Ce protocole est important en ce sens qu’il fournit une technique à la fois complète et peu coûteuse en termes de temps. Il répond aux éléments clés de la recherche translationnelle et catégorise les données des composants aux niveaux individuel et collectif. Cette technique est avantageuse en raison de la quantité totale d’informations qui peuvent être extraites concernant le profil global de l’animal.
Cela inclut les composants de catégorisation et les conclusions ultérieures. Cette technique pourrait donner un aperçu d’un large éventail de domaines de recherche, y compris la cardiologie, la neurologie et la pharmacologie. Cette technique n’est pas uniquement applicable aux études de reproduction.
Commencez par manipuler le rat avec une prise adaptée à son âge, comme la prise de style de compression pour les rats adolescents, en plaçant le sujet contre la partie supérieure de la poitrine avec le nez pointé vers le sol. Exposez le canal vaginal du sujet en fléchissant doucement la queue avant d’insérer la seringue. Tout en maintenant la seringue stable avec le majeur et le majeur, insérez le bout de la seringue dans le canal vaginal à un angle parallèle à celui-ci, expulsez lentement le chlorure de sodium dans le canal en poussant le piston vers l’intérieur avec le pouce.
Extrayez le chlorure de sodium du canal vaginal en éloignant le piston de la seringue de la muqueuse épithéliale. Utilisez les critères de chaque type de cellule pour caractériser les cellules présentes dans l’échantillon et enregistrer les résultats. Une épithélium nucléée kératinisée ou des cellules épithéliales quantifiées apparaîtront déchiquetées ou bordées angulairement.
Malgré l’absence de noyaux, il peut montrer des zones rondes claires à l’intérieur de la cellule représentant l’endroit où un noyau était autrefois présent appelé noyau fantôme. Les grandes cellules épithéliales nucléées, ou LNE, sont généralement des cellules de forme ronde à polygonale entourées de bordures irrégulières dentelées ou angulaires. Leurs noyaux peuvent aller d’intacts à dégénérés ou pyknotiques liés à la condensation irréversible de la chromatine dans le noyau d’une cellule en cours de mort ou de détérioration.
Les noyaux prennent moins de place que le cytoplasme à l’intérieur de la cellule, avec un rapport nucléaire/cytoplasmique inférieur à celui des petites cellules épithéliales. Les leucocytes sont des cellules sphériques compactes. Le plus petit par rapport à tous les autres types de cellules décrits.
Les cellules SNE sont des cellules non kératinisées avec des noyaux ronds qui occupent un plus grand espace que le cytoplasme à l’intérieur de la cellule, créant un rapport noyau / cytoplasme plus élevé par rapport aux grandes cellules épithéliales. Utilisez l’objectivation inférieure, telle que quatre X, pour obtenir une vue représentative de la disposition globale des cellules. Indiquez si les cellules sont agglomérées, dispersées uniformément ou dispersées de manière aléatoire, et notez l’organisation spécifique de chaque type de cellule.
Ensuite, estimez et enregistrez visuellement la quantité totale de cellules, sous forme de smidge, modérée ou nombreuse, et les quantités de cellules individuelles en pourcentage de chaque type de cellule présent. Avec ces composants de catégorisation combinés, déterminez quelle étape du cycle œstral est présentée. Au stade diestrus, on peut voir que les leucocytes sont le type de cellule dominant ou le seul.
Ceux-ci sont généralement disposés de manière agglomérée au début, mais plus dispersés dans les derniers stades. La quantité totale de cellules peut être relativement faible, le plus souvent dans les derniers stades de la période diestrus le deuxième ou le troisième jour. Des brins concentrés de leucocytes peuvent être observés en raison de la grande quantité de mucus qui peut être présente à ce stade.
De petits amas de brins cellulaires de cellules SNE accompagnant les leucocytes peuvent être observés pendant les phases tardives de la transition vers le proestrus. Le liquide vaginal, lors de la transition vers, complètement transféré dans, et la transition hors du diestrus, semble visqueux et opaque. Au stade du proestrus, les cellules SNE sont les cellules dominantes tandis que les leucocytes, les LNE et les cellules AKE peuvent être trouvés en faible nombre.
