Questo protocollo è significativo in quanto fornisce sia una tecnica completa che a basso costo ed efficace in termini di tempo. Risponde agli elementi chiave della ricerca traslazionale e categorizza i dati dei componenti sia a livello individuale che di gruppo. Questa tecnica è vantaggiosa a causa della quantità totale di informazioni che possono essere estratte per quanto riguarda il profilo generale dell'animale.
Ciò include i componenti di categorizzazione e le successive conclusioni. Questa tecnica potrebbe fornire informazioni su una vasta gamma di aree di ricerca, tra cui cardiologia, neurologia e farmacologia. Questa tecnica non è applicabile esclusivamente agli studi riproduttivi.
Inizia maneggiando il ratto con una presa adeguata all'età, come la presa dello stile di compressione per i ratti adolescenti, posizionando il soggetto contro la regione superiore del torace con il naso puntato verso il basso a terra. Esporre il canale vaginale del soggetto flettendo delicatamente la coda prima di inserire la siringa. Mentre si tiene ferma la siringa con il dito anteriore e il dito medio, inserire la punta della siringa nel canale vaginale con un angolo parallelo ad esso, espellere lentamente il cloruro di sodio nel canale spingendo lo stantuffo verso l'interno con il pollice.
Estrarre il cloruro di sodio dal canale vaginale tirando lontano lo stantuffo della siringa dal rivestimento epiteliale. Utilizzare i criteri per ciascun tipo di cella per caratterizzare le celle presenti nel campione e registrare i risultati. Una nucleata cheratinizzata epiteliale o cellule epiteliali quantificate apparirà frastagliata o spigolosa.
Nonostante la mancanza di nuclei, può mostrare aree rotonde leggere all'interno della cellula che rappresentano dove un nucleo era una volta presente chiamato nuclei fantasma. Le grandi cellule epiteliali nucleate, o LNE, sono tipicamente rotonde a cellule di forma poligonale racchiuse da bordi irregolari frastagliati o angolari. I loro nuclei possono variare da intatti a degenerati o picnotici relativi alla condensazione irreversibile della cromatina nel nucleo di una cellula in fase di morte o deterioramento.
I nuclei occupano meno spazio del citoplasma all'interno della cellula, con un rapporto nucleare-citoplasmatico inferiore rispetto alle piccole cellule epiteliali. I leucociti sono cellule sferiche compatte. Il più piccolo rispetto a tutti gli altri tipi di cellule descritti.
Le cellule SNE sono cellule non cheratinizzate con nuclei rotondi che occupano uno spazio più ampio rispetto al citoplasma all'interno della cellula, creando un rapporto nucleo/citoplasma più elevato rispetto alle grandi cellule epiteliali. Utilizzare l'oggettivazione inferiore, ad esempio quattro X, per ottenere una visione rappresentativa della disposizione generale delle celle. Registrare se le cellule sono raggruppate insieme, disperse uniformemente o disperse in modo casuale e annotare l'organizzazione specifica di ciascun tipo di cella.
Quindi stimare visivamente e registrare la quantità totale di cellule, come smidge, moderata o numerosa, e le singole quantità di cellule come percentuale di ciascun tipo di cella presente. Con questi componenti di categorizzazione combinati, determinare quale fase del ciclo estrale viene presentata. All'interno dello stadio diestro, si può vedere che i leucociti sono il tipo di cellula dominante o l'unico.
Questi sono in genere disposti in modo raggruppato all'inizio, ma più dispersi nelle fasi avanzate. La quantità totale di cellule può essere relativamente bassa, il più delle volte nelle fasi successive del periodo diestro il secondo o il terzo giorno. Filamenti concentrati di leucociti possono essere osservati a causa dell'elevata quantità di muco che può essere presente in questa fase.
