Анализ синовиальной жидкости может выявить степень воспаления и наличие патогенных кристаллов при первоначальном обследовании пациента с симптомами опорно-двигательного аппарата и выпотом в суставах. Главным преимуществом данной методики является ее простота и надежность. За несколько шагов клиницист может получить важную диагностическую информацию о заболевании пациента.
Идентификация конкретных кристаллов имеет жизненно важное значение для диагностики и лечения. Кристаллы уратов указывают на подагру, тогда как пирофосфат кальция и другие кристаллы кальция указывают на артропатии, связанные с кальцием, или более тяжелую форму остеоартрита. Для начала берут образец синовиальной жидкости, собранный при артроцентезе опухших суставов пациентов.
Аннотируйте объем образца в миллилитрах и перенесите его отдельно в пробирку, содержащую антикоагулянт ЭДТА, и еще одну пробирку без каких-либо добавок. При подозрении на инфекцию асептически перенесите несколько миллилитров образца синовиальной жидкости в культуральную бутылку для микробиологического тестирования. Чтобы исследовать образец макроскопически, возьмите пробирку с образцом и определите цвет образца, который может варьироваться от бледного до темно-желтого.
Запишите наличие крови, если таковая имеется. Определите степень четкости образца, наблюдая за ним в контровом свете и определяя легкость чтения печатной страницы через трубку, содержащую образец. Затем оцените вязкость образца, капнув его из одноразовой пипетки.
В то время как появление длинной нити жидкости указывает на высокую вязкость, образование капель свидетельствует о низкой вязкости. Наблюдайте за образцом через пробирку со светом на заднем плане на наличие любых твердых частиц, включая фрагменты тканей или фибрин. Чтобы определить общее количество лейкоцитов, возьмите 0,5 микролитра образца из пробирки, содержащей ЭДТАА, с помощью пипетки Malassez-Potain.
Используйте ту же пипетку, чтобы набрать 9,5 микролитров 0,1% раствора метиленового синего. Смешайте образец и раствор метиленового синего в пипетке путем легкой инверсии. Выбросьте первые несколько капель перед тем, как вылить смесь в счетную камеру гемоцитометра.
Теперь посчитайте ячейки в двух последовательных квадратах из девяти и умножьте полученное число на 100. Выразите общее количество лейкоцитов как количество лейкоцитов на кубический миллиметр. Используйте образец синовиальной жидкости из пробирки без каких-либо добавок для определения дифференциального количества лейкоцитов в образцах синовиальной жидкости.
Чтобы определить дифференциальное количество клеток с помощью супривитального окрашивания, возьмите готовое к использованию предметное стекло, предварительно покрытое кристаллическим фиолетовым и метиленовым синим, и поместите одну небольшую каплю образца в центр предметного стекла. Затем накройте каплю образца покровным стеклом и поместите каплю иммерсионного масла для микроскопа на покровное стекло. Чтобы использовать традиционное окрашивание для оценки дифференциального количества клеток, начните с того, что поместите небольшую каплю образца в конец чистого предметного стекла.
Теперь используйте второй слайд или покровное стекло, чтобы распределить каплю по слайду движением вперед. Дайте мазку высохнуть на воздухе. Осмотрите предметное стекло, содержащее высушенный на воздухе мазок под объективом погружения в масло в 1 000 раз.
Оцените дифференциальное количество клеток, подсчитав 100 последовательных клеток, различая полиморфноядерные клетки, моноциты и лимфоциты друг от друга. Очистите предметное стекло оптической или мягкой бумагой, пропитанной этанолом. Нанесите небольшую каплю образца, не смешанного с какой-либо добавкой, на предметное стекло и накройте его покровным стеклом, прежде чем поместить предметное стекло под микроскоп.
Сфокусируйте предметное стекло под микроскопом, используя объектив с малым увеличением, и внимательно изучите его под ярким полем с 40-кратным объективом. Загляните внутрь и снаружи клеток, чтобы идентифицировать кристаллы по их размеру и форме, которые могут быть ромбовидными, игольчатыми или стержневидными. Затем вставьте поляризационный фильтр между источником света и образцом.
Для создания темного фона поворачивайте поляризатор до тех пор, пока его оптическая ось не станет перпендикулярна анализатору. После того, как двулучепреломляющий кристалл идентифицирован, вставьте компенсатор между поляризатором и образцом и переместите его параллельно или перпендикулярно оптической оси кристалла. Наблюдайте за цветом, раскрываемым кристаллом.
Для окрашивания Ализарином Красным смешайте каплю образца синовиальной жидкости с равным объемом ранее приготовленного раствора Ализарина Красного на чистом предметном стекле. Накройте предметное стекло покровным стеклом и исследуйте под микроскопом при 400-кратном увеличении, чтобы идентифицировать кристаллы. Макроскопические характеристики образцов синовиальной жидкости указывали на степень воспаления.
Образец с бледно-желтым цветом и большей четкостью обычно ассоциируется с невоспалительными состояниями, такими как остеоартрит. С другой стороны, образец, имеющий темно-желтый цвет и мутный вид, указывает на наличие клеток, мусора, гиалуроновой кислоты и фрагментов фибрина, которые связаны с воспалительными выпотами. Лейкоциты, наблюдаемые в образцах синовиальной жидкости у пациентов с остеоартритом, были в основном моноцитами и другими мононуклеарными клетками, такими как синовиоциты.
Кристаллы пирофосфата кальция были обнаружены в образцах синовиальной жидкости, что указывает на относительно более высокие уровни воспалительных цитокинов. Кроме того, положительное окрашивание Ализарином красным выявило наличие в образцах основных кристаллов фосфата кальция. Очень важно внимательно осматривать предметное стекло при обычном освещении при поиске кристаллов.
Помните, что кристаллы пирофосфата часто имеют слабое двулучепреломление и могут быть пропущены при поляризованном свете. Наличие кристаллов кальция в синовиальной жидкости и их связь с более тяжелой формой заболевания побудили исследователей изучить новые механизмы патогенеза и прогрессирования остеоартрита.
