Наш протокол предназначен для выполнения тонкого анализа на плодовую муху, которая является мощным моделью организма, который позволяет проектировать для всех генов, рецепторов, нейронов и нейро-психических головок, которые участвуют в тест ощущение и потребление пищи. Как люди летают, как пища, которая на вкус: сладкий, слегка соленый, слегка кислый или отказаться от пищи, которая на вкус горький, слишком соленый или слишком кислый. Сила этой техники исходит от скорости и удобства.
Вы можете проверить много различных мух в короткое время PRH без сложной установки. Наш метод является отличным, отличным анализом для понимания того, мухи, как, так же, как определенная пища, а также как некоторые генные продукты влияют на вкусовые предпочтения. Установление того, принимают ли животные определенные продукты или отвергают их, может быть сложной задачей.
Поэтому важно установить стандартный протокол для тестирования вкусовых предпочтений животных. Чтобы подготовить голодные флаконы для анализа, свободно компактный кусок ткани в нижней части каждого пустого пластикового флакона мухи на тип гена мухи для тестирования. Таким образом, что бумага заполняет это пространство без формирования плотной массы, около трех миллилитров чистой воды для каждого флакона, чтобы полностью насытить ткани без стоячей воды.
Заботьтесь о том, чтобы на стенах флаконов не было больших капель лишней воды. Кроме того, пять миллилитров 1%Agros без сахарозы могут быть заменены на пропитанную бумагу, за 24 часа до эксперимента углекислый газ анестезировал два-четыре дня старые мухи и сортировать мух в группы примерно 70. Затем добавьте каждую группу мух к голодной мерзкой и обозначить каждый флакон с генотипом и время инициации голода.
Перед тем, как провести эксперимент, подготовить ряд разбавлений для каждого красителя, используя ту же пищу с каждым различным цветом красителя. В сочетании 0,5 грамма Агрос с 50 миллилитров чистой воды в микроволновой безопасной сосуд и тепла Раствор Агро, пока он не растворился перемешивания по мере необходимости. Растворите каждый пищевой компонент, включая сахарозу и любые экспериментальные соединения в воде в 100 раз или более высокую концентрацию конечной испытанной концентрации.
И смешать краситель Agro и желаемое экспериментальное соединение в конических, полипропиленовых центрифугных трубках. После смешивания поместите трубки в 60 градусов по Цельсию водяной бане до распределения и добавить один миллилитр одного цвета экспериментальной пищи и красителя решений в одну сторону первого анализа блюдо. Разрешить Agros остыть до фирмы, прежде чем добавить один миллилитр контроля пищевой раствор, помеченный со вторым цветом красителя на другую сторону блюда.
Затем повторите анализ приготовления блюда, с противоположным контролем и экспериментальной парой раствора красителя. Используйте результаты для определения двух концентраций красителя, которые дают индекс предпочтений нуля. Когда не добавляется экспериментальное соединение.
Выполнить двухготовую операцию по кормлению. Первый временно парализовал один экспериментальный летать мерзкий в течение трех-пяти минут на льду, пока не наблюдается очевидных двигательных мероприятий, таких как полет и восхождение не наблюдается. После того, как мухи были обездвижены, осторожно инвертировать флакон и нажмите, чтобы передать мух в камеру анализа затем быстро положил крышку на камеру.
Когда все группы были переведены переместить все камеры анализа в темное и закрытое пространство в течение 90 минут. В конце анализа инвертировать камеры при температуре минус 20 градусов по Цельсию морозильник, в течение часа. Перед размещением каждой камеры под стерео микроскопом, чтобы изучить брюшной цвет мух в каждой экспериментальной группе.
Подсчитайте муху, если живот более чем на 50% окрашен, указывающий на надежное кормление, отбросьте мух, в которых живот содержит только крошечное пищевое пятно, что свидетельствует о плохом питании. Когда все мухи были подсчитаны использовать уравнение для количественной оценки индекса предпочтения продуктов питания для каждой группы. В этом анализе, 35-миллиметровое блюдо было разделено на две недели мы будем кормить в отсеках, содержащих пищу Агро, в сочетании с красным или синим красителем.
Чтобы исключить предвзятость красителя, синий и красный концентрации красителя были тщательно уточнены, чтобы дать приблизительное нулевое предпочтение, когда только эти два красителя были добавлены, 90 минут после мокрой голодающей взрослой мухи загрузки bly брюшной цвета появились как синий или красный. Если животное преимущественно потребляли синюю или красную пищу, соответственно, если муха потребляла как синюю, так и красную, живот казался фиолетовым. Только мухи, которые глотали значительное количество пищи были забиты, в то время как мухи с недостаточным потреблением пищи не были засчитаны.
Сравнение этой чашки Петри на основе анализа на основе нескольких хорошо пластины показал, что два метода кормления дал по существу же анализ результатов кормления в ответ на сладкие, горькие и соленые продукты питания в диких мух типа. Примечательно, однако, что это гораздо быстрее, чтобы подготовить и распределить пищу в чашке Петри, чем в 60 хорошо хорошо пластины. Будьте уверены, чтобы определить, что концентрация красителя для использования особенно после принятия новой партии диеты.
Эта концентрация может отличаться между линиями мух. Наша пара сегодня основана два выбора анализ очень мощный тоже. Для вас спрашивая, как мухи, смысле как внутренне-внешней рамы повреждены в реальном состоянии надлежащего кормления и поведения.
