Este protocolo é significativo na sua formação, uma técnica abrangente e de baixo custo. Responde a elementos-chave da pesquisa translacional e categorizando dados de componentes em níveis individuais e de grupo. Essa técnica é vantajosa devido à quantidade total de informações que podem ser extraídas em relação ao perfil geral do animal.
Isso inclui os componentes de categorização e as conclusões subsequentes. Essa técnica poderia fornecer insights sobre uma ampla gama de áreas de pesquisa, incluindo cardiologia, neurologia e farmacologia. Esta técnica não é aplicável exclusivamente a estudos reprodutivos.
Comece manuseando o rato com um porão apropriado para a idade, como o estilo de compressão para ratos idosos adolescentes, colocando o sujeito contra a região superior do tórax com o nariz apontado para o chão. Exponha o canal vaginal do sujeito flexionando suavemente a cauda antes de inserir a seringa. Enquanto segura a seringa firme com o dedo do pé e o dedo médio insira a ponta da seringa no canal vaginal em um ângulo paralelo a ele, expulse lentamente o cloreto de sódio para dentro do canal empurrando o êmbolo para dentro com o polegar.
Extrair o cloreto de sódio do canal vaginal puxando o êmbolo da seringa para longe do forro epitelial. Use os critérios para cada tipo celular para caracterizar as células presentes na amostra e registrar os achados. Uma célula epitelial queratinizada nucleada ou células epiteliais quantificadas aparecerá irregular ou bordada angular.
Apesar da falta de núcleos, pode mostrar áreas redondas de luz dentro da célula representando onde um núcleo já esteve presente chamado núcleos fantasmas. As grandes células epiteliais nucleadas, ou células LNE, são tipicamente redondas para células em forma poligonal envoltas por bordas irregulares irregulares ou angulares. Seus núcleos podem variar de intacto a degenerado ou pienotico relacionado à condensação irreversível da cromatina no núcleo de uma célula submetida à morte ou deterioração.
Os núcleos tomam menos espaço do que o citoplasma dentro da célula, com uma relação nuclear menor para citoplasmática do que as pequenas células epiteliais. Leucócitos são células esféricas compactas. O menor quando comparado com todos os outros tipos de células descritas.
As células SNE são células não queratinizadas com núcleos redondos que tomam um espaço maior do que o citoplasma dentro da célula, criando um núcleo maior para a razão citoplasma relativa às grandes células epiteliais. Use a objetificação inferior, como quatro X para obter uma visão representativa do arranjo geral da célula. Regissuor se as células estão agrupadas, dispersas uniformemente ou dispersas aleatoriamente, e observe a organização específica de cada tipo de célula.
Em seguida, estimar visualmente e registrar a quantidade celular total, como um smidge, moderado ou numeroso, e as quantidades celulares individuais como uma porcentagem de cada tipo de célula presente. Com esses componentes categorizados combinados, determine qual estágio de ciclo estrous está sendo apresentado. Dentro do estágio diestrus, pode-se ver que os leucócitos são o dominante ou o único tipo de célula.
Estes são tipicamente organizados de forma desajeitada no início, mas mais dispersos em estágios finais. A quantidade total de células pode ser relativamente baixa, na maioria das vezes nos estágios posteriores do período diestrus no segundo ou terceiro dia. Fios concentrados de leucócitos podem ser observados devido à alta quantidade de muco que pode estar presente nesta fase.
Pequenos aglomerados de fios celulares de células SNE que acompanham os leucócitos podem ser vistos durante fases tardias na transição para proestrus. O fluido vaginal, ao fazer a transição para, totalmente transicionada e a transição para fora de diestrus, parece viscoso e opaco. Durante o estágio proestrus, as células SNE são as células dominantes, enquanto as células leucócitos, LNE e AKE podem ser encontradas em números baixos.
As células SNE são tipicamente dispostas em aglomerados, folhas ou fios durante esta fase e têm uma aparência granular que pode ser observada em uma ampliação mais elevada. O fluido vaginal torna-se não viscoso e transparente uma vez que o sujeito se transforma totalmente na fase proestrus. As células AKE são dominantes durante o estágio estrous, com uma diminuição nas células SNE, e um aumento geral no número e tamanho das células à medida que o estrous continua.
As células AKE são frequentemente agrupadas na forma de barras de queratina. Eles também podem conter núcleos fantasmas que podem se tornar mais dispersos na transição de proestrus para metestrus. O fluido vaginal não é viscoso e transparente à medida que os ratos estão em transição, totalmente transição para, e transição para fora do estrous.
À medida que os ratos transitam para metestrus, procure todos os tipos de células, embora muitas vezes haja uma maior quantidade de células SNE e LNE em comparação com as LEUs. Uma maior quantidade de detritos é observada durante o metestrus e as transições devido à decadência das células epiteliais após o estrous. Durante esta etapa, há uma falta de arranjo consistente, pois todos os tipos de células são vistos e em várias quantidades.
No entanto, os leucócitos que estão embalados nas proximidades das células epiteliais nos estágios iniciais podem retornar ao arranjo desajeitado ao fazer a transição para diestrus. O fluido vaginal parece não viscoso e transparente no palco. E muda para uma aparência mais viscosa e opaca enquanto se move em diestrus.
Dentro de cada estágio, muitas variações podem ser vistas, por exemplo, dentro do estágio diestrus, tanto células epiteliais quanto leucócitos foram observadas. Nos arranjos, fios de muco desajeitados, compostos de leucócitos, e agrupamento inicial de leucócitos, e um desembolso aleatório ou mesmo posterior também foram vistos. Ao coletar a amostra de fluido vaginal, havia coleções não representadas que justificavam lavages repetidas, que incluíam a extração de células escânomas da parede do canal vaginal devido à inserção inadequada da seringa.
Uma coleção de detritos, uma contagem de células que era muito baixa para categorizar, e aqueles que estavam fora de foco. É comum gráfico das progressões de estágio em gráficos de barras, o que permite aos pesquisadores examinar o padrão geral do ciclo e identificar a-cíclisidade. E as amostras podem então ser analisadas pelo comprimento do ciclo e pelo padrão de progressão do estágio.
Perfis de ciclo estrous podem ser criados usando um gráfico de barra empilhado, rastreando a progressão de estágio por rato ou por coorte. Quando os componentes de categorização para cada dia são gráficos por dia ou por etapa. Os dados dos componentes de categorização também podem ser organizados numericamente para criar faixas padronizadas e coletar estatísticas.
Pratique a técnica para que seja minimamente invasiva e escaneie o slide do microscópio para que as amostras representativas diminuam o viés de seleção. No geral, lembre-se, não existe um ciclo normal. Após esse procedimento, variáveis experimentais poderiam ser introduzidas, como exercícios e paradigmas comportamentais.
Isso permitiria que a pesquisa estabelecesse o ciclismo de base de animais de antemão e detecte respostas hormonais a intervenções específicas posteriormente. Este método permite que os pesquisadores explorem a conexão entre hormônios esteroides sexuais e outros sistemas corporais. Um exemplo disso é como receptores cardíacos para hormônios esteroides sexuais se relacionam com a funcionalidade do sistema.
