Nuestro protocolo está diseñado para realizar un ensayo fino para la mosca de la fruta, que es un potente organismo modelo que permite diseñar para todos los genes, receptores, neuronas y una neuro-psicópatas que están involucrados en la sensación de prueba y el consumo de alimentos. Al igual que los seres humanos vuelan como alimentos que saben: dulces, ligeramente salados, ligeramente agrios o rechazan alimentos que saben amargos, demasiado salados o demasiado agrios. La potencia de esta técnica proviene de la velocidad y la comodidad.
Puede probar muchas moscas diferentes en un PRH de poco tiempo sin una configuración compleja. Nuestro método es un excelente y excelente ensayo para entender si vuela como un, al igual que un alimento en particular, así como cómo ciertos productos genéticos influyen en la preferencia del gusto. Establecer si los animales aceptan o rechazan ciertos alimentos puede ser un desafío.
Por lo tanto, es importante establecer un protocolo estándar para probar la preferencia del sabor animal. Para preparar viales de inanición para el ensayo, compacte libremente un trozo de tejido en la parte inferior de cada vial de mosca de plástico vacío por tipo de gen mosca que se va a probar. Tal que el papel llena este espacio sin formar una masa densa, a unos tres mililitros de agua pura a cada vial para saturar completamente los tejidos sin agua estancada.
Teniendo cuidado de que no haya gotas grandes de exceso de agua en las paredes de los viales. Alternativamente, cinco mililitros de 1%Agros sin sacarosa pueden ser sustituidos por el papel empapado, 24 horas antes del experimento de dióxido de carbono anestesiado de dos a cuatro días de moscas de edad y ordenar las moscas en grupos de aproximadamente 70. A continuación, agregue cada grupo de moscas a un vil de inanición y etiquete cada vial con el genotipo y el tiempo de inicio de la inanición.
Antes de realizar un experimento, prepare una gama de diluciones para cada tinte utilizando el mismo alimento con cada color de tinte diferente. Combinado 0,5 gramos de Agros con 50 mililitros de agua pura en un recipiente apto para microondas y calienta la solución Agro hasta que se haya disuelto revolviendo según sea necesario. Disolver cada componente alimentario, incluyendo sacarosa y cualquier compuesto experimental en agua a una concentración de 100 veces o mayor de la concentración final probada.
Y mezcle el tinte Agro y el compuesto experimental deseado en tubos cónicos de centrífuga de polipropileno. Después de mezclar coloque los tubos en el baño de agua de 60 grados Celsius hasta su distribución y agregue un mililitro de un color de las soluciones experimentales de alimentos y tintes a un lado del primer plato de ensayo. Deje que el Agros se enfríe hasta que se firme antes de añadir un mililitro de la solución alimentaria de control, etiquetado con el segundo color de tinte al otro lado del plato.
A continuación, repita la preparación del plato de ensayo, con el control opuesto y el par de solución experimental de tinte. Utilice los resultados para identificar dos concentraciones de tinte que producen un índice de preferencia de cero. Cuando no se añade ningún compuesto experimental.
Para realizar un ensayo de alimentación bidireccional. Primero paralizó temporalmente una mosca experimental vil durante tres a cinco minutos sobre hielo hasta que no se observan actividades motoras obvias como volar y escalar. Una vez que las moscas han sido inmovilizadas, invierta suavemente el vial y toque para transferir las moscas a la cámara de ensayo y luego coloque rápidamente la tapa en la cámara.
Cuando todos los grupos hayan sido transferidos, mueva todas las cámaras de ensayo a un espacio oscuro y cerrado durante 90 minutos. Al final del ensayo invertir las cámaras a menos 20 grados centígrados congelador, durante aproximadamente una hora. Antes de colocar cada cámara bajo un microscopio estéreo para examinar el color abdominal de las moscas en cada grupo experimental.
Cuente una mosca, si el abdomen es más del 50% de color que indica una alimentación robusta, deseche cualquier mosca en la que el abdomen contenga sólo un pequeño punto de comida, lo que es indicativo de una alimentación deficiente. Cuando se hayan contado todas las moscas, utilice la ecuación para cuantificar el índice de preferencias alimentarias para cada grupo. En este ensayo, un plato de 35 milímetros se dividió en dos semanas que alimentaremos en compartimentos que contienen alimentos de Agro, junto con tinte rojo o azul.
Para excluir el sesgo de tinte, las concentraciones de tinte azul y rojo se refinaron cuidadosamente para producir una preferencia cero aproximada cuando sólo se añadieron estos dos tintes, 90 minutos después de que la mosca adulta hambrienta húmeda cargando colores abdominales bly apareciera como azul o rojo. Si el animal consumió predominantemente alimentos azules o rojos, respectivamente, si una mosca consumía tanto azul como rojo, el abdomen parecía púrpura. Sólo las moscas que ingirieron una cantidad considerable de alimentos fueron puntuadas, mientras que las moscas con una ingesta insuficiente de alimentos no fueron contadas.
La comparación de este ensayo basado en placas De Petri con el ensayo basado en placas de varios pozos reveló que los dos métodos de alimentación dieron esencialmente los mismos resultados de alimentación de ensayo en respuesta a alimentos dulces, amargos y salados en moscas de tipo salvaje. En particular, sin embargo, es mucho más rápido preparar y distribuir alimentos en una placa de Petri que en un plato de 60 pozos multi-pozo. Asegúrese de identificar qué concentración de tinte usar especialmente después de hacer un nuevo lote de dieta.
Esta concentración puede ser diferente entre las líneas de vuelo. Nuestro par de hoy en día se basa en el ensayo de dos opciones es muy potente también. Para usted preguntando cómo las moscas, sentir tanto el marco interno-externo dañado a la alimentación y el comportamiento apropiados del estado real.
