Эта работа была поддержана грантами NIH R01 HL109420 для WM и AHA 9320033N к LY.

Мыши и аллотрансплантата сингенную модели трансплантации трансплантат Все исследования на животных были одобрены Институциональные уходу и использованию животных комитета из Йельского университета. Для аллотрансплантата модели сегментов грудной аорты от самцов 4-5 недельных WT (C57BL/6J) или IFN-Гд-KO мышей вставлены в брюшную аорту женского получатель, 8-12 недельных WT использованием конца в конец микрохирургической техники анастомоза (см. следующий право). Для сингенных модель трансплантата сегментов грудной аорты от мужских, 4-5 недельных мышей WT были вставлены в брюшную аорту мужского, 8-12 недельных IFN-γR1-KO использованием конец-в-конец микрохирургического анастомоза техники. Через 1 неделю после операции животных инокулировали внутривенно Ad5.CMV-мышь IFN-γ или Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene) в концентрации 1 × 10 9 PFU. Сыворотки мышей IFN-γ уровни были измерены с помощью ELISA (eBioscience) на 1 и 5 недель после аденовирус управления. Некоторые животные получали BrdU(Sigma-Aldrich) в дозе 100 мг / кг подкожно за 2 недели до жертвы. Впритык микрохирургической техники анастомоза (Видео будут приняты для этой части): 1. Процедура Донор <ol><li> Обезболить донора мышей с внутрибрюшинной инъекции кетамина (50 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг). </li><li> После обеспечения адекватной анестезии, поместите доноров мышам под операционным микроскопом в режиме x8-30 увеличение на подносе в положении лежа на спине, а также использовать йод Prep Pad Pad Алкоголь и подготовки к груди подготовки стен. </li><li> Надрезать переднюю грудную стенку через ребра и диафрагмы, чтобы открыть сердце. </li><li> Открытие правое предсердие, вводят 10 мл гепаринизированной (100 ед / мл), солевым раствором в левый желудочек, чтобы смыть мышей с использованием 10-мл шприц с 25-иглы. </li><li> Резекцию сердце и легкие, чтобы разоблачить всю длину грудной аорты. </li><li> Рассеките грудной аорты тщательно, чтобы свести к минимуму прямой травмы, Whilэлектронной выявления, перевязывать и разделить пиломатериалов веток с помощью 11-0 шва рядом с аортой. </li><li> Как только грудной аорты является свободным от окружающих тканей, акциз всей грудной аорты для трансплантации. </li><li> Промыть срез доноров аорты с гепарином (100 ЕД / мл) солевой раствор, и сохранить его в том же растворе на льду (до 6 ч) до трансплантации. </li></ol> 2. Получатель процедуры <ol><li> Введите мышей-реципиентов с ф кетопрофен (5 мг / кг) для обезболивания и thenanesthetize мышей внутрибрюшинно кетамина (50 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг). Получателем мыши глубокой анестезии в течение 10 минут с продолжительностью 60-90 мин. Во время операции, уровень анестезии оценивается каждые 15 мин, зажимая передней брюшной стенки или ноги с помощью щипцов. Если животное реагирует на вредные стимулы в любое время во время операции, дополнительную дозу кетамина и ксилазина (1/4 или 1/3 первоначальной дозы) будет вводиться подкожно или внутримышечно </li><li> После обеспечения адекватной анестезии, сбрить мех в передней брюшной стенке с помощью электрической бритвы, очистите кожу с помощью йода Prep Pad и алкоголь Prep Pad, закрывала глаза использовании глазной мази. Во время операции, следующие асептических методов будет использоваться для операций, включая очистку операционный стол с 10% отбеливатель, носить стерильные перчатки с использованием стерильных микрохирургических инструментов (стерилизовали паром приборы для начала операции, а затем горячей стеклянных шариков стерилизованные инструментов между несколькими операции и т.д.). </li><li> Поместите мышей-реципиентов под операционным микроскопом при увеличении в X8-30 на подносе в положении лежа на спине. </li><li> Надрезать брюшной стенки по срединной линии от xyphoid к лобку, и распространять брюшную стенку друг от друга с помощью микро-втягивающим, чтобы разоблачить брюшной полости. </li><li> Уберите кишечник сверху и оберните марлей смоченной физиологическим раствором. Мышей-реципиентов становятся охлаждается потери за слухT через кишечник вовне. Важно поддерживать животное тепло. Тем не менее, отопительной панели не используется во время операции, как скромные гипотермии приносит пользу в предотвращении травмы позвоночника во время окклюзии аортального кровотока, а также существует неэффективно теплообмена с отсутствием притока крови к нижней половине тела мышей. </li><li> Переместить репродуктивных органов книзу, оберните области живота мышей-реципиентов с солевым раствором смоченную марлю, и использовать его, чтобы втянуть прямую кишку, чтобы правая сторона брюшной полости. Облученных тканей орошаются периодически с физиологическим раствором при пересадке. </li><li> Рассеките прямо сегмент инфраренального аорты между почечный сосуд проксимально и дистально бифуркации аорты и отделить от нижней полой вены (НПВ) тщательно. </li><li> Выявление и перевязывать все мелкие ветви, происходящих из данного сегмента брюшной аорты использованием 