Одновременность и линии взаимодействия между мозгом и микрофлорой кишечника остаются неизвестными. Используйте этот метод, изменения в микрофлоре кишечника после черепно-мозговой травмы у мышей могут быть рассмотрены. Основным преимуществом этой техники является то, что она относительно проста и эффективна.
Демонстрацией процедуры будет Wendong You, аспирант из моей лаборатории. Для черепно-мозговой травмы индукции, подтвердить отсутствие реакции на боль в крайнем случае в анестезированной мыши, и применять мазь на глазах животного. После бритья, дезинфицировать открытые кожи головы с 70%этанола до инцизии кожи головы в sagittal плоскости.
Используя типсы, втягивайте разрез с обеих сторон и слегка отделяйте периостеум. Используйте маркер, чтобы нарисовать круг диаметром три миллиметра на правой теменной области черепа в двух миллиметрах от средней линии. Используйте электрическую дрель, чтобы тщательно проникнуть в череп, не повреждая дуру.
Удалите костной лоскут, чтобы разоблачить трехмиллиметровое костное окно и поместите пластиковую канюлю травмы над краниотомией. После цементирования канюли к черепу с помощью зубного акрила, используйте пятими миллилитровый шприц, чтобы заполнить канюлю стерильным 0,9% нормального солевого раствора, заботясь, чтобы избежать пузырьков. Включите осциллоскоп и усилитель.
Подтвердите, что трубка высокого давления боковой жидкости ударных травмы устройства не является свободным от пузырьков воздуха, и доставить около 10 импульсов испытания, пока устройство дает устойчивый сигнал. Отрегулируйте угол стартового положения маятника, чтобы достичь интенсивности пульса около двух стандартных атмосфер и подключить канюлю травмы к боковой жидкости ударных травмы устройства. Потяните спусковой крючок, чтобы освободить маятник, вызывая черепно-мозговую травму.
Затем получить и передать импульс dura через всю закрытую, заполненную жидкостью трубчатую систему. После индукции черепно-мозговой травмы удалите канюлю и шов разреза. Затем поместите мышь на грелку с мониторингом, пока она не амбулаторно, прежде чем вернуть животное в свою домашнюю клетку с объявлением libitum доступ к пище и воде.
В указанных экспериментальных точках времени, подвергать кишечник в соответствии со стандартными протоколами и использовать атравматические типсы, чтобы мягко отделить caecum от других кишечных трактов. Когда ткань была обнаружена, вырезать caecum с острыми ножницами и вручную извлечь caecum содержимое на стерильную повязку. Затем перенесите содержимое в 1,5-миллилитровую микроцентрифугную трубку при температуре минус 80 градусов по Цельсию до анализа микробиома.
16S рекомбинантное секвенирование ДНК демонстрирует снижение разнообразия микробиоты caecum у мышей через три дня после черепно-мозговой травмы, с наиболее распространенной таксой в caecum содержание фиктивных и черепно-мозговых травм групп показано на рисунке. Кроме того, неметрическое, многомерное масштабирование выявляет изменения в составе микробиоты caecum после черепно-мозговой травмы. Не забудьте сохранить дура нетронутыми при бурении черепа, и быть нежным при поиске и отделении caecum от других кишечных путей.
После этой процедуры, гематоксилин и эозин окрашивания и анализа могут быть выполнять для изучения гистологических изменений и воспалительных реакций в желудочно-кишечных трактах после черепно-мозговой травмы.
