Bu protokol, hem kapsamlı hem de düşük maliyetli zaman etkili bir teknik sağlaması bakımından önemlidir. Translasyonel araştırmanın temel unsurlarını ve bileşen verilerini hem bireysel hem de grup düzeyinde kategorize etmeyi yanıtlar. Bu teknik, hayvanın genel profili ile ilgili olarak çıkarılabilecek toplam bilgi miktarı nedeniyle avantajlıdır.
Bu, kategorize edici bileşenleri ve sonraki sonuçları içerir. Bu teknik, kardiyoloji, nöroloji ve farmakoloji dahil olmak üzere çok çeşitli araştırma alanlarına bakış açısı sağlayabilir. Bu teknik sadece üreme çalışmaları için geçerli değildir.
Sıçanı, ergen yaşlı sıçanlar için sıkıştırma stili tutuşu gibi yaşa uygun bir tutuşla ele alarak, konuyu burnu yere bakacak şekilde üst göğüs bölgesine yerleştirerek başlayın. Şırıngayı takmadan önce kuyruğu hafifçe bükerek konunun vajinal kanalını ortaya çıkarın. Şırıngayı işaret parmağı ve orta parmakla sabit tutarken, şırınganın ucunu vajinal kanala paralel bir açıyla yerleştirin, pistonu başparmağınızla içeri doğru iterek sodyum klorürü yavaşça kanala atın.
Şırınganın pistonunu epitel astarından uzağa çekerek sodyum klorürü vajinal kanaldan çıkarın. Numunede bulunan hücreleri karakterize etmek ve bulguları kaydetmek için her hücre tipi için ölçütleri kullanın. Çekirdekli keratinize epitel veya kantifiye epitel hücreleri pürüzlü veya açısal kenarlı görünecektir.
Çekirdek eksikliğine rağmen, hücre içinde bir zamanlar hayalet çekirdek adı verilen bir çekirdeğin bulunduğu yeri temsil eden hafif yuvarlak alanlar gösterebilir. Büyük çekirdekli epitel veya LNE hücreleri, tipik olarak düzensiz pürüzlü veya açısal sınırlarla çevrili poligonal şekilli hücrelere yuvarlaktır. Çekirdekleri, ölüm veya bozulma geçiren bir hücrenin çekirdeğindeki kromatinin geri dönüşümsüz yoğunlaşmasıyla ilgili olarak bozulmamıştan dejenere veya piknotik olarak değişebilir.
Çekirdekler, hücre içindeki sitoplazmadan daha az yer kaplar ve küçük epitel hücrelerinden daha düşük bir nükleer-sitoplazmik orana sahiptir. Lökositler kompakt küresel hücrelerdir. Tanımlanan diğer tüm hücre tipleriyle karşılaştırıldığında en küçüğü.
SNE hücreleri, hücre içindeki sitoplazmadan daha büyük bir yer kaplayan yuvarlak çekirdekli keratinize olmayan hücrelerdir ve büyük epitel hücrelerine göre daha yüksek bir çekirdek-sitoplazma oranı oluşturur. Genel hücre düzenlemesinin temsili bir görünümünü elde etmek için dört X gibi daha düşük nesneleştirmeyi kullanın. Hücrelerin bir araya toplanmış, eşit dağılmış veya rastgele dağılmış olup olmadığını kaydedin ve her hücre türünün belirli organizasyonunu not edin.
Ardından, toplam hücre miktarını, bir leke, orta veya sayısız olarak ve bireysel hücre miktarlarını mevcut her hücre türünün bir yüzdesi olarak görsel olarak tahmin edin ve kaydedin. Bu kategorize edici bileşenler bir araya getirildiğinde, hangi östrus döngüsü aşamasının sunulduğunu belirleyin. Diestrus evresinde lökositlerin baskın veya tek hücre tipi olduğu görülebilir.
Bunlar tipik olarak başlangıçta kümelenmiş bir şekilde düzenlenir, ancak geç aşamalarda daha dağınıktır. Toplam hücre miktarı, çoğunlukla ikinci veya üçüncü günde diestrus döneminin sonraki aşamalarında, nispeten düşük olabilir. Bu aşamada mevcut olabilecek yüksek miktarda mukus nedeniyle konsantre lökosit iplikçikleri gözlenebilir.