11-0 Полиамид мононить шва. </li><li> Крест-зажим изолированный сегментbdominal аорты с помощью двух зажимов сосудистой примерно 5 мм друг от друга, по одному на каждом конце. </li><li> Разрез брюшной аорты между зажимами острыми микро-ножницы для создания анастомоза сайтов. </li><li> Резекцию небольшой сегмент брюшной аорты (до 0,4 мм в длину) из одного отрезанного конца пересеченной аорты получателя для размещения трансплантата аорты донора. </li><li> Промойте сегментов аорты между зажимами использованием гепаринизированной солевой раствор для удаления остатков крови. Аорты сегментов между зажимами и донор трансплантата аорты орошают периодически с гепарином (100 ед / мл), солевым раствором (до 40 мл / кг) в течение анастомоза. </li><li> Разрез обе стороны доноров аорты с острыми микро-ножницы, чтобы создать сегмент трансплантата 2,5 мм в длину для трансплантации. </li><li> Поместите донор трансплантата аорты в ортотопической положение, анастомозирующих донор трансплантата проксимальный и дистальный конец проксимальный и дистальный конец сокращения получателя брюшной аорты, соответственно, на конец тO-конца узора с помощью 11-0 Полиамид мононить шва. </li><li> Для непрерывного швов, место пребывания швов на 3 и 9 часов позиции первых. Между двумя пребывания швы с каждой стороны трансплантата, анастомозируют как кромки в 3-4 строчек с использованием работает швы, и свяжите работает швы, чтобы остаться швы с двойной узел. Поскольку оба слоя закрытие непрерывны, риск расхождение увеличивается. Донор трансплантата аорты должна быть соответствующей длины для подключения проксимальный и дистальный конец сокращения получателя из брюшной аорты. </li><li> Для узловыми швами, построить четыре анастомоза на 3 и 9 часов позиции в обе стороны трансплантата во-первых, и анастомозируют как кромки в 3-4 стежками между двумя пребывания швы с каждой стороны трансплантата. </li><li> Отпустите зажим дистальных чтобы ретроградный кровоток в трансплантат, определить кровотечения сайтов и сделать дополнительные стежки в течение 3 минут. </li><li> Убедившись удовлетворительное гемостаза, отпустите зажим проксимальных. </li><li> Подтверждение шунта наличием энергичном пульсации трансплантата и проксимальный соседним сегментом родной брюшной аорты, в частности в дистальном смежный сегмент брюшной аорты и нижней брыжеечной артерии. Рассмотрим тромбоза анастомоза сайтов, если пульсации уменьшаются в течение нескольких минут после восстановления кровотока. </li><li> Возврат кишечника в брюшную полость. </li><li> Шовный закрыть брюшную стенку использованием 5-0 нейлоновой ниткой в ​​мышечный слой и слой кожи, соответственно. </li><li> Поместите мышей-реципиентов в чистую клетку на вершине грелку, и подождать 1-2 ч в течение мышей в сознание и восстановления после анестезии. Это важно для поддержания адекватного тепло животного во время восстановления. Держите мышей в теплой и сухой клетке перед животным пробуждение от наркоза. </li><li> Оценка двигательной функции задних конечностей после выздоровления мышей, и снова на второй день. Успешная операция по трансплантации будет подтверждена ЯF не дисфункцию задних конечностей не наблюдается мышей-реципиентов на второй день. </li><li> Администрирование мышей-реципиентов с кетопрофен в питьевой воде (5 мг / кг / сут = 27 мкг / мл в питьевой воде) в течение 48 часов. Если получатель мышей страдают от боли необлегченный по послеоперационном анальгетики, о чем свидетельствует потере подвижности, неспособность ухаживать, аномальный пучки положение, и т.д., они будут умерщвлены. Животные будут умерщвлены в предопределенные конечные точки после 1-60 дней. </li></ol> Привитые анализа Артерии трансплантатов аллотрансплантата были закуплены в течение 4 недель и трансплантатов у сингенных модель трансплантата были 6 недель после операции (5 недель после вирусной инфекции) и анализировали стандартными гистологическими методами Elastica-ван Гизон (EVG) окрашивания гематоксилином и эозином (HE) окрашивания и иммунофлюоресценции окрашивания. Снимки выполнены при помощи иммунофлюоресценции системы микроскопа (Zeiss). Сотовые подсчета ядер, окруженных положительными Иммуноокрашивание выполнятьЭд под большим увеличением и в среднем от 5 сечений для каждого трансплантата. Привитые измерения площади просвета (в эндотелий), интимы (между эндотелием и внутренней упругой пластинки, IEL), носитель (между IEL и внешней эластичной оболочкой, EEL), толщина стенки (между эндотелием и внешней эластичной оболочкой) и всего судна (в пределах угорь) были рассчитаны из 5 последовательных сечений, 150 мкм друг от друга для каждого трансплантата с использованием компьютерного анализа изображений и NIH Image 1.60 ( <a href="http://rsbweb.nih.gov/nih-image/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/nih-image</a> ). Статистический анализ Все данные представлены как среднее ± SEM. Двусторонними, парные т тесты и двусторонней ANOVA анализ проводили с помощью программы Prism программное обеспечение (GraphPad Software). Различия с Р &lt;0,05 считались указывают статистическую значимость.