Les cellules SNE sont généralement disposées en grappes, feuilles ou brins au cours de cette étape et ont un aspect granulaire qui peut être observé à un grossissement plus élevé. Le liquide vaginal devient non visqueux et transparent une fois que le sujet passe complètement au stade de proestrus. Les cellules AKE sont dominantes pendant la phase œstrale, avec une diminution des cellules SNE et une augmentation globale du nombre et de la taille des cellules à mesure que l’œstrus se poursuit.
Les cellules AKE sont souvent regroupées sous la forme de barres de kératine. Ils peuvent également contenir des noyaux fantômes qui peuvent devenir plus dispersés lors de la transition du proestrus au metestrus. Le liquide vaginal est non visqueux et transparent car les rats font la transition, la transition complète et la sortie de l’œstrus.
Au fur et à mesure que les rats passent au metestrus, recherchez tous les types de cellules, bien qu’il y ait souvent une plus grande quantité de cellules SNE et LNE par rapport aux LEU. Une plus grande quantité de débris est observée pendant le metestrus et les transitions dues à la désintégration des cellules épithéliales après l’œstrus. Au cours de cette étape, il y a un manque d’arrangement cohérent car tous les types de cellules sont vus et en différentes quantités.
Cependant, les leucocytes qui sont emballés à proximité des cellules épithéliales dans les premiers stades peuvent revenir à l’arrangement aggloméré lors de la transition vers le diestrus. Le liquide vaginal apparaît non visqueux et transparent dans la scène. Et passe à un aspect plus visqueux et opaque tout en se déplaçant dans diestrus.
À l’intérieur de chaque étape, de nombreuses variations peuvent être observées, par exemple au stade diestrus, des cellules épithéliales et des leucocytes ont été observés. Dans les arrangements, des brins de mucus agglomérés, composés de leucocytes, et un agglutination initiale de leucocytes, ainsi qu’un décaissement aléatoire ou même ultérieur ont également été observés. Lors du prélèvement de l’échantillon de liquide vaginal, il y avait des prélèvements non représentés qui justifiaient des lavages répétés, y compris l’extraction de cellules squameuses de la paroi du canal vaginal en raison d’une mauvaise insertion de seringue.
Une collection de débris uniquement, un nombre de cellules trop faible pour être catégorisé et ceux qui étaient flous. Il est courant de représenter graphiquement les progressions des étapes sur des graphiques à barres, ce qui permet aux chercheurs d’examiner le modèle de cycle global et d’identifier l’a-cyclisité. Et les échantillons peuvent ensuite être analysés en fonction de la durée du cycle et du modèle de progression du stade.
Les profils de cycle œstral peuvent être créés à l’aide d’un graphique à barres empilées, en suivant la progression du stade par rat ou par cohorte. Où les composantes de catégorisation pour chaque jour sont représentées graphiquement par jour ou par étape. Les données des composants de catégorisation peuvent également être organisées numériquement pour créer des plages normalisées et collecter des statistiques.
Pratiquez la technique de manière à ce qu’elle soit peu invasive et scannez la lame du microscope à la recherche d’échantillons représentatifs afin de réduire le biais de sélection. Dans l’ensemble, rappelez-vous, il n’existe pas de cycle normal. En suivant cette procédure, des variables expérimentales pourraient être introduites, telles que l’exercice et les paradigmes comportementaux.
Cela permettrait à la recherche d’établir le cycle de base des animaux à l’avance et de détecter les réponses hormonales à des interventions spécifiques par la suite. Cette méthode permet aux chercheurs d’explorer le lien entre les hormones stéroïdes sexuelles et d’autres systèmes corporels. Un exemple de ceci est la façon dont les récepteurs cardiaques pour les hormones stéroïdes sexuelles sont liés à la fonctionnalité du système.