Lökositlere eşlik eden SNE hücrelerinin hücresel iplikçiklerinin küçük kümeleri, proöstrusa geçişin geç evrelerinde görülebilir. Vajinal sıvı, diestrusa geçiş yaparken, tamamen geçiş yaparken ve diestrustan çıkarken, viskoz ve opak görünür. Proöstrus evresinde, SNE hücreleri baskın hücrelerdir, lökositler, LNE ve AKE hücreleri düşük sayılarda bulunabilir.
SNE hücreleri tipik olarak bu aşamada kümeler, tabakalar veya iplikçikler halinde düzenlenir ve daha yüksek büyütmede gözlemlenebilen granüler bir görünüme sahiptir. Vajinal sıvı, konu proöstrus aşamasına tamamen geçtikten sonra viskoz olmayan ve şeffaf hale gelir. AKE hücreleri, östrus aşamasında baskındır, SNE hücrelerinde bir azalma ve östrus devam ettikçe hücrelerin sayısında ve boyutunda genel bir artış vardır.
AKE hücreleri genellikle keratin çubukları şeklinde kümelenir. Ayrıca proöstrustan metestrusa geçişte daha dağınık hale gelebilecek hayalet çekirdekler de içerebilirler. Vajinal sıvı viskoz değildir ve şeffaftır, çünkü sıçanlar estrousa geçiş yapar, tamamen geçiş yapar ve dışarı çıkar.
Sıçanlar metestrusa geçerken, tüm hücre tiplerini arayın, ancak LEU'lara kıyasla genellikle daha yüksek miktarda SNE ve LNE hücresi vardır. Metestrus sırasında daha fazla miktarda enkaz gözlenir ve östrusu takiben epitel hücre çürümesine bağlı geçişler gözlenir. Bu aşamada, tüm hücre tipleri görüldüğü ve çeşitli miktarlarda olduğu için tutarlı bir düzenleme eksikliği vardır.
Bununla birlikte, başlangıç aşamalarında epitel hücrelerine yakın olarak paketlenen lökositler, diestrusa geçerken kümelenmiş düzenlemeye geri dönebilir. Vajinal sıvı aşamada viskoz olmayan ve şeffaf görünür. Ve diestrusa geçerken daha viskoz ve opak bir görünüme dönüşür.
Her aşamada, örneğin diestrus aşamasında, hem epitel hücreleri hem de lökositler gözlenen birçok varyasyon görülebilir. Düzenlemelerde, lökositlerden oluşan kümelenmiş mukus iplikçikleri ve lökositlerin ilk kümelenmesi ve daha sonra rastgele veya hatta bir ödeme de görülmüştür. Vajinal sıvı örneğini toplarken, yanlış şırınga yerleştirilmesi nedeniyle vajinal kanal duvarından skuamöz hücrelerin ekstraksiyonunu içeren tekrarlanan lavajları garanti eden temsil edilmeyen koleksiyonlar vardı.
Sadece enkaz koleksiyonu, kategorize edilemeyecek kadar düşük bir hücre sayısı ve odak dışı olanlar. Evre ilerlemelerini çubuk grafikler üzerinde grafiklendirmek yaygındır, bu da araştırmacıların genel döngü modelini incelemelerine ve a-döngüselliği tanımlamalarına olanak tanır. Ve örnekler daha sonra döngü uzunluğu ve aşama ilerleme paterni ile analiz edilebilir.
Östrus döngüsü profilleri, sıçan başına veya kohort başına aşama ilerlemesini izleyen yığılmış bir çubuk grafik kullanılarak oluşturulabilir. Her gün için kategorilere ayırma bileşenlerinin günlük veya aşama başına grafiklendirildiği yer. Bileşen verilerini kategorilere ayırma, standartlaştırılmış aralıklar oluşturmak ve istatistik toplamak için sayısal olarak da düzenlenebilir.
Tekniği minimal invaziv olacak şekilde uygulayın ve seçim yanlılığını azaltmak için temsili numuneler için mikroskop slaytını tarayın. Genel olarak, unutmayın, normal bir döngü diye bir şey yoktur. Bu prosedürü takiben, egzersiz ve davranışsal paradigmalar gibi deneysel değişkenler tanıtılabilir.
Bu, araştırmanın önceden hayvanların temel döngüsünü oluşturmasına ve daha sonra belirli müdahalelere hormonal tepkileri tespit etmesine izin verecektir. Bu yöntem, araştırmacıların seks steroid hormonları ve diğer vücut sistemleri arasındaki bağlantıyı keşfetmelerini sağlar. Bunun bir örneği, seks steroid hormonları için kardiyak reseptörlerin sistem işlevselliği ile nasıl ilişkili olduğudur.