<ol>
	<li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease.">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transplant. 24, 2003-2014 (2005).</li><li>Koulack, J., McAlister, V. C., MacAulay, M. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+minor+histocompatibility+antigens+in+the+development+of+allograft+arteriosclerosis.">Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 80, 273-277 (1996).</li><li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection.">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li><li>Lorber, M. I., Wilson, J. H., Robert, M. E., Schechner, J. S., Kirkiles, N., Qian, H. Y., Askenase, P. W., Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+allogeneic+vascular+rejection+after+arterial+transplantation+and+peripheral+lymphoid+reconstitution+in+severe+combined+immunodeficient+mice.">Human allogeneic vascular rejection after arterial transplantation and peripheral lymphoid reconstitution in severe combined immunodeficient mice.</a> Transplantation. 67, 897-903 (1999).</li><li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart.">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allograft+arteriopathy:+pathogenesis+update.">Allograft arteriopathy: pathogenesis update.</a> Cardiovasc. Pathol. 13, 33-40 (2004).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+vascular+disease:+immune+response+meets+the+vessel+wall.">Graft vascular disease: immune response meets the vessel wall.</a> Annu Rev Pathol. 4, 19-47 (2009).</li><li>Nagano, H., Libby, P., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Stinn, J. L., Becker, G., Tilney, N. L., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+arteriosclerosis+after+T-cell-mediated+injury+in+transplanted+mouse+hearts:+role+of+interferon-gamma.">Coronary arteriosclerosis after T-cell-mediated injury in transplanted mouse hearts: role of interferon-gamma.</a> Am. J. Pathol. 152, 1187-1197 (1998).</li><li>Nagano, H., Mitchell, R. N., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Tilney, N. L., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+deficiency+prevents+coronary+arteriosclerosis+but+not+myocardial+rejection+in+transplanted+mouse+hearts.">Interferon-gamma deficiency prevents coronary arteriosclerosis but not myocardial rejection in transplanted mouse hearts.</a> J. Clin. Invest. 100, 550-557 (1997).</li><li>Raisanen-Sokolowski, A., Glysing-Jensen, T., Koglin, J., Russell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+transplant+arteriosclerosis+in+murine+cardiac+allografts+placed+in+interferon-gamma+knockout+recipients.">Reduced transplant arteriosclerosis in murine cardiac allografts placed in interferon-gamma knockout recipients.</a> Am. J. Pathol. 152, 359-365 (1998).</li><li>Salomon, R. N., Hughes, C. C. W., Schoen, F. J., Payne, D. D., Pober, J. S., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Coronary+Transplantation-Associated+Arteriosclerosis+-+Evidence+for+a+Chronic+Immune+Reaction+to+Activated+Graft+Endothelial+Cells.">Human Coronary Transplantation-Associated Arteriosclerosis - Evidence for a Chronic Immune Reaction to Activated Graft Endothelial Cells.</a> Am. J. Pathol. 138, 791-798 (1991).