Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы о генерации васкуляризированных лесов, которые действительно Святой Грааль области тканевой инженерии. Основным преимуществом этой техники является то, что под давлением мешок в перевернутой ориентации улучшает децеллюляризацию не трансплантируемых органов человека и позволяет нам делать это стерильным способом в течение соответствующих сроков. Чтобы подготовить сердце к децеллюляризации, сначала выполните внутренний осмотр на возможные дефекты.
При дефекте перегородки исправь дефект соответствующими швами. Далее, ligate начальника и нижней вены cavas с 2-0 шелковый шов. Шов правой стенки атриума с 5-0 PROLENE, и вскрыть аорту от основной легочной артерии для последующей канюляции.
Вставьте разъемы, в зависимости от диаметра сосуда, в аорту и легочную артерию, и закрекрете разъемы 2-0 шелковыми швами. Используя одно из отверстий легочной вены, вставьте трубчатую линию через левый атриум к левому желудоку и соедините линию инфузии с разъемом в аорте и линией оттока к разъему в легочной артерии. Поместите подготовленное сердце в полиэстерный мешок в перевернутой ориентации, и поместите мешок в контейнер перфузии.
Соедините каждую из линий с соответствующими портами в резиновой пробке, в зависимости от диаметра контейнера, и вставьте пробку в крышку контейнера перфузии, чтобы запечатать полиэфирный мешок. Затем, perfuse PBS через инфузионный порт резиновой пробки для проверки оттока из легочной артерии и из линии, вставленной в левый желудочек, используя этот поток для очистки органа от любых остаточных следов крови в сосудах. Когда сердце будет готово, поместите собранный биореактор в вертикальной ориентации, и соедините линию инфузии, линию напорной головки, линию оттока легочной артерии и линию биореактора слива к поверхностным портам резиновой крышки поверх биореактора перфузии.
Затем, decellularize сердце в течение четырех часов с гипертонический раствор, два часа с гипотоническим раствором, 120 часов с додецил сульфатом натрия, или SDS, и окончательное мыть с 120 литров PBS, все под постоянным 120 миллиметров ртутного давления, как измеряется в корне аорты. В течение последних 10 литров PBS мыть, добавить 500 миллилитров стерильных 2,1% перакетической кислоты раствор нейтрализованы с 10 нормальных гидроксида натрия в раствор перфузии стерилизовать эшафот. Как правило, скорость потока в аорту в процессе децеллюляризации постепенно уменьшается по мере изменения перфузионные растворы от гипертонической к гипотонической.
В отличие от этого, скорость потока увеличивается, когда раствор перфузии изменен с гипотонического раствора на SDS, после чего скорость потока вливания демонстрирует колебания. Скорость оттока из легочной артерии демонстрирует аналогичную тенденцию с гипер- и гипотоническими растворами. Тем не менее, скорость оттока во время перфузии SDS демонстрирует общее снижение.
Эффективность коронарной перфузии также уменьшается с течением времени, как различные реагенты пронизываются через сосуды. По мере одновременного сбора оттока перфусата из легочной артерии и левого желудочка их содержание можно сравнить по спектроскопии. Мутность стоков из обоих сосудов уменьшается с течением времени во время перфузий, хотя мутность легочной артерии демонстрирует более резкое изменение цвета по сравнению с тем, что наблюдается из левого желудочка в течение начального периода перфузии.
Оценка корреляции между мутностью оттока и клеточным мусором с помощью анализа белка бицинхониновой кислоты из шести децеллюляризованных человеческих сердец показывает линейную корреляцию между концентрацией белка и мутностью сточных вод. При попытке этой процедуры, важно контролировать скорость потока и собирать перфусировать периодически на самом деле контролировать процесс перфузии. После этой процедуры, другие методы, такие как механическая оценка или тестирование стерильности могут быть использованы для оценки верности эшафот и его потенциальное использование для recellularization для создания функциональной сердечной ткани.
После своего развития, этот метод проложил путь для исследователей в области регенеративной медицины и тканевой инженерии, чтобы исследовать генерацию целых васкуляризированных органов, буквально изменяя твердое поле трансплантации органов. Не забывайте, что работа с человеческими органами и тканями и химическими веществами, такими как SDS, может быть чрезвычайно опасной, и всегда носить соответствующее оборудование личной защиты при проведении этой процедуры.
