Этот протокол важен тем, что он обеспечивает как комплексный, так и экономичный эффективный метод. Он отвечает ключевым элементам трансляционных исследований и категоризации компонентных данных как на индивидуальном, так и на групповом уровнях. Этот метод выгоден из-за общего количества информации, которая может быть извлечена относительно общего профиля животного.
Это включает в себя компоненты категоризации и последующие выводы. Этот метод может дать представление о широком спектре областей исследований, включая кардиологию, неврологию и фармакологию. Этот метод применим не только к репродуктивным исследованиям.
Начните с обращения с крысой с соответствующим возрасту удержанием, таким как удержание в стиле сжатия для крыс подросткового возраста, путем размещения субъекта против верхней части грудной клетки с носом, направленным вниз на землю. Обнажите влагалищный канал субъекта, осторожно согнув хвост перед введением шприца. Удерживая шприц неподвижно передним пальцем, а средний палец вставьте кончик шприца во влагалищный канал под углом, параллельным ему, медленно выталкивайте хлорид натрия в канал, проталкивая поршень внутрь большим пальцем.
Извлеките хлорид натрия из влагалищного канала, оттянув поршень шприца от эпителиальной оболочки. Используйте критерии для каждого типа клеток, чтобы охарактеризовать клетки, присутствующие в образце, и записать результаты. Ядро ороговевших эпителиальных или количественных эпителиальных клеток будет казаться зубчатыми или угловатыми краями.
Несмотря на отсутствие ядер, он может показывать легкие круглые области внутри клетки, представляющие собой место, где когда-то присутствовало ядро, называемое ядрами-призраками. Большие ядра эпителиальных клеток, или LNE, обычно представляют собой клетки от круглых до полигональной формы, заключенных в неправильные зубчатые или угловатые границы. Их ядра могут варьироваться от интактных до дегенеративных или пикнотических, связанных с необратимой конденсацией хроматина в ядре клетки, подвергающейся гибели или ухудшению.
Ядра занимают меньше места, чем цитоплазма внутри клетки, с более низким соотношением ядер к цитоплазме, чем маленькие эпителиальные клетки. Лейкоциты представляют собой компактные сферические клетки. Наименьший по сравнению со всеми другими описанными типами клеток.
Клетки SNE представляют собой неорогатые клетки с круглыми ядрами, которые занимают больше места, чем цитоплазма внутри клетки, создавая более высокое отношение ядра к цитоплазме относительно крупных эпителиальных клеток. Используйте более низкую объективацию, например четыре X, чтобы получить репрезентативное представление об общем расположении ячеек. Запишите, сгруппированы ли клетки вместе, равномерно распределены или рассеяны случайным образом, и обратите внимание на конкретную организацию каждого типа клеток.
Затем визуально оцените и запишите общее количество клеток, как небольшое, умеренное или многочисленное, и отдельные количества клеток в процентах от каждого присутствующего типа клеток. Объединив эти компоненты категоризации, определите, какая стадия эстрального цикла представлена. В стадии диэструса можно увидеть, что лейкоциты являются доминантным или единственным типом клеток.
Они, как правило, расположены в сгруппированном виде в начале, но более рассредоточены на поздних стадиях. Общее количество клеток может быть сравнительно низким, чаще всего на поздних стадиях диструсного периода на второй или третий день. Концентрированные нити лейкоцитов могут наблюдаться из-за большого количества слизи, которая может присутствовать на этой стадии.
Небольшие скопления клеточных нитей клеток SNE, сопровождающих лейкоциты, могут наблюдаться во время поздних фаз перехода к проэстру. Влагалищная жидкость при переходе внутрь, полностью переходящая в диструс и выходящая из него, кажется вязкой и непрозрачной. Во время стадии проэструса клетки SNE являются доминирующими клетками, в то время как лейкоциты, LNE и AKE-клетки могут быть найдены в небольшом количестве.
Клетки SNE обычно расположены в кластерах, листах или нитях на этой стадии и имеют зернистый вид, который можно наблюдать при более высоком увеличении. Влагалищная жидкость становится невязкой и прозрачной, как только субъект полностью переходит в стадию проэструса. Клетки AKE являются доминирующими во время эструсной стадии, с уменьшением клеток SNE и общим увеличением количества и размера клеток по мере продолжения эструса.
Клетки AKE часто группируются в виде кератиновых стержней. Они также могут содержать ядра призраков, которые могут стать более рассеянными при переходе от проэструса к метестру. Вагинальная жидкость невязкая и прозрачная, поскольку крысы переходят внутрь, полностью переходят и выходят из эструса.
Когда крысы переходят в метеструс, ищите все типы клеток, хотя часто существует более высокое количество клеток SNE и LNE по сравнению с НОУ. Большее количество мусора наблюдается во время метеструса и переходы из-за распада эпителиальных клеток после эструса. На этом этапе отсутствует последовательное расположение, так как все типы клеток видны и в различных количествах.
Однако лейкоциты, которые упакованы в непосредственной близости от эпителиальных клеток на начальных стадиях, могут вернуться в слипшееся расположение при переходе в диеструс. Вагинальная жидкость выглядит невязкой и прозрачной в стадии. И изменяется на более вязкий и непрозрачный внешний вид при переходе в диеструс.
В пределах каждой стадии можно увидеть много вариаций, например, в стадии диэструса наблюдались как эпителиальные клетки, так и лейкоциты. В аранжировках также наблюдались слипшиеся нити слизи, состоящие из лейкоцитов, и первоначальное слипание лейкоцитов, а также более позднее случайное или даже выделение. При сборе образца влагалищной жидкости были непредставленные коллекции, которые требовали повторных промываний, которые включали извлечение плоских клеток из стенки влагалищного канала из-за неправильного введения шприца.
Коллекция исключительно мусора, количество клеток, которое было слишком низким, чтобы классифицировать, и те, которые были вне фокуса. Обычно на гистограммах строится график прогрессии стадий, что позволяет исследователям изучить общую картину цикла и определить цикличность. Затем образцы могут быть проанализированы по длине цикла и схеме прогрессирования стадии.
Профили эструсных циклов могут быть созданы с использованием гистограммы со сложенным сложением, отслеживая либо прогрессию стадии на крысу, либо на когорту. Где компоненты категоризации для каждого дня отображаются либо в день, либо в каждом этапе. Данные компонента категоризации также могут быть организованы численно для создания стандартизированных диапазонов и сбора статистики.
Практикуйте технику, чтобы она была минимально инвазивной, и сканируйте слайд микроскопа для репрезентативных образцов, чтобы уменьшить смещение отбора. В целом, помните, что не существует такого понятия, как нормальный цикл. После этой процедуры могут быть введены экспериментальные переменные, такие как физические упражнения и поведенческие парадигмы.
Это позволило бы исследованиям заранее установить базовый цикл животных и обнаружить гормональные реакции на конкретные вмешательства впоследствии. Этот метод позволяет исследователям исследовать связь между половыми стероидными гормонами и другими системами организма. Примером этого является то, как сердечные рецепторы для половых стероидных гормонов связаны с функциональностью системы.