</li><li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., Ellis, P. S., Chandler, P. R., Simpson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+some+females+reject+males?+The+molecular+basis+for+male-specific+graft+rejection.">Why do some females reject males? The molecular basis for male-specific graft rejection.</a> J. Mol. Med. 75, 103-114 (1997).</li><li>Shimizu, K., Sugiyama, S., Aikawa, M., Fukumoto, Y., Rabkin, E., Libby, P., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+bone-marrow+cells+are+a+source+of+donor+intimal+smooth-+muscle-like+cells+in+murine+aortic+transplant+arteriopathy.">Host bone-marrow cells are a source of donor intimal smooth- muscle-like cells in murine aortic transplant arteriopathy.</a> Nat. Med. 7, 738-741 (2001).</li><li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis.">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circ. Res. 100, 622-632 (2007).</li><li>Tellides, G., Tereb, D. A., Kirkiles-Smith, N. C., Kim, R. W., Wilson, J. H., Schechner, J. S., Lorber, M. I., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes.">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li><li>Vassalli, G., Gallino, A., Weis, M., von Scheidt, W., Kappenberger, L., von Segesser, L. K., Goy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alloimmunity+and+nonimmunologic+risk+factors+in+cardiac+allograft+vasculopathy.">Alloimmunity and nonimmunologic risk factors in cardiac allograft vasculopathy.</a> Eur. Heart J. 24, 1180-1188 (2003).</li><li>Wang, Y., Bai, Y., Qin, L., Zhang, P., Yi, T., Teesdale, S. A., Zhao, L., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation.">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ. Res. 101, 560-569 (2007).</li><li>Wang, Y., Burns, W. R., Tang, P. C., Yi, T., Schechner, J. S., Zerwes, H. G., Sessa, W. C., Lorber, M. I., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+plays+a+nonredundant+role+in+mediating+T+cell-dependent+outward+vascular+remodeling+of+allogeneic+human+coronary+arteries.">Interferon-gamma plays a nonredundant role in mediating T cell-dependent outward vascular remodeling of allogeneic human coronary arteries.</a> Faseb J. 18, 606-608 (2004).</li><li>Yacoub-Youssef, H., Marcheix, B., Calise, D., Thiers, J. C., Benoist, H., Blaes, N., Segui, B., Dambrin, C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+vascular+rejection:+histologic+comparison+between+two+murine+experimental+models.">Chronic vascular rejection: histologic comparison between two murine experimental models.</a> Transplant. Proc. 37, 2886-2887 (2005).</li><li>Yokota, T., Shimokado, K., Kosaka, C., Sasaguri, T., Masuda, J., Ogata, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogenic+activity+of+interferon+gamma+on+growth-arrested+human+vascular+smooth+muscle+cells.">Mitogenic activity of interferon gamma on growth-arrested human vascular smooth muscle cells.</a> Arterioscler. Thromb. 12, 1393-1401 (1992).</li><li>Yu, L., Qin, L., Zhang, H., He, Y., Chen, H., Pober, J., Tellides, G., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+IFN-&#947;-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion.">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting IFN-&#947;-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Cir. Res. 109, 418-427 (2011).</li></ol>

