Общая цель этой процедуры - продемонстрировать хирургическое удаление яичек и яичников мышей быстрым, безопасным и эффективным способом. Мышиная орхиэктомия выполняется путем вентрального разреза по средней линии в мошоночном мешке, где яички изолируются и удаляются с последующим закрытием разреза кожи. Мышиная овариоэктомия выполняется путем дорсолатерального разреза брюшной полости, где яичник изолируется и удаляется, с последующим закрытием разреза кожи с возможностью повторить эту процедуру с другой стороны для выполнения двусторонней овариоэктомии.
Чтобы начать мышиную орхиэктомию, сначала запишите вес самца мыши и подготовьтесь к введению соответствующих обезболивающих и анестетиков в соответствии с рекомендациями вашего учреждения. После того, как мышь окажется под наркозом, нанесите на глаза смазывающий гель для глаз, чтобы защитить их от пересыхания во время процедуры. Прежде чем продолжить, убедитесь, что мышь находится в соответствующей плоскости анестезии, выполнив тест на реакцию на щипок ноги.
Далее побрейте паховую и мошоночную области мыши. Используя аппликатор с ватным наконечником, нанесите тонкий слой крема для депиляции на место операции и прилегающие участки. Через 30 секунд удалите крем для депиляции чистой марлевой губкой.
Переместите мышь в операционную область и убедитесь, что источник тепла доступен. Используйте мягкую клейкую ленту, чтобы приклеить лапки мыши к хирургическому коврику. Если яички поднялись в брюшную полость, слегка надавите на брюшную полость, чтобы помочь им опуститься.
Потрите кожу раствором Бетадина, начиная с центра над местом операции и легко двигаясь наружу к границе выбритой области. После скраба с Бетадином нанесите спиртовой скраб, выполненный аналогичным образом. Повторите этот процесс три раза, чтобы обеспечить надлежащую дезинфекцию кожи.
Накройте мышь хирургической простыней. Возьмитесь за кожу и сделайте разрез по средней линии длиной примерно от 1 до 1 1/2 сантиметра. Взявшись за границу разреза кожи, с помощью инструмента с тупым концом отделите кожу от подлежащих тканей.
Потратьте время на то, чтобы сделать это на боковой, верхней и нижней границах разреза. Затем изолируйте одно яичко, сдвинув разрез кожи прямо над ним. Используйте щипцы, чтобы захватить тонкую, прозрачную кремастерную мышцу, которая окружает яичко.
Идентификация правильной ткани может быть подтверждена ее прозрачностью и способностью двигаться независимо от подлежащих тканей, заключенных в ней. Затем надрезают кремастерную мышцу, сделав надрез в верхушке ткани. Наложите фиксирующий зажим на заднюю границу разрезанной кремастерной мышцы, чтобы удерживать натяжение ткани.
Используйте щипцы, чтобы захватить яичко и экстериоризировать его из оболочки кремастера. После того, как яичко выйдет, сверните ткань в сторону и локализуйте точку введения кремастера, которая соединяет кремастерную мышцу с яичком и придатком яичка на задней стороне яичка. Зажмите и разорвите эту ткань, чтобы разорвать это соединение.
Экстериоризируйте паховую жировую подушку, медленно вытаскивая ее. При этом следите за признаками кровотечения и следите за тем, чтобы не повредить кровеносные сосуды в процессе. Затем используйте пару фиксирующих гемостатов, чтобы пережать семенной канатик и кровеносные сосуды.
Удерживая небольшое напряжение на яичке, прижигают семенной канатик и кровеносные сосуды дистальнее зажима гемостата. Медленно отпустите гемостат и убедитесь, что культя ткани имеет хороший гемостаз и не продолжает кровоточить. Небольшое давление наружу на кремастерную мышцу позволит этой культе ткани втянуться в полость тела.
Соедините две стороны кремастерной мышцы вместе. Используя рассасывающиеся нити 4-0 или 5-0, наложите шов, чтобы соединить два конца кремастерной мышцы. После того, как шов будет завершен, обрежьте концы шовного материала до 1/2 сантиметра в длину.
Повторите этот процесс для другого яичка, сдвинув разрез кожи поверх другой стороны, и выполните те же шаги, что и для удаления первого яичка. После того, как оба яичка были удалены и обе стороны кремастера были зашиты, выверните кожу вверх и приготовьтесь наложить зажим на рану. Следите за тем, чтобы концы шва не попали в зажим для раны.
