Planarian Locomotor Velocity Test является средством для быстрой оценки стимуляторов и возможных эффектов вывода для различных биологических изменяющих агентов, которые могут повлиять на подвижность. Это эссе легко контролируется и обеспечивает простой и доступный метод для генерации надежных поведенческих данных даже в самых основных условиях исследования. Так как планарная нервная система имеет централизованный рудиментарный мозг, двустороннюю симметрию и аналогичные системы нейромедиатора, поведенческие исследования с использованием этих организмов предлагают доклинтические идеи возможных реакций позвоночных.
Эксперименты могут быть дополнительно затронуты физиологических модификаторов пути, наркотики или даже генетически модифицированных planarians, чтобы обеспечить понимание связанных биологических механизмов. Важно иметь планарий, чтобы передачи между контейнерами не подчеркивались и чтобы стандартизировать кривые линии сетки между членами лаборатории. Лучший способ получить последовательные результаты от такого поведения эссе эксперимент, это, видя, как опытные пользователи выполнили их.
После создания планарной культуры, кормить червей ad libitum на регулярной два раза в неделю график нарезанных органических вареных яиц или смешанной органической печени говядины в течение одного-двух часов. После кормления, удалить любую загрязненную воду из контейнера и использовать плоскую кисть акварели краски для передачи любого пищевого мусора и слизи прилипающих к контейнеру на бумажное полотенце. Используйте пресную родниковую воду и нежный закрученного или агитации, чтобы выбить planarians и decamp червей в чистый контейнер.
Слайд Широкий Bore Pipette Совет под любой planarians оставшихся придерживались старого контейнера, чтобы облегчить их передачу на новое блюдо и тщательно decant передачи воды. Затем накройте планариев в новом контейнере пресной родниковой водой. Для выполнения Planarian Locomotor Скорость испытаний, во-первых, убедитесь, что от пяти до 10 дней голодали planarians полностью сформированы с полным и пигментированные головы и хвосты.
Если планарианцы готовы разместить одну чистую чашку Петри диаметром 10 сантиметров на один кусок предварительно ламинированной сетчатой бумаги с 0,5 сантиметра квадратов на экспериментальную группу и добавить 20 миллилитров чистейщей родниковой воды для контрольной группы или 20 миллилитров родниковой воды, содержащей соответствующую концентрацию натурального продукта, тестируемого на каждую тарелку. Распоитите камеру над подготовленным блюдом стимуляции скорости локомотива и добавьте от пяти до 10 миллилитров чистейщей родниковой воды или родниковой воды, содержащей соответствующую концентрацию экспериментального соединения, в соответствующий по размеру контейнер для привыкания. Далее используйте небольшую чистую акварелию кисть краски, чтобы аккуратно передать один planarian из контейнера культуры в подготовленный контейнер привыкания и позволить planarian обитать в растворе в контейнере в течение двух минут.
Исследования позволят планариам перейти на кисть и аккуратно поднять животных, не заставляя их. В конце периода привыкания используйте кисть, чтобы тщательно перенести планар в центр подготовленного блюда стимуляции скорости локомотива, содержащего тот же раствор, что и контейнер для привыкания, и запустите камеру для записи 10-11 минут движения плана. Чтобы проверить последствия вывода в конце периода привыкания, промойте planarian в пяти сантиметре блюдо, содержащее только родниковую воду.
Перед передачей червя в центр подготовленного локомотива скорость блюдо, содержащее пресную родниковую воду и начать камеру для записи от 10 до 11 минут движения. Установка камеры позволяет получить четкое представление о планарной и сетевой бумаге и позволяет точно оценить прогресс животного в течение всего эксперимента. Сбор данных должен включать общее количество пересекаемых линий сетки, а также общее общее количество пересекаемых линий в минуту эксперимента.
Чтобы стандартизировать результаты каждого испытания, планарная скорость локомотива может быть рассчитана и построена по мере того, как количество коробок пересекается относительно прогресса соответствующего червя управления. В качестве эталона, planarians в родниковой воде, как правило, охватывают около 25 ящиков в течение трех минут. Диапазон концентраций испытательных реагентов может быть изучен для определения планарной подвижности в ответ на испытательные соединения, представляющие интерес.
Данные об изъятии могут быть оценены путем количественной оценки количества линий сетки, пересекаемых в родниковой воде по отношению к родниковому водному контролю после того, как животные были привыкли к изучению биомодулирующий продукт. Спринг-контроль воды planarians двигаться по линии сетки в течение всего эксперимента. Временами, однако, тест planarians прекратить пересечение линий сетки во время эссе с поведением, которые характерны для продукта, тестируемого.
Это говорит о том, что может потребоваться другой метод анализа. Такие случаи можно отслеживать, и данные могут быть проиллюстрированы в процентах от общего числа животных, подвергшихся воздействию определенной концентрации реагентов. Очень важно обращаться с планарным, чтобы они не были повреждены во время передачи между блюдами.
После определения воздействия различных концентраций природного продукта, биологические модификаторы пути могут быть добавлены для наблюдения за любыми динамическими изменениями первоначальных результатов. Planarian Locomotor Скорость тест был использован для тестирования для стимуляции и вывода с использованием известных фармакологических агентов. Мы адаптировали систему для изучения этих же концепций с натуральными продуктами.