Piccoli grumi di filamenti cellulari di cellule SNE che accompagnano i leucociti possono essere osservati durante le fasi tardive della transizione al proestro. Il fluido vaginale, durante la transizione in, completamente transizionato in, e la transizione fuori dal diestro, appare viscoso e opaco. Durante la fase del proestro, le cellule SNE sono le cellule dominanti mentre i leucociti, le cellule LNE e AKE possono essere trovati in numero basso.
Le cellule SNE sono tipicamente disposte in cluster, fogli o fili durante questa fase e hanno un aspetto granulare che può essere osservato a un ingrandimento più elevato. Il fluido vaginale diventa non viscoso e trasparente una volta che il soggetto passa completamente allo stadio del proestro. Le cellule AKE sono dominanti durante la fase estrale, con una diminuzione delle cellule SNE e un aumento complessivo del numero e delle dimensioni delle cellule mentre continua l'estrale.
Le cellule AKE sono spesso raggruppate sotto forma di barre di cheratina. Possono anche contenere nuclei fantasma che possono diventare più dispersi nella transizione dal proestro al metestro. Il fluido vaginale non è viscoso e trasparente mentre i ratti stanno passando, completamente in transizione e transizione fuori dall'estrale.
Mentre i ratti passano al metestro, cerca tutti i tipi di cellule, anche se spesso c'è una quantità maggiore di cellule SNE e LNE rispetto alle LEU. Una maggiore quantità di detriti si osserva durante il metestro e le transizioni dovute al decadimento delle cellule epiteliali a seguito di estro. Durante questa fase, c'è una mancanza di disposizione coerente in quanto tutti i tipi di cellule sono visti e in varie quantità.
Tuttavia, i leucociti che sono impacchettati in prossimità delle cellule epiteliali nelle fasi iniziali possono tornare alla disposizione raggruppata durante la transizione in diestro. Il liquido vaginale appare non viscoso e trasparente nel palcoscenico. E cambia in un aspetto più viscoso e opaco mentre si sposta nel diestro.
All'interno di ogni stadio, si possono vedere molte variazioni, ad esempio all'interno dello stadio diestro, sono state osservate sia cellule epiteliali che leucociti. Negli arrangiamenti, sono stati osservati anche filamenti di muco raggruppati, composti da leucociti, e aggregazione iniziale di leucociti, e un successivo esborso casuale o addirittura. Durante la raccolta del campione di liquido vaginale, c'erano collezioni non rappresentate che giustificavano lavaggi ripetuti, che includevano l'estrazione di cellule squamose dalla parete del canale vaginale a causa dell'inserimento improprio della siringa.
Una raccolta di soli detriti, un numero di cellule troppo basso per essere categorizzato e quelle che erano fuori fuoco. È comune rappresentare graficamente le progressioni di stadio su grafici a barre, il che consente ai ricercatori di esaminare il modello generale del ciclo e identificare l'aciclicità. E i campioni possono quindi essere analizzati in base alla lunghezza del ciclo e al modello di progressione dello stadio.
I profili del ciclo estrale possono essere creati utilizzando un grafico a barre impilato, monitorando la progressione dello stadio per ratto o per coorte. Dove i componenti di categorizzazione per ogni giorno sono rappresentati graficamente per giorno o per fase. I dati dei componenti di categorizzazione possono anche essere organizzati numericamente per creare intervalli standardizzati e raccogliere statistiche.
Pratica la tecnica in modo che sia minimamente invasiva e scansiona il vetrino del microscopio alla ricerca di campioni rappresentativi per ridurre i pregiudizi di selezione. Nel complesso, ricorda, non esiste un ciclo normale. Seguendo questa procedura, potrebbero essere introdotte variabili sperimentali, come l'esercizio fisico e i paradigmi comportamentali.
Ciò consentirebbe alla ricerca di stabilire in anticipo il ciclo di base degli animali e di rilevare le risposte ormonali a interventi specifici in seguito. Questo metodo consente ai ricercatori di esplorare la connessione tra ormoni steroidei sessuali e altri sistemi corporei. Un esempio di questo è come i recettori cardiaci per gli ormoni steroidei sessuali si riferiscono alla funzionalità del sistema.