Теперь мышь готова к продолжению послеоперационного мониторинга. Чтобы подготовиться к овариоэктомии у мышей, взвесьте самку мыши и введите обезболивающее лекарство и анестезию в соответствии с рекомендациями вашего учреждения. Нанесите смазывающий гель для глаз и убедитесь, что мышь не реагирует на защемление пальца ноги.
Побрейте дорсолатеральные области спины мыши, чтобы подготовить место операции. С помощью аппликатора с ватным наконечником нанесите слой крема для депиляции на выбритый участок. Через 30 секунд снимите крем чистой марлевой губкой.
Перенесите мышь на хирургический коврик и убедитесь, что источник тепла доступен. Потрите кожу раствором Бетадина, начиная с центра и двигаясь к границе выбритой области. После этого протрите кожу 70%-ным спиртовым раствором, нанесенным аналогичным образом.
Повторите этот процесс в общей сложности три раза, чтобы обеспечить надлежащую дезинфекцию кожи. Спланируйте хирургический разрез в соответствии с письменным протоколом. Наложите хирургическую простыню на место операции мыши.
Возьмитесь за кожу щипцами и сделайте разрез на коже сантиметровым разрезом. Используйте инструмент с тупым наконечником или простую пару гемостатов, чтобы отделить кожу от подлежащих тканей. Потратьте время на то, чтобы сделать это на боковой, верхней и нижней границах разреза.
Возьмитесь за брюшную стенку и сделайте надрез 1/2 сантиметра. Используйте щипцы, чтобы найти яичник в разрезе, и потяните, чтобы сделать его экстериоральным. После того, как ткани идентифицированы, используйте пару гемостатов, чтобы пережать и раздавить дистальный рог матки.
Используйте вторую пару гемостатов или пару щипцов, чтобы зажать чуть дистальнее первого зажима. Удерживая нижний гемостат неподвижно, потяните верхний зажим вверх и в сторону от тела, чтобы выполнить размозжение и разрыв дистального рога матки. Медленно отпустите гемостат и следите за тем, чтобы из места операции не исходило чрезмерное кровотечение.
Соедините обе стороны брюшной стенки вместе и зашите разрез, используя один шов с рассасывающимся шовным материалом 4-0. После того, как шов будет закреплен, обрежьте концы шовного материала до 1/2 сантиметра в длину. Сведите обе стороны кожи вместе и приготовьтесь к установке зажима для раны.
Разрезая кожу, наложите зажим на рану на место разреза. Теперь мышь готова к продолжению послеоперационного мониторинга. Задокументируйте дату и время процедуры, а также прием анальгетика в соответствии с рекомендациями вашего учреждения.
После того, как мышь перенесла хирургическую орхиэктомию или овариоэктомию, переведите ее в чистую, отапливаемую клетку. Как только мышь вернется в положение лежачей грудины, поместите ее в чистую клетку и обеспечьте ей влажный корм и воду. Во время выздоровления часто проверяйте место операции мыши и ищите любые признаки инфекции или кровотечения.
Чтобы не повредить зажим для раны, удалите все места обитания иглу грызунов из клетки мыши для овариоэктомии в течение одной недели после операции. Через 14 дней снимите раневые зажимы с кожи мыши. В продемонстрированном протоколе подробно описано, как выполнить орхиэктомию и овариоэктомию у мыши для создания модели с истощением половых гормонов.
Это включает в себя удаление яичек через разрез по средней линии в мошонке с последующей экстериоризацией яичек и разрывом семенного канатика в кровеносных сосудах, что приводит к удалению яичка, придатка яичка и паховых жировых пакетов. Хирургическая овариоэктомия может быть выполнена путем дорсолатерального разреза на спинке и экстериоризации яичника, яйцевода и дистального отдела рога матки. Далее следует отсечение дистального рога матки, приводящее к удалению яичника и яйцевода.
Тщательная хирургическая техника и надлежащий послеоперационный уход приведут к хорошо заживлению хирургических участков. Эти хирургические процедуры могут быть дополнительно подтверждены путем анализа уровня гормонов в образцах сыворотки крови мышей через неделю после орхиэктомии. Овариоэктомия может быть подтверждена наблюдением атрофии матки после удаления яичников.
Этот протокол позволяет быстро и эффективно хирургически удалять яичники и яички у мышей для создания модели, истощенной половыми гормонами. Это может иметь множество применений для изучения того, как истощение этих гормонов влияет на различные органы и физиологические процессы.