Нам нечего раскрывать.

Описанные протоколы ориентированы на мышиных моделях GA. Процедуры могут быть применены к другим трансплантат модели трансплантации. Эти модели включают гуманизированные ксенотрансплантата (т.е. человеку сегментов коронарных артерий вставлены в инфра-почечной аорты иммунодефиц...

Привитые arteriosclerois (GA), также называемый аллотрансплантата васкулопатию, это патологическое поражение, которое развивается в течение месяцев и даже лет в пересаженных органов характеризуется диффузной, окружные стеноз всего дерева сосудистого трансплантата 7. На ранних стадиях может привести к эксцентричным и координационных стеноза, которые являются более очевидными в артериях, таким образом, более напоминающий стеноза видели в обычных атеросклероза. Просвет потери трансплантата результаты сосуды от интимных расширение за счет инфильтрации хост Т-клеток и макрофагов и особенно накопление внеклеточного матрикса и гладкие мышцы-подобных клеток происходит от трансплантата, хоста или оба 5, 13, 19, которые неадекватно компенсироваться по внешнему ремоделирования сосудов. В сердечных трансплантатов, наиболее клинически значимыми поражениями являются те, в эпикардиальной интрамиокардиальной и коронарных артерий. В конечном счете, GA коронарных артерий вызывает ишемические сердечной недостаточности. ГА является основной причиной сердечных конце грКормовая потерь. Стенозами GA остановиться на линии шва, сильно причастности хозяина на трансплантат аллоантигенам в патогенезе и ведущих нам классифицировать GA как форма хронического отторжения 3. Тем не менее, другие формы повреждения артерий может увеличить риск Г.А., либо за счет увеличения чистого бремя травм или усилением и / или модулирования аллоимунный ответа. Эндотелиальных клеток (ЭК) подкладка артерий трансплантата сохраняется в человеческой GA и самый поверхностный регионах, прилегающих к интиму подкладка ЕС является местом наиболее сильно проникли хозяина полученных IFN-γ-производители Т-клеток и макрофагов, 11, в некоторых пациентов GA связан с развитием конкретных доноров аллоантитела, которые связываются с трансплантат EC 16, но сосуды не наблюдается заметных признаков фибриноидный некроз, характерный острый антитело-опосредованной отказ 11. Наиболее важным компонентом патогенеза ГАпролиферации гладких мышц-подобных клеток в интиме, если этот процесс можно остановить, Джорджия вряд ли будет прогрессировать. Предыдущая работа из нашей группы показал, что из человека интим сегментов коронарных артерий вмешался в инфра-почечная аорты иммунодефицитных мышей расширяться в ответ на восприимчиво переданы Т-клетках человека аллогенной к артерии донора и что этот процесс может быть запрещена путем нейтрализации человеческого IFN- γ 18. Кроме того экзогенный человеческого IFN-γ может привести интимных (и медиальной) клеток гладких мышц сосудов (VSMC) пролиферации этих артериальных трансплантатов в отсутствие Т-клетки человека 15, 17. (Важно отметить, что человека и мыши IFN-γ не пересекают видов, исключая косвенное воздействие на мышей хозяин в этой экспериментальной системе.) Эти гуманизированными мышиные модели имеют преимущество сводный Т-клеток человека / сосудистые взаимодействия клеток и интимную поражения в основном состоит из человеческих (т.е. трансплантат производных), клеткикак было отмечено в клинических образцах, но они полностью не повторять от клинической ситуации, потому что они игнорируют роль хоста макрофагов и, возможно, другие типы клеток, участвующих в клинических поражений трансплантации. Традиционной модели мыши этого процесса теоретически может решить эту проблему, в дополнение к ограничениям гуманизированного модель с привлечением полной иммунной системы хозяина и предоставление дополнительных преимущество, что позволяет сила мыши генетические подходы должны применяться к GA. Два наиболее широко используемых моделей мыши включать гетеротопической трансплантации сердца и трансплантации ортотопический артерии 1. Поражений, которые развиваются в артериях гетеротопической трансплантатов сердца в значительной степени состоят из клеток хозяина, вероятно костномозгового происхождения, в то время интимной клетки артерий в человеческих трансплантатов сердца преимущественно привитых происхождения 5, 13, 19. Это значительное различие, которое привело нас к разработке альтернативных моделей мыши. Взаиморасположениемышь аорты от одного штамма в другой штамма-реципиента мышь еще более ограничен в качестве модели хронического отторжения в организме человека, так как острый клеточный ответ об отклонении в этой модели мыши полностью устраняет все донор полученные клетки сосудов из привитого течение двух-трех 19 недель. Следовательно, последующие изменения заметны и в сегменте вмешался судно исключительно ответа клеток-хозяев, которые заселили decellularized судна эшафот, создавая очень искусственной ситуации ограниченное значение в качестве модели для изменения в сосудах трансплантата, которые происходят в клинике. Недавно мы разработали две новые модели мыши, чтобы обойти эти проблемы 21. Первая модель предполагает вмешательство судна сегмент от самца мыши в женский получателем же инбредной линии (C57BL/6J). Вторая модель включает в себя промежуточные артерии сегмента от дикого типа донора мыши C57BL/6J в хозяина мыши той же линии, что и пол не хватает RECeptor для IFN-γ (IFN-Гд-KO) с последующим введением мышь IFN-γ (поставляются инфекция печени мышей с аденовирусной вектора. Здесь мы описываем подробные протоколы и преимущества наших моделей мышей GA.

