Notre protocole est conçu pour effectuer une analyse fine pour la mouche des fruits, qui est un organisme modèle puissant qui permet de concevoir pour tous les gènes, récepteurs, neurones et une tête neuro-psych qui sont impliqués dans la sensation d’essai et la consommation alimentaire. Comme les humains volent comme des aliments qui goûtent: sucré, légèrement salé, légèrement aigre ou rejeter les aliments qui ont un goût amer, trop salé ou trop aigre. La puissance de cette technique vient de la vitesse et de la commodité.
Vous pouvez tester de nombreuses mouches différentes en peu de temps PRH sans configuration complexe. Notre méthode est un excellent, excellent test pour comprendre si les mouches comme un, tout comme un aliment particulier, ainsi que la façon dont certains produits génétiques influencent la préférence gustative. Il peut être difficile d’établir si les animaux acceptent ou rejettent certains aliments.
Par conséquent, il est important d’établir un protocole standard pour tester la préférence de goût des animaux. Pour préparer les flacons de famine pour l’analyse, compactez lâchement un morceau de tissu au fond de chaque flacon de mouche en plastique vide par type de gène de mouche à tester. De telle sorte que le papier remplit cet espace sans former une masse dense, à environ trois millilitres d’eau pure à chaque flacon pour saturer complètement les tissus sans eau stagnante.
En prenant soin qu’il n’y a pas de grandes gouttelettes d’excès d’eau sur les parois des flacons. Alternativement, cinq millilitres de 1% Agros sans saccharose peuvent être remplacés par le papier trempé, 24 heures avant l’expérience de dioxyde de carbone anesthésié deux à quatre jours de mouches et trier les mouches en groupes d’environ 70. Ajoutez ensuite chaque groupe de mouches à une vile famine et étiquetez chaque flacon avec le génotype et le temps d’initiation à la famine.
Avant d’effectuer une expérience, préparez une gamme de dilutions pour chaque colorant en utilisant le même aliment avec chaque couleur de colorant différente. Combiné 0,5 grammes d’Agros avec 50 millilitres d’eau pure dans un récipient allant au micro-ondes et chauffer la solution Agro jusqu’à ce qu’elle se soit dissoute en remuant au besoin. Dissoudre chaque composant alimentaire, y compris le saccharose et tous les composés expérimentaux dans l’eau à une concentration 100 fois ou plus élevée de la concentration finale testée.
Et mélanger le colorant Agro et le composé expérimental désiré dans des tubes coniques de centrifugeuse en polypropylène. Après avoir mélangé placer les tubes dans le bain d’eau de 60 degrés Celsius jusqu’à la distribution et ajouter un millilitre d’une couleur de la nourriture expérimentale et des solutions de teinture d’un côté du premier plat d’essai. Laisser refroidir les Agros jusqu’à consistance ferme avant d’ajouter un millilitre de la solution alimentaire de contrôle, étiquetée avec la deuxième couleur de colorant de l’autre côté du plat.
Répétez ensuite la préparation du plat d’essai, avec le contrôle opposé et la paire expérimentale de solution de colorant. Utilisez les résultats pour identifier deux concentrations de colorants qui donnent un indice de préférence de zéro. Lorsqu’aucun composé expérimental n’est ajouté.
Pour effectuer un test d’alimentation bi-sens. D’abord temporairement paralysé une mouche expérimentale vile pendant trois à cinq minutes sur la glace jusqu’à ce qu’aucune activité motrice évidente comme le vol et l’escalade sont observées. Une fois que les mouches ont été immobilisées, inversez doucement le flacon et appuyez sur pour transférer les mouches dans la chambre d’essai, puis placez rapidement le couvercle sur la chambre.
Lorsque tous les groupes ont été transférés déplacer toutes les chambres d’essai à un espace sombre et fermé pendant 90 minutes. À la fin de l’essai inverser les chambres à un congélateur moins 20 degrés Celsius, pendant environ une heure. Avant de placer chaque chambre sous un microscope stéréo pour examiner la couleur abdominale des mouches dans chaque groupe expérimental.
Comptez une mouche, si l’abdomen est de plus de 50% coloré indiquant une alimentation robuste, jetez toutes les mouches dans lesquelles l’abdomen ne contient qu’une petite tache alimentaire, ce qui est indicatif d’une mauvaise alimentation. Lorsque toutes les mouches ont été comptées, utilisez l’équation pour quantifier l’indice de préférence alimentaire pour chaque groupe. Dans cet essai, un plat de 35 millimètres a été divisé en deux semaines, nous allons nourrir dans des compartiments contenant la nourriture d’Agro, couplé avec colorant rouge ou bleu.
Pour exclure le biais de teinture, les concentrations de colorant bleu et rouge ont été soigneusement affinées pour donner une préférence approximative zéro lorsque seulement ces deux colorants ont été ajoutés, 90 minutes après wet starved adulte fly chargement des couleurs abdominales bly est apparu comme bleu ou rouge. Si l’animal consommait principalement des aliments bleus ou rouges, respectivement, si une mouche consommait à la fois du bleu et du rouge, l’abdomen semblait violet. Seules les mouches qui ont ingéré une quantité considérable de nourriture ont été notées, tandis que les mouches ayant un apport alimentaire insuffisant n’ont pas été comptées.
La comparaison de cet essai à base de boîtes de Pétri à l’analyse à base d’assiettes multi-puits a révélé que les deux méthodes d’alimentation donnaient essentiellement les mêmes résultats d’alimentation en réponse aux aliments sucrés, amers et salés chez les mouches sauvages. Toutefois, il est beaucoup plus rapide de préparer et de distribuer les aliments dans une boîte de Pétri que dans une assiette de 60 puits. Assurez-vous d’identifier la concentration de colorant à utiliser, surtout après avoir fait un nouveau lot de régime.
Cette concentration peut être différente d’une ligne de vol à l’autre. Notre paire d’aujourd’hui est basée à deux choix test est très puissant aussi. Pour vous demander comment les mouches, sentir à la fois cadre interne-externe endommagé à l’état réel alimentation appropriée et le comportement.
