Experimentelle und klinische Beweise zeigen, dass Leberischämie-Reperfusion die Bildung von metastasierenden Brennpunkten durch zirkulierende Krebszellen und das Wachstum von mikrometastasierenden Erkrankungen erhöhen kann. Dieses reproduzierbare Murinmodell ermöglicht die relevante Untersuchung sowohl der Etablierung von Metastasen als auch des Wachstums von bereits existierenden Tumoren in der Leber. Leberoperationen, Blutungen und septischer Schock sind alle mit Leber-Ischämie-Reperfusion verbunden und können das Wachstum von metastasierenden Erkrankungen beeinflussen.
Diese Techniken ermöglichen die Untersuchung dieser Phänomene in dem Bemühen, die schädliche Wirkung der Ischämie-Reperfusion auf das Tumorwachstum in einem klinischen Umfeld besser zu diagnostizieren und zu verhindern. Nach der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Zehenkneifen in einer anästhesierten acht bis 12 Wochen alten männlichen C57 schwarz 6 Maus, desinfizieren Sie die exponierte Bauchwandhaut mit einem Povidon-Jod-Peeling und verwenden Zahnzange, um die Haut zu heben. Mit einem chirurgischen Skalpell, machen Sie einen Mittellinienschnitt in der Haut und heben Sie den Bauchmuskel und Peritoneum, um die Schaffung eines drei Zentimeter großen Mittellinienschnitts zu erleichtern, um den Bauchinhalt freizulegen.
Nach der Platzierung eines Hämostats an beiden Seiten des Einschnitts und unter dem xiphoiden Prozess ziehen und banden Sie den Schwanz nach unten, um den Bauch zu verlängern und verwenden Sie einen sechs Zoll sterilen Baumwollspitzenapplikator, um die Milz vom Bauchspeicheldrüsenfettgewebe zu trennen und auszusetzen. Als nächstes wirbeln Sie die Krebszellsuspension von Interesse, um alle Zellklumpen zu dissoziieren und laden Sie die Zellen in eine 0,5-Milliliter-Insulinspritze mit einer 28-Spur-Nadel ausgestattet. Injizieren Sie langsam und vorsichtig 100 Mikroliter Zellen in die Spitze der Milz, indem Sie eine Baumwollspitze neben der Seite der Nadelpunktion platzieren, um mögliche Tumoraustritte in die Peritonealhöhle zu absorbieren und gleichzeitig sanften Druck hinzuzufügen, um die Milz während der Injektion zu stabilisieren.
Eine erfolgreiche Injektion wird durch eine Änderung der Farbe der Leber offensichtlich sein. Wenn alle Zellen geliefert sind, legen Sie ein Stück PBS-getränkte sterile Gaze über den sezierten Bereich und legen Sie die Maus für 15 Minuten auf ein Heizkissen, damit die Krebszellen innerhalb des Systems zirkulieren können. Um eine Ischämie- und Reperfusionsverletzung auszulösen, verwenden Sie zwei befeuchtete Baumwollspitzen, um den Darm sanft aus der Höhle zu bewegen, um die Portalvene freizulegen und die Maus unter ein sezierendes Mikroskop zu stellen.
Heben Sie den Median und linke seitliche Leberlappen gegen das Zwerchfell. Legen Sie einen kleinen feuchten Wattestäbchen zwischen den Medianlappen und den rechten Seitenlappen, um genügend Platz zum Spannen zu schaffen, und passieren Sie vorsichtig einen Gefäßdilatator, der hinter der Portaltriade drückt, und verwenden Sie mit dem Gefäßdilatator die Zange, indem Sie eine 10-Zentimeter-Stück 4-0-Polypropylen-Nähte verwenden, um hinter der Portaltriade vorbeizugehen und sie anzuheben. Verwenden Sie einen mikroserfeinen Klemmenapplikator mit einem Schloss, um eine mikrovaskuläre Klemme auf die linke seite zu legen, und mediane Leberlappen, um alle Strukturen in der Portaltriade zu verschließen.
Beim Blanchieren entfernen Sie die 4-0 Polypropylen-Nähte und den kleinen Wattestäbchen und geben Sie den Darm vorsichtig in die Bauchhöhle zurück. Bedecken Sie die Bauchwand mit einem neuen Stück PBS-getränkter Gaze und bedecken Sie die Gaze mit Plastikfolie, um den Verdunstungsverlust zu minimieren. Legen Sie die Maus dann 60 Minuten lang wieder auf das Heizkissen.
Visualisieren Sie während des ischämischen Intervalls das blasse Blanchieren des rechten medialen, linken Medial- und Seitenlappens, um Beweise für die Ischämieverletzung zu bestätigen. Entfernen Sie am Ende der Verletzungszeit die Klemme. Um eine Splenektomie durchzuführen, heben Sie vorsichtig die Milz mit glatten Zangen und verwenden Sie ein Hand-Kautery-Gerät, um die milden Blutgefäße zu kauterisieren, um übermäßige Blutungen zu vermeiden.
Transsektieren Sie die Gefäße am kauterisierten Abschnitt, um die Milz zu entfernen und verwenden Sie sofort 4-0 Polypropylen-Nähte, um die Muskel- und Hautschnitte in einem doppellagigen Nahtmuster zu schließen. Legen Sie die Maus dann wieder in ihren Heimischen Käfig mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung. Chirurgischer Stress erhöht die Menge an vorab etablierten Mikrometastasen in der Leber signifikant.
Dieser Unterschied wird auch zwei Wochen nach der Ischämie-Reperfusion im Vergleich zu nicht-ischmiareperfused Mäuse beobachtet. Die LeberIschämie-Reperfusion und Tumorzellinjektion kann durch Raumtemperatur und Zelllebensfähigkeit beeinflusst werden, also achten Sie darauf, diese Variablen zu kontrollieren. Diese Technik erleichtert die Untersuchung der Auswirkungen von chirurgischem Stress und Leberschäden auf das Wachstum von metastasierenden Erkrankungen.
Dies wird Forschern helfen, das Phänomen des chirurgisch induzierten Tumorwachstums besser zu verstehen.