<table border="1" >
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of the Reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>C57BL/6J (H-2b)</td>
 <td>Jackson Laboratories 
 (Bar Harbor, ME)</td>
 <td>000664</td>
 <td>Donor (5 weeks) 
 Recipient (8-12weeks)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine Hydrochloride Injection </td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-2053</td>
 <td>Storage Solution(50 mg/ml) 
 Working Solution(5 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td> Xylazine Sterile Solution</td>
 <td>Lloyd Inc.</td>
 <td>NADA# 139-236</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution(1 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketoprofen</td>
 <td>Fort Dodge Animal Health</td>
 <td>NDC 0856-4396-01</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution-oral 
 (0.027 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heparin Sodium</td>
 <td>Sagent Pharmaceticals</td>
 <td>NDC 25021-400</td>
 <td>Storage Solution(1000 U/ml) 
 Working Solution(100 U/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Saline solution (Sterile 0.9% Sodium Chloride)</td>
 <td>CareFusion</td>
 <td>AL4109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.9% Sodium Chloride Injection</td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-4888-10</td>
 <td>To prepare the anesthetic </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petrolatum Ophthalmic Ointment </td>
 <td>Dechra Veterinary Products</td>
 <td>NDC 17033-211-38</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iodine Prep Pads </td>
 <td>Triad Disposables, Inc.</td>
 <td>NDC 50730-3201-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alcohol Prep Pads</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>NDC 68599-5805-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MZ95</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Scissors</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5693</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Spring Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>15009-08</td>
 <td>To transect the aorta of donor or recipient </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Extra Narrow Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>14088-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle Holder/Forceps</td>
 <td>MICRINS</td>
 <td>MI1542</td>
 <td>To hold the needle</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fine Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>11254-20</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11251-35</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Standard Pattern Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11000-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>13011-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>LANCASTER Eye Speculum</td>
 <td>Zepf Medical Instruments</td>
 <td>42-1209-07</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Vascular Clip</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-6472</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Clip Applying Forceps With Lock</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5440</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Polyamide Monofilament Suture</td>
 <td>AROSurgical Instruments Corporation</td>
 <td>Cat #T4A10Q07</td>
 <td>10-0 suture, Needle=70 microns</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Monofilament Nylon Suture</td>
 <td>Syneture 
 (Covidien)</td>
 <td>SN-1956</td>
 <td>6-0 suture</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Non-Woven Songes</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>Reorder No. 94442000</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309659</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>3 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309657</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309604</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18G 1 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305196</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>25G 7/8, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305124</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>27G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hearting Pad</td>
 <td>Sunbeam</td>
 <td>Z-1228-001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trimmer</td>
 <td>Wahl</td>
 <td>9854-500</td>
 <td></td>
 </tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>Table 2. Specific reagents and equipment.</td>
</tr>
 </tbody>
</table>

mouse models for graft arteriosclerosis

Привитые arteriosclerois (GA), также называемый аллотрансплантата васкулопатию, это патологическое поражение, которое развивается в течение месяцев и даже лет в пересаженных органов характеризуется диффузной, окружные стеноз всего дерева сосудистого трансплантата. Наиболее важным компонентом патогенеза GA является распространение гладких мышц-подобных клеток в интиме. Когда человек сегментов коронарных артерий вставлен в инфра-почечной аорты иммунодефицитных мышей, интим может расширяться в ответ на восприимчиво переданы Т-клетки человека аллогенной к донорской артерии или экзогенный человеческого IFN-γ в отсутствие Т-клетках человека. Взаиморасположение мышь аорты от одного штамма в другой штамма-реципиента мышь ограничена в качестве модели хронического отторжения в организме человека, так как острый клеточный ответ об отклонении в этой модели мыши полностью устраняет все доноров полученные клетки сосудов из привитого течение двух-трех недель. Недавно мы разработали два новых мУз модели, чтобы обойти эти проблемы. Первая модель предполагает вмешательство судна сегмент от самца мыши в женский получателем же инбредной линии (C57BL/6J). Отторжения трансплантата в этом случае направлено только против минорных антигенов гистосовместимости, кодируемый хромосомой Y (в настоящее время в мужской, но не женщин) и реакции отторжения, который наступает достаточно ленивы, чтобы сохранить доноров полученные клетки гладких мышц в течение нескольких недель. Вторая модель включает в себя промежуточные артерии сегмент от дикого типа донор мыши C57BL/6J в хозяина мыши той же самой линии и пол, который испытывает недостаток рецептора IFN-γ с последующим введением мышь IFN-γ (доставляется через заражение мышей печень с аденовирусной вектора. Там нет отказа в этом случае, как донора и реципиента мышей той же линии и пола, но донором гладкомышечных клеток размножаться в ответ на цитокины хозяина в то время как клетки, полученные, не имея рецепторовэтого цитокина, не реагируют. По обратным скрещиванием дополнительных генетических изменений в сосуд доноров, обе модели могут быть использованы для оценки влияния специфических генов на прогрессирование ГА. Здесь мы описываем подробные протоколы для наших мышиных моделях GA.

