Индукционной системы для кластерных устьиц на лечение погружения раствора сахара в проростках Arabidopsis thaliana

Этот метод ответил на ключевой вопрос биологии развития растений. То есть, в чем важность пространственного распределения стоматы? Наша индукционная система кластерной стоматы с использованием раствора сахарозы довольно проста и непосредственно применима к трансгенным или мутантным линиям арабидопсиса талиана.

Для начала добавьте в стакан 1,1 грамма средних солей Мурашиге-Скуг и 15 граммов сахарозы. Добавьте в стакан 490 миллилитров дистиллированной воды и смешайте с баром для перемешивания. Используйте гидроксид калия для регулировки рН до 5,8.

Затем разбавить раствор 500 миллилитров дистиллированной воды и передать разбавленный раствор в средней бутылке. После этого, автоклав решения. Подготовь решение для стерилизации в соответствии с текстовым протоколом.

Затем, работая в асептических условиях, поместите около 50 трансгенных семян A.thaliana с флуоресцентным маркером в 1,5 миллилитровую трубку. Затем добавьте один миллилитр 70% этанола в трубку и перемешайте трубку пять раз. После того, как семена утонут на дно трубки, аккуратно удалите этанол с помощью микропипюты.

Добавьте один миллилитр раствора стерилизации в семена и инвертировать трубку пять раз, чтобы смешать. Аккуратно удалите раствор стерилизации из семян с помощью микропипеда. Затем добавьте один миллилитр стерильной воды.

Добавьте 1,5 миллилитров раствора Murashige-Skoog к каждому колодец из 24 пластин. Затем добавьте два стерилизованных семян к каждому хорошо. Используя два слоя парафильма, приклейте крышку к пластине.

Затем перенесите пластину в камеру роста, чтобы инкубировать в течение 14 дней. Во-первых, перенесите 30 микролитров раствора Мурашиге-Скуг из 24 хорошо пластины в центр стеклянной горки. Используя рассечение ножницами, удалите котилендон из 14-дневного рассады.

Поплавок cotyledon со стороной наблюдения лицом вверх на падение Murashige-Skoog решения. Подготовь котилендон в соответствии с методами, ранее описанными в журнале визуализированых экспериментов. Установите образец на сцене конфокального лазерного микроскопа.

Наконец, используйте яркое освещение поля для выбора кластерных охранных ячеек для наблюдения. В этом протоколе стоматальная кластеризация была индуцирована в саженцах A.thaliana. Кластерные клетки-охранники, выращенные в сахарозе, содержащей средние хлоропласты, чем клетки-охранники, выращенные в условиях, свободных от сахарозы.

Расширение хлоропластов было подтверждено хлоропластом стромы маркером и хлорофиллом аутофторесцентных средств, что свидетельствует о том, что лечение сахарозой привело к накоплению крахмала зерна в хлоропластах. Кроме того, конфокальные наблюдения GFP tub-6 показали, что корковые микротрубочные трубы были радиально ориентированы в обработанных сахарозой клетках, как и в клетках, свободных от сахарозы. На самом деле мы обнаружили этот метод случайно.

После находки мы изучили экологическую реакцию кластерной стоматы. Мы считаем, что наша система может помочь изучить значение распределения стоматы.