models are being developed to elucidate their genetic and molecular basis. In this protocol, we present NIRF lymphatic, small animal imaging5,6 using indocyanine green (ICG), a dye that has been used for 50 years in humans7, and a NIRF dye-labeled cyclic albumin binding domain (cABD-IRDye800) peptide that preferentially binds mouse and human albumin8. Approximately 5.5 times brighter than ICG, cABD-IRDye800 has a similar lymphatic clearance profile and can be injected in smaller doses than ICG to achieve sufficient NIRF signals for imaging8. Because both cABD-IRDye800 and ICG bind to albumin in the interstitial space8, they both may depict active protein transport into and within the lymphatics. Intradermal (ID) injections (5-50 &mu;l) of ICG (645 &mu;M) or cABD-IRDye800 (200 &mu;M) in saline are administered to the dorsal aspect of each hind paw and/or the left and right side of the base of the tail of an isoflurane-anesthetized mouse. The resulting dye concentration in the animal is 83-1,250 &mu;g/kg for ICG or 113-1,700 &mu;g/kg for cABD-IRDye800. Immediately following injections, functional lymphatic imaging is conducted for up to 1 hr using a customized, small animal NIRF imaging system. Whole animal spatial resolution can depict fluorescent lymphatic vessels of 100 microns or less, and images of structures up to 3 cm in depth can be acquired9. Images are acquired using V++ software and analyzed using ImageJ or MATLAB software. During analysis, consecutive regions of interest (ROIs) encompassing the entire vessel diameter are drawn along a given lymph vessel. The dimensions for each ROI are kept constant for a given vessel and NIRF intensity is measured for each ROI to quantitatively assess "packets" of lymph moving through vessels.

Recently developed imaging techniques using near-infrared fluorescence (NIRF) may help elucidate the role the lymphatic system plays in cancer metastasis, immune response, wound repair, and other lymphatic-associated diseases.

غير الغازية التصوير الضوئي من الأوعية الدموية اللمفية على فأرة الحاسوب

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and pathological processes such as CNS maturation in development, multiple sclerosis, and spinal cord injury. Microglia can be activated and recruited to action by neuronal injury or stimulation, such as axonal damage seen in MS or ischemic brain trauma resulting from stroke. These immunocompetent members of the CNS are also thought to have roles in synaptic plasticity under non-pathological conditions. We employ protocols for culturing microglia from the neonatal and adult tissues that are aimed to maximize the viable cell numbers while minimizing confounding variables, such as the presence of other CNS cell types and cell culture debris. We utilize large and easily discernable CNS components (e.g. cortex, spinal cord segments), which makes the entire process feasible and reproducible. The use of adult cells is a suitable alternative to the use of neonatal brain microglia, as many pathologies studied mainly affect the postnatal spinal cord. These culture systems are also useful for directly testing the effect of compounds that may either inhibit or promote microglial activation. Since microglial activation can shape the outcomes of disease in the adult CNS, there is a need for in vitro systems in which neonatal and adult microglia can be cultured and studied.

We outline methods for the efficient and quick isolation/culture of viable microglia from the neonatal cerebral cortex and adult spinal cord. The dissection and plating of cortical microglia can be accomplished within 90 minutes, with the subsequent microglial harvest taking place ~ 10 days following the initial dissection.

الخلايا الدبقية الصغيرة زراعة من الجهاز العصبي المركزي حديثي الولادة والكبار

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal features of the natural infection. This protocol describes procedures for the establishment and evaluation of systemic infection due to neuropathogenic Escherichia coli K1 in the neonatal rat. Colonization of the gastrointestinal tract leads to dissemination of the pathogen along the gut-lymph-blood-brain course of infection and the model displays strong age dependency. A strain of E. coli O18:K1 with enhanced virulence for the neonatal rat produces exceptionally high rates of colonization, translocation to the blood compartment and invasion of the meninges following transit through the choroid plexus. As in the human host, penetration of the central nervous system is accompanied by local inflammation and an invariably lethal outcome. The model is of proven utility for studies of the mechanism of pathogenesis, for evaluation of therapeutic interventions and for assessment of bacterial virulence.

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Here, a procedure is described for the establishment of systemic infection in the neonatal rat with cultures of Escherichia coli K1. This non-invasive procedure permits colonization of the gastrointestinal tract, translocation of the pathogen to the systemic circulation, and invasion of the central nervous system at the choroid plexus.

نموذج غير الغازية من ممرض للأعصاب<em&gt; الإشريكية القولونية</em&gt; العدوى في الأطفال حديثي الولادة الجرذ

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of causing systemic disease in both fish and humans. A better understanding of S. iniae disease pathogenesis requires an appropriate model system. The genetic tractability and the optical transparency of the early developmental stages of zebrafish allow for the generation and non-invasive imaging of transgenic lines with fluorescently tagged immune cells. The adaptive immune system is not fully functional until several weeks post fertilization, but zebrafish larvae have a conserved vertebrate innate immune system with both neutrophils and macrophages. Thus, the generation of a larval infection model allows the study of the specific contribution of innate immunity in controlling S. iniae infection.
The site of microinjection will determine whether an infection is systemic or initially localized. Here, we present our protocols for otic vesicle injection of zebrafish aged 2-3 days post fertilization as well as our techniques for fluorescent confocal imaging of infection. A localized infection site allows observation of initial microbe invasion, recruitment of host cells and dissemination of infection. Our findings using the zebrafish larval model of S. iniae infection indicate that zebrafish can be used to examine the differing contributions of host neutrophils and macrophages in localized bacterial infections. In addition, we describe how photolabeling of immune cells can be used to track individual host cell fate during the course of infection.