Мышь аллотрансплантата атеросклероза (GA) модель: В этой модели мужской аорты донора пересаживается в женский род получателя, так что хозяин аллореактивных вызывает опосредованный Т-клетками аллоиммунная ответов в отношении несовершеннолетнего антигена Y (мужской конкретных...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models for Graft Arteriosclerosis at JoVE.com

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

Мы описываем наши протоколы для мыши трансплантата arteriosclerois (GA) моделей, которые включают вмешательство сегменте судна мышь в получателем же инбредной линии. По обратным скрещиванием дополнительных генетических изменений в сосуд донора, модель может оценить влияние специфических генов в GA.

Мышиные модели для взяток Атеросклероз

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K Views.  Yale University School of Medicine. Мы описываем наши протоколы для мыши трансплантата arteriosclerois (GA) моделей, которые включают вмешательство сегменте судна мышь в получателем же инбредной линии. По обратным скрещиванием дополнительных генетических изменений в сосуд донора, модель может оценить...

Video: Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

MRI and PET in Mouse Models of Myocardial Infarction

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ideal model for testing novel therapeutic strategies.
In vivo magnetic resonance imaging (MRI) gives excellent views of the heart noninvasively with clear anatomical detail, which can be used for accurate functional assessment. Contrast agents can provide basic measures of tissue viability but these are nonspecific. Positron emission tomography (PET) is a complementary technique that is highly specific for molecular imaging, but lacks the anatomical detail of MRI. Used together, these techniques offer a sensitive, specific and quantitative tool for the assessment of the heart in disease and recovery following treatment.
In this paper we explain how these methods are carried out in mouse models of acute myocardial infarction. The procedures described here were designed for the assessment of putative protective drug treatments. We used MRI to measure systolic function and infarct size with late gadolinium enhancement, and PET with fluorodeoxyglucose (FDG) to assess metabolic function in the infarcted region. The paper focuses on practical aspects such as slice planning, accurate gating, drug delivery, segmentation of images, and multimodal coregistration. The methods presented here achieve good repeatability and accuracy maintaining a high throughput.

We describe how to perform MRI and PET imaging of the mouse heart. The protocol is tailored to assess treatment efficacy in models of myocardial infarction and heart failure.

МРТ и ПЭТ в мыши модели инфаркта миокарда

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ...

Production of Apolipoprotein C-III Knockout Rabbits using Zinc Finger Nucleases

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins (HDL). It has been recognized that high levels of plasma ApoCIII constitutea risk factor for cardiovascular diseases (CVD). Elevated plasma ApoCIII level often correlates with insulin resistance, obesity, and hypertriglyceridemia. Invaluable knowledge on the roles of ApoCIIIin lipid metabolisms and CVD has been obtained from transgenic mouse models including ApoCIII knockout (KO) mice; however, it is noted that the metabolism of lipoprotein in mice is different from that of humans in many aspects. It is not known until now whether elevated plasma ApoCIII is directly atherogenic. We worked to develop ApoCIII KO rabbits in the present study based on the hypothesis that rabbits can serve as a reasonablemodelfor studying human lipid metabolism and atherosclerosis. Zinc finger nuclease (ZFN) sets targeting rabbit ApoCIIIgene were subjected to in vitro validation prior to embryo microinjection. The mRNA was injected to the cytoplasm of 35 rabbit pronuclear stage embryos, and evaluated the mutation rates at the blastocyst state. Of sixteen blastocysts that were assayed, a satisfactory 50% mutation rate (8/16) at the targeting site was achieved, supporting the use of Set 1 for in vivo experiments. Next, we microinjected 145 embryos with Set 1 mRNA, and transferred these embryos to 7 recipient rabbits. After 30 days gestation, 21 kits were born, out of which five were confirmed as ApoCIII KO rabbits after PCR sequencing assays. The KO animal rate (#KO kits/total born) was 23.8%. The overall production efficiency is 3.4% (5 kits/145 embryos transferred). The present work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits. These ApoCIII KO rabbits are novel resources to study the roles of ApoCIII in lipid metabolisms.

Recent development in gene targeting tools makes production of knockout (KO) rabbits possible. In the present work, we generated five Apolipoprotein (Apo) C-III KO rabbits using Zinc Finger Nucleases (ZFN). This work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits.

