Экспериментальные и клинические данные показывают, что реперфузия печеночной ишемии может увеличить образование метастатических очагов путем распространения раковых клеток и роста микрометастатического заболевания. Эта воспроизводимая модель мурина позволяет проучить как установление метастазов, так и рост уже существующей опухоли в печени. Хирургия печени, кровотечение и септический шок все связаны с реперфузией печени и может повлиять на рост метастатического заболевания.
Эти методы позволяют изучать это явление в попытке лучше диагностировать и предотвратить пагубное влияние ишемии reperfusion на рост опухоли в клинических условиях. После подтверждения отсутствия реакции на щепотку ноша в анестезированным от восьми до 12-недельного самца C57 черная 6 мышь, дезинфицировать открытые брюшной стенки кожи с povidone йод скраб и использовать зубчатые щипец, чтобы поднять кожу. Используя хирургический скальпель, сделайте разрез средней линии кожи и поднимите мышцы живота и брюшной полости, чтобы облегчить создание трехсемейного разреза средней линии, чтобы разоблачить содержимое брюшной полости.
После размещения гемостата по обе стороны от разреза и под процесс xiphoid, тянуть и ленты хвост вниз, чтобы расширить живот и использовать шестидюймовый стерильный хлопок наконечник аппликатор отделить и подвергать селезенки из жировой ткани поджелудочной железы. Далее, вихрь подвески раковых клеток интерес разъедать любые клеточные сгустки и загрузить клетки в 0,5-миллилитровый инсулин шприц оснащен 28-калиберной иглой. Медленно и осторожно ввиснуть 100 микролитров клеток в кончик селезенки, поместив хлопчатобумажный наконечник, прилегающий к стороне прокола иглы, чтобы поглотить любые возможные утечки опухоли в брюшной полости, добавляя нежное давление для стабилизации селезенки во время инъекции.
Успешная инъекция будет очевидна изменением цвета печени. Когда все клетки были доставлены, поместите кусок пропитанной PBS стерильной марли над вскрытой области и поместите мышь на грелку в течение 15 минут, чтобы раковые клетки циркулировать в системе. Чтобы вызвать ишемию и травму реперфузии, используйте два увлажненых наконечника хлопка, чтобы аккуратно переместить кишечник из полости, чтобы разоблачить вену портала и поместить мышь под рассеченный микроскоп.
Поднимите медиану и левую лобную долей печени против диафрагмы. Поместите небольшой влажный ватный тампон между средней долей и правой боковой долей, чтобы создать достаточно места для зажима и тщательно пройти сосуд расширитеор forceы за портал триады и, используя сосуд расширителя тибры, использовать 10-сантиметровый кусок 4-0 полипропиленовый шов пройти позади и поднять портал триады. Используйте аппликатор микро-серрифина с замком, чтобы поместить микрососудистый зажим на левую и среднюю долей печени, чтобы окклюдировать все структуры в триаде портала.
При наблюдении бланширования снимите 4-0 полипропиленовый шов и небольшой ватный тампон и аккуратно верните кишечник в брюшную полость. Обложка брюшной стенки с новым куском PBS пропитанной марлей и покрыть марлю полиэтиленовой пленкой, чтобы свести к минимуму испарительные потери. Затем поместите мышь обратно на грелку в течение 60 минут.
На протяжении всего ишемического интервала, визуализировать бледно бланширование правой медиальной, левой медиальной и боковой доли, чтобы подтвердить доказательства травмы ишемии. В конце периода травмы снимите зажим. Для выполнения спленэктомии, тщательно поднимите селезенку с гладкими типсами и использовать портативный прижигательное устройство для прижигания селезенки кровеносных сосудов, чтобы избежать чрезмерного кровотечения.
Трансект сосудов на прижигаемой секции, чтобы удалить селезенку и сразу же использовать 4-0 полипропиленовых швов, чтобы закрыть мышцы и разрезы кожи в двухслойный шов картины. Затем поместите мышь обратно в свою домашнюю клетку с мониторингом до полного выздоровления. Хирургический стресс значительно увеличивает количество заранее установленных микрометастазы в печени.
Эта разница наблюдается даже через две недели после реперфузии ишемии по сравнению с неишемией, переросшей мышами. Реперфузия печени и инъекция опухолевых клеток могут зависеть от комнатной температуры и жизнеспособности клеток, поэтому позаботьтесь о контроле над этими переменными. Этот метод облегчает изучение влияния хирургического стресса и травмы печени на рост метастатических заболеваний.
Это поможет исследователям лучше понять феномен хирургического роста опухоли.