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Here, we present a protocol for the generation and imaging of a localized bacterial infection in the zebrafish otic vesicle.

التصوير غير الغازية من الاستجابة المناعية الفطرية في نموذج الزرد يرقات<em&gt; العقدية iniae</em&gt; العدوى

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant preclinical advances in our understanding of the underlying cellular and molecular pathogenesis. In vivo mouse models capture the integrated physiology and resilience of the host defense response in a manner not revealed by alternative, simplified ex vivo approaches. Several methods have been described in the literature for intrapulmonary inoculation of bacteria in mice, including aerosolization, intranasal delivery, peroral endotracheal cannulation under &#39;blind&#39; and visualized conditions, and transcutaneous endotracheal cannulation. All methods have relative merits and limitations. Herein, we describe in detail a non-invasive, technically non-intensive, inexpensive, and rapid method for intratracheal delivery of bacteria that involves aspiration (i.e., inhalation) by the mouse of an infectious inoculum pipetted into the oropharynx while under general anesthesia. This method can be used for pulmonary delivery of a wide variety of non-caustic biological and chemical agents, and is relatively easy to learn, even for laboratories with minimal prior experience with pulmonary procedures. In addition to describing the aspiration pneumonia method, we also provide step-by-step procedures for assaying the subsequent in vivo pulmonary innate immune response of the mouse, in particular, methods for quantifying bacterial clearance and the cellular immune response of the infected airway. This integrated and simple approach to pneumonia assessment allows for rapid and robust evaluation of the effect of genetic and environmental manipulations upon pulmonary innate immunity.

Several methods have been described in the literature for modeling bacterial pneumonia in mice. Herein, we describe a non-invasive, inexpensive, rapid method for inducing pneumonia via aspiration (i.e., inhalation) of a bacterial inoculum pipetted into the oropharynx. Downstream methods for assessment of the pulmonary innate immune response are also detailed.

والطريقة غير الغازية ومن الناحية الفنية غير كثيفة للتحريض وPhenotyping التجريبية البكتيرية والالتهاب الرئوي في الفئران

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo fluorescence optical imaging (OI), in two different mouse models of inflammation: a rheumatoid arthritis (RA) and a contact hypersensitivity reaction (CHR) model. Light with a wavelength in the near infrared (NIR) window (650 - 950 nm) allows a deeper tissue penetration and minimal signal absorption compared to wavelengths below 650 nm. The major advantages using fluorescence OI is that it is cheap, fast and easy to implement in different animal models.
Activatable fluorescent probes are optically silent in their inactivated states, but become highly fluorescent when activated by a protease. Activated MMPs lead to tissue destruction and play an important role for disease progression in delayed-type hypersensitivity reactions (DTHRs) such as RA and CHR. Furthermore, MMPs are the key proteases for cartilage and bone degradation and are induced by macrophages, fibroblasts and chondrocytes in response to pro-inflammatory cytokines. Here we use a probe that is activated by the key MMPs like MMP-2, -3, -9 and -13 and describe an imaging protocol for near infrared fluorescence OI of MMP activity in RA and control mice 6 days after disease induction as well as in mice with acute (1x challenge) and chronic (5x challenge) CHR on the right ear compared to healthy ears.

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

This paper explains the application of fluorescent imaging using an activatable optical imaging probe to visualize the in vivo activity of key matrix metalloproteinases in two different experimental models of inflammation.

غير الغازية<em&gt; في فيفو</em&gt; الإسفار التصوير البصري من مب النشاط التهابات باستخدام عامل التصوير الفلورسنت أكتيفاتابل

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte extravasation might result in pathophysiological changes in the CNS. Thus, investigation of lymphocyte migration into the CNS is important to understand inflammatory CNS diseases and to develop new therapy approaches. Here we present an in vitro model of the human blood-brain barrier to study lymphocyte extravasation. Human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) are confluently grown on a porous polyethylene terephthalate transwell insert to mimic the endothelium of the blood-brain barrier. Barrier function is validated by zonula occludens immunohistochemistry, transendothelial electrical resistance (TEER) measurements as well as analysis of evans blue permeation. This model allows investigation of the diapedesis of rare lymphocyte subsets such as CD56brightCD16dim/- NK cells. Furthermore, the effects of other cells, cytokines and chemokines, disease-related alterations, and distinct treatment regimens on the migratory capacity of lymphocytes can be studied. Finally, the impact of inflammatory stimuli as well as different treatment regimens on the endothelial barrier can be analyzed.

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Here, we describe a human blood-brain barrier model enabling to investigate lymphocyte transmigration into the central nervous system in vitro.

تحليل الخلايا الليمفاوية التسرب باستخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من الدم في الدماغ الإنسان الحاجز

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is that they may induce traumatic lesions on the surface of the eye, which can progress to scarring, eyelid deformity, limbal stem cell deficiency and in some cases, cause great discomfort to the subject. To avoid these clinical problems, impression cytology (IC) was developed to diagnose dry eye disease and later neoplasia, atopic disease, vernal keratoconjunctivitis and keratoconjunctivitis sicca. Typically, clinicians manually cut filter papers into required shapes and apply these to the ocular surface. Here, we describe how to perform IC using a commercially available medical device. This technique is explained here followed by immunophenotyping by flow cytometry. This technique requires less manual handling and causes less injury to the ocular surface.

The exposed normal ocular surface consists of cornea and conjunctiva. Epithelial cells, goblet cells and immune cells are present in the conjunctiva. Here, a non-invasive, technique of impression cytology is described using an impression cytology device and flow cytometry to analyze immune cells in the conjunctiva.

وهناك طريقة غير الغازية لعزل والنمط الظاهري الخلايا من الملتحمة

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...