Производство аполипопротеина C-III Knockout Кролики использованием цинковый палец нуклеаз

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

Имплантация нижней полой вены вмешательство трансплантат в мышиной модели

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Мышь трансплантации почки: Модели аллотрансплантата Отказ

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal systems. HFUS has the ability to detect structures as small as 30 &#181;m, a property that has been utilized for visualizing superficial lymph nodes in rodents in brightness (B)-mode. Combining power Doppler with B-mode imaging allows for measuring circulatory blood flow within lymph nodes and other organs. While HFUS has been utilized for lymph node imaging in a number of mouse&#160; model systems, a detailed protocol describing HFUS imaging and characterization of the cervical lymph nodes in mice has not been reported. Here, we show that HFUS can be adapted to detect and characterize cervical lymph nodes in mice. Combined B-mode and power Doppler imaging can be used to detect increases in blood flow in immunologically-enlarged cervical nodes. We also describe the use of B-mode imaging to conduct fine needle biopsies of cervical lymph nodes to retrieve lymph tissue for histological&#160; analysis. Finally, software-aided steps are described to calculate changes in lymph node volume and to visualize changes in lymph node morphology following image reconstruction. The ability to visually monitor changes in cervical lymph node biology over time provides a simple and powerful technique for the non-invasive monitoring of cervical lymph node alterations in preclinical mouse models of oral cavity disease.

This protocol describes the application of high-frequency ultrasound (HFUS) for imaging mouse cervical lymph nodes. This technique optimizes visualization and quantification of cervical lymph node morphology, volume and blood flow. Image-guided biopsy of cervical lymph nodes and processing of lymph tissue for histological evaluation is also demonstrated.

Высокочастотный ультразвуковой визуализации мыши шейных лимфатических узлов

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune system of the recipient causes damage of the arterial wall and dysfunction of endothelial cells and smooth muscle cells. This triggers a pathological repair response that is characterized by intimal thickening and luminal occlusion. Understanding the mechanisms by which the immune system causes vasculature rejection and TA may inform the development of novel ways to manage graft failure. Here, we describe a mouse aortic interposition model that can be used to study the pathogenic mechanisms of vascular rejection and TA. The model involves grafting of an aortic segment from a donor animal into an allogeneic recipient. Rejection of the artery segment involves alloimmune reactions and results in arterial changes that resemble vascular rejection. The basic technical approach we describe can be used with different mouse strains and targeted interventions to answer specific questions related to vascular rejection and TA.

We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure.

Мышь Модель аллоиммунная-индуцированной сосудистой неприятие и трансплантации атеросклероз

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies have suggested that nerves may also modulate skin disorders including atopic dermatitis, psoriasis and cancer. Here, we describe protocols for testing the requirement for nerves in maintaining a cutaneous mechanosensory organ, the touch dome (TD). Specifically, we discuss methods for genetically labeling, harvesting and visualizing TDs by whole-mount staining, and for performing unilateral surgical denervation on mouse dorsal back skin. Together, these approaches can be used to directly compare TD morphology and gene expression in denervated as well as sham-operated skin from the same animal. These methods can also be readily adapted to examine the requirement for nerves in mouse models of skin pathology. Finally, the ability to repeatedly sample the skin provides an opportunity to monitor disease progression at different stages and times after initiation.

This article includes detailed protocols for genetic labeling of mouse skin, surgical denervation, skin biopsy and visualizing labeled epithelia by whole-mount &#946;-galactosidase staining. These methods can be used to test the requirement for nerves in mouse models of normal and pathological skin.

Кожный Хирургическая Денервация: Метод для тестирования Требование нервах у мышей моделях болезни кожи

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

Жила интерпозиция Модель: A Подходит модель для изучения шунтирование проходимость

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Использование химической биопсии для оценки качества трансплантата

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

Near Infrared Photoimmunotherapy for Mouse Models of Pleural Dissemination

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination model can be used for the evaluation of treatment methods for intrathoracic diseases such as lung cancer or malignant pleural mesothelioma.
Near-infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT) is a recently developed cancer treatment strategy that combines the specificity of tumor-targeting antibodies with toxicity caused by a photoabsorber (IR700Dye) after exposure to NIR light. The efficacy of NIR-PIT has been reported using various antibodies; however, only a few reports have shown the therapeutic effect of this strategy in an orthotopic model. In the present study, we demonstrate an example of efficacy evaluation of the pleural disseminated lung cancer model, which was treated using NIR-PIT.

Near-infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT) is an emerging cancer therapeutic strategy that utilizes an antibody-photoabsorber (IR700Dye) conjugate and NIR light to destroy cancer cells. Here, we present a method to evaluate the antitumor effect of NIR-PIT in a mouse model of pleural disseminated lung cancer and malignant pleural mesothelioma using bioluminescence imaging.

Фотоиммунотерапия в ближнем инфракрасном диапазоне для мышиных моделей плевральной диссеминиции

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination ...