פרוטוקול זה הוא משמעותי בכך שהוא מספק טכניקה מקיפה ובעלות נמוכה של זמן יעיל. הוא עונה על מרכיבים מרכזיים של מחקר תרגומי וסיווג נתוני רכיבים הן ברמה האישית והן ברמת הקבוצה. טכניקה זו היא יתרון בשל הכמות הכוללת של מידע שניתן לחלץ לגבי הפרופיל הכולל של החיה.
זה כולל את מרכיבי הסיווג ואת המסקנות הבאות. טכניקה זו יכולה לספק תובנות על מגוון רחב של תחומי מחקר, כולל קרדיולוגיה, נוירולוגיה ופרמקולוגיה. טכניקה זו אינה ישימה רק למחקרי רבייה.
התחילו בטיפול בחולדה עם אחיזה המתאימה לגיל, כגון אחיזת סגנון הדחיסה לחולדות בגיל ההתבגרות, על ידי הצבת הנבדק על אזור החזה העליון כאשר האף שלו מכוון כלפי מטה אל הקרקע. חשוף את תעלת הנרתיק של הנושא על ידי כיפוף בעדינות של הזנב לפני החדרת המזרק. תוך כדי החזקת המזרק יציב עם האצבע הקדמית והאצבע האמצעית מכניסים את קצה המזרק לתעלת הנרתיק בזווית מקבילה לה, מוציאים באיטיות את הנתרן כלורי לתעלה על ידי דחיפת הבוכנה פנימה עם האגודל.
הוציאו את הנתרן כלורי מהתעלה הנרתיקית על ידי משיכת הבוכנה של המזרק הרחק מציפוי האפיתל. השתמש בקריטריונים עבור כל סוג תא כדי לאפיין את התאים הקיימים בדגימה ולרשום את הממצאים. אפיתל קרטיניזציה גרעינית או תאי אפיתל מכמתים ייראו משוננים או בעלי קצוות זוויתיים.
למרות המחסור בגרעינים, הוא עשוי להראות אזורים עגולים בהירים בתוך התא המייצגים את המקום שבו היה בעבר גרעין שנקרא גרעיני רפאים. תאי האפיתל הגדולים, או תאי LNE, הם בדרך כלל תאים עגולים עד מצולעים, עטופים בגבולות משוננים או זוויתיים לא סדירים. הגרעינים שלהם יכולים לנוע בין שלם לניוון או פיקנוטיים הקשורים לעיבוי בלתי הפיך של כרומטין בגרעין של תא העובר מוות או הידרדרות.
הגרעינים תופסים פחות מקום מאשר הציטופלסמה בתוך התא, עם יחס גרעיני לציטופלסמי נמוך יותר מאשר תאי האפיתל הקטנים. לויקוציטים הם תאים כדוריים קומפקטיים. הקטן ביותר בהשוואה לכל סוגי התאים האחרים המתוארים.
תאי SNE הם תאים לא קרטיניים עם גרעינים עגולים שתופסים מקום גדול יותר מהציטופלסמה בתוך התא, ויוצרים יחס גרעין-ציטופלסמה גבוה יותר ביחס לתאי אפיתל גדולים יותר. השתמש בהחפצה הנמוכה יותר, כגון ארבעה X כדי לקבל תצוגה מייצגת של סידור התאים הכולל. רשום אם התאים דחוסים יחד, מפוזרים באופן שווה או מפוזרים באופן אקראי, ושימו לב לארגון הספציפי של כל סוג תא.
לאחר מכן, העריכו באופן חזותי ותעדו את כמות התאים הכוללת, כמספר קטן, בינוני או רב, ואת כמויות התא הבודדות כאחוז מכל סוג תא נוכח. כאשר רכיבים מסווגים אלה משולבים, קבעו איזה שלב מחזור אסטרוס מוצג. בתוך שלב הדיסטרוס, ניתן לראות כי לויקוציטים הם סוג התא הדומיננטי או היחיד.
אלה מסודרים בדרך כלל בצורה דחוסה בתחילת, אך מפוזרים יותר בשלבים מאוחרים. הכמות הכוללת של התאים עשויה להיות נמוכה יחסית, לרוב בשלבים המאוחרים יותר של תקופת הדיסטרוס ביום השני או השלישי. גדילים מרוכזים של לויקוציטים ניתן לראות בשל כמות גבוהה של ריר שעשוי להיות נוכח בשלב זה.
גושים קטנים של גדילים תאיים של תאי SNE המלווים את הלויקוציטים עשויים להיראות בשלבים מאוחרים במעבר לבולטים. נוזל הנרתיק, בעת המעבר לתוך, המעבר המלא לתוך, ומעבר מתוך diestrus, נראה צמיג ואטום. במהלך שלב הבליטה, תאי SNE הם התאים הדומיננטיים בעוד שתאי לויקוציטים, LNE ו-AKE עשויים להימצא במספרים נמוכים.
תאי SNE מסודרים בדרך כלל באשכולות, יריעות או גדילים בשלב זה ויש להם מראה גרגירי שניתן לראות בהגדלה גבוהה יותר. נוזל הנרתיק הופך ללא צמיג ושקוף ברגע שהנבדק עובר באופן מלא לשלב הבליטה. תאי ה-AKE דומיננטיים בשלב האסטרוס, עם ירידה בתאי ה-SNE, ועלייה כוללת במספר התאים ובגודלם ככל שהאסטרוס נמשך.
תאי AKE מקובצים לעתים קרובות בצורה של חטיפי קרטין. הם עשויים גם להכיל גרעיני רפאים שיכולים להתפזר יותר במעבר מבולט למטסטרוס. נוזל הנרתיק אינו צמיג ושקוף כאשר החולדות עוברות לתוך, עוברות באופן מלא לתוך האסטרוס ועוברות ממנו.
כאשר החולדות הופכות למטסטרו, חפשו את כל סוגי התאים, אם כי לעתים קרובות יש כמות גבוהה יותר של תאי SNE ו-LNE בהשוואה ל-LEUs. כמות גדולה יותר של פסולת נצפית במהלך ההסטרוס והמעברים עקב דעיכת תאי האפיתל בעקבות אסטרוס. בשלב זה, קיים חוסר סידור עקבי שכן כל סוגי התאים נראים ובכמויות שונות.
עם זאת, הלויקוציטים הארוזים בסמיכות לתאי האפיתל בשלבים הראשונים עשויים לחזור לסידור הגושים בעת המעבר לדיסטרוס. נוזל הנרתיק נראה לא צמיג ושקוף בשלב. ומשתנה למראה צמיג ואטום יותר תוך כדי מעבר ל-diestrus.
בתוך כל שלב ניתן לראות וריאציות רבות, למשל בשלב הדיסטרוס, נצפו גם תאי אפיתל וגם לויקוציטים. בסידורים נראו גם גדילי ריר גושים, המורכבים מלוקוציטים, וגושים ראשוניים של לויקוציטים, ומאוחר יותר אקראיים או אפילו תשלומים. בעת איסוף דגימת נוזל הנרתיק, היו אוספים לא מיוצגים שהצדיקו שטיפות חוזרות, שכללו מיצוי של תאי קשקש מדופן תעלת הנרתיק עקב החדרת מזרק לא נכונה.
אוסף של פסולת בלבד, ספירת תאים שהייתה נמוכה מכדי לקטלג אותה, וכאלה שלא היו בפוקוס. מקובל לשרטט את התקדמות הבמה בגרפים של עמודות, מה שמאפשר לחוקרים לבחון את תבנית המחזור הכוללת ולזהות מחזוריות. לאחר מכן ניתן לנתח את הדגימות לפי אורך המחזור ודפוס התקדמות הבמה.
ניתן ליצור פרופילי מחזור Estrous באמצעות גרף עמודות מוערם, העוקב אחר התקדמות השלב לכל חולדה או לכל קבוצה. כאשר הרכיבים המסווגים עבור כל יום מוצגים בגרף ליום או לכל שלב. ניתן גם לארגן את נתוני הרכיבים המסווגים באופן מספרי כדי ליצור טווחים סטנדרטיים ולאסוף נתונים סטטיסטיים.
תרגלו את הטכניקה כך שתהיה זעיר פולשנית וסרקו את שקופית המיקרוסקופ בחיפוש אחר דגימות מייצגות כדי להפחית את הטיית הבחירה. בסך הכל, זכרו, אין דבר כזה מחזור רגיל. בעקבות הליך זה, ניתן היה להציג משתנים ניסיוניים, כגון פרדיגמות פעילות גופנית והתנהגותיות.
זה יאפשר למחקר לקבוע מראש רכיבה על אופניים בסיסית של בעלי חיים ולזהות תגובות הורמונליות להתערבויות ספציפיות לאחר מכן. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לחקור את הקשר בין הורמוני סטרואידים מיניים לבין מערכות גופניות אחרות. דוגמה לכך היא כיצד קולטני לב להורמוני סטרואידים מיניים מתייחסים לתפקוד המערכת.
