Il nostro protocollo è progettato per eseguire un test fine per la mosca della frutta, che è un potente organismo modello che consente di progettare per tutti i geni, recettori, neuroni e una testa neuro-psichica che sono coinvolti nella sensazione di test e nel consumo di cibo. Come gli esseri umani volano come cibo che ha un sapore: dolce, leggermente salato, leggermente aspro o rifiuta il cibo che ha un sapore amaro, troppo salato o troppo aspro. La potenza di questa tecnica deriva dalla velocità e dalla comodità.
Puoi testare molte mosche diverse in breve tempo PRH senza una configurazione complessa. Il nostro metodo è un eccellente, eccellente saggio per capire se mosche come a, proprio come un particolare alimento, così come come alcuni prodotti genetici influenzano la preferenza del gusto. Stabilire se gli animali accettano o rifiutano determinati alimenti può essere impegnativo.
Pertanto è importante stabilire un protocollo standard per testare la preferenza per il gusto animale. Per preparare fiale di fame per il test, compattare liberamente un pezzo di tessuto nella parte inferiore di ogni flaconcino di mosca di plastica vuoto per tipo di gene fly da testare. Tale che la carta riempia questo spazio senza formare una massa densa, a circa tre millilitri di acqua pura per ogni flaconcino per saturare completamente i tessuti senza acqua stagnante.
Facendo attenzione che non ci siano grandi goccioline di acqua in eccesso sulle pareti delle fiale. In alternativa, cinque millilitri di 1%Agros senza saccarosio possono essere sostituiti con la carta imbevuta, 24 ore prima dell'esperimento di anidride carbonica anestetizzato da due a quattro giorni vecchie mosche e ordinare le mosche in gruppi di circa 70. Quindi aggiungi ogni gruppo di mosche a una vile di fame ed etichetta ogni flaconcino con il genotipo e il tempo di iniziazione alla fame.
Prima di eseguire un esperimento, preparare una gamma di diluizioni per ogni colorante usando lo stesso cibo con ogni colore di colorante diverso. Combinati 0,5 grammi di Agros con 50 millilitri di acqua pura in un recipiente sicuro a microonde e riscaldare la soluzione Agro fino a quando non si è sciolta mescolando se necessario. Sciogliere ogni componente alimentare, compreso il saccarosio e gli eventuali composti sperimentali in acqua a una concentrazione di 100 volte o superiore della concentrazione finale testata.
E mescolare il colorante Agro e il composto sperimentale desiderato in tubi conici in centrifuga in polipropilene. Dopo la miscelazione posizionare i tubi nel bagno d'acqua di 60 gradi Celsius fino alla distribuzione e aggiungere un millilitro di un colore delle soluzioni sperimentali di cibo e colorante su un lato del primo piatto di dosaggio. Lasciare raffreddare gli Agros fino a quando non sono fermi prima di aggiungere un millilitro della soluzione alimentare di controllo, etichettato con il secondo colore colorante sull'altro lato del piatto.
Quindi ripetere la preparazione del piatto di dosaggio, con il controllo opposto e la coppia di soluzioni di tintura sperimentale. Utilizzare i risultati per identificare due concentrazioni di coloranti che producono un indice di preferenza pari a zero. Quando non viene aggiunto alcun composto sperimentale.
Per eseguire un saggio di alimentazione a due modi. Prima temporaneamente paralizzato una mosca sperimentale vile per tre o cinque minuti sul ghiaccio fino a quando non si osservano ovvie attività motorie come il volo e l'arrampicata. Una volta che le mosche sono state immobilizzate, invertire delicatamente il flaconcino e toccare per trasferire le mosche nella camera di dosaggio, quindi posizionare rapidamente il coperchio sulla camera.
Quando tutti i gruppi sono stati trasferiti spostare tutte le camere di dosaggio in uno spazio buio e chiuso per 90 minuti. Alla fine del saggio invertire le camere con un congelatore meno 20 gradi Celsius, per circa un'ora. Prima di posizionare ogni camera al microscopio stereo per esaminare il colore addominale delle mosche in ogni gruppo sperimentale.
Conta una mosca, se l'addome è di colore superiore al 50% indicando un'alimentazione robusta, scarta tutte le mosche in cui l'addome contiene solo una piccola macchia alimentare, il che è indicativo di un cattivo consumo di cibo. Quando tutte le mosche sono state contate usa l'equazione per quantificare l'indice delle preferenze alimentari per ogni gruppo. In questo saggio, un piatto da 35 millimetri è stato diviso in due settimane che nutriremo in compartimenti contenenti cibo agro, accoppiato con colorante rosso o blu.
Per escludere la distorsione del colorante, le concentrazioni di colorante blu e rosso sono state accuratamente perfezionate per ottenere una preferenza zero approssimativa quando sono stati aggiunti solo questi due coloranti, 90 minuti dopo che la mosca adulta affamata bagnata caricando i colori addominali appariva come blu o rosso. Se l'animale consumava prevalentemente cibo blu o rosso, rispettivamente, se una mosca consumava sia blu che rosso, l'addome appariva viola. Solo le mosche che hanno ingerito una notevole quantità di cibo sono state segnate, mentre le mosche con un apporto alimentare insufficiente non sono state conteggiate.
Confrontando questo saggio a base di piastra di Petri con il saggio a base di piastre multi-bene ha rivelato che i due metodi di alimentazione hanno dato essenzialmente gli stessi risultati di alimentazione saggia in risposta al cibo dolce, amaro e salato nelle mosche di tipo selvatico. In particolare, tuttavia è molto più veloce preparare e distribuire cibo in una piastra di Petri che in un piatto multi-pozzo da 60 po '. Assicurati di identificare quale concentrazione di colorante usare soprattutto dopo aver fatto un nuovo lotto dietetico.
Questa concentrazione può essere diversa tra le linee di volo. Anche la nostra coppia oggi si basa su test a due scelte è molto potente. Per te che chiedi come vola, percepisci sia il telaio interno-esterno danneggiato allo stato reale alimentazione e comportamento appropriati.
