El análisis del líquido sinovial puede revelar el grado de inflamación y la presencia de cristales patógenos durante la evaluación inicial del paciente con síntomas musculoesqueléticos y derrames articulares. La principal ventaja de esta técnica es su simplicidad y fiabilidad. En unos pocos pasos, el médico puede obtener información diagnóstica importante sobre la enfermedad del paciente.
La identificación de cristales específicos es vital para el diagnóstico y tratamiento. Los cristales de urato indican gota, mientras que el pirofosfato de calcio y otros cristales de calcio indican artropatías relacionadas con el calcio o una forma más grave de osteoartritis. Para comenzar, tome la muestra de líquido sinovial recolectada durante la artrocentesis de las articulaciones inflamadas de los pacientes.
Anote el volumen de la muestra en mililitros y transfiérala por separado a un tubo que contenga EDTA anticoagulante y a otro tubo sin ningún aditivo. En los casos sospechosos de infección, transfiera asépticamente unos pocos mililitros de la muestra de líquido sinovial a una botella de cultivo para pruebas microbiológicas. Para examinar la muestra macroscópicamente, tome un tubo que contenga la muestra y defina el color de la muestra, que puede variar de amarillo pálido a amarillo oscuro.
Registre la presencia de sangre, si la hubiera. Defina el grado de claridad de la muestra observándola a contraluz y determinando la facilidad de lectura de una página impresa a través del tubo que contiene la muestra. A continuación, evalúe la viscosidad de la muestra goteándola de una pipeta desechable.
Mientras que la aparición de una larga cadena de líquido indica alta viscosidad, la formación de gotas es indicativa de baja viscosidad. Observe la muestra a través del tubo con luz en el fondo para detectar la presencia de cualquier material particulado, incluidos fragmentos de tejido o fibrina. Para determinar el recuento total de glóbulos blancos, extraiga 0,5 microlitros de la muestra del tubo que contiene EDTAA utilizando una pipeta Malassez-Potain.
Use la misma pipeta para extraer 9,5 microlitros de solución de azul de metileno al 0,1%. Mezclar la muestra y la solución de azul de metileno en la pipeta mediante una inversión suave. Deseche las primeras gotas antes de verter la mezcla en la cámara de conteo de un hemocitómetro.
Ahora cuente las celdas en dos casillas consecutivas de nueve y multiplique el número obtenido por 100. Exprese el recuento total de glóbulos blancos como el número de leucocitos por milímetro cúbico. Use la muestra de líquido sinovial del tubo sin ningún aditivo para determinar el recuento diferencial de glóbulos blancos de las muestras de líquido sinovial.
Para determinar el recuento diferencial de células mediante tinción supravital, tome un portaobjetos listo para usar precubierto con cristal violeta y azul de metileno y coloque una pequeña gota de muestra en el centro del portaobjetos. A continuación, cubra la gota de muestra con un cubreobjetos y coloque una gota de aceite de inmersión de microscopio en el cubreobjetos. Para usar la tinción tradicional para estimar el recuento diferencial de células, comience colocando una pequeña gota de la muestra al final de un portaobjetos limpio.
Ahora use una segunda diapositiva o un cubreobjetos para extender la gota a lo largo de la diapositiva con un movimiento hacia adelante. Deje que la mancha se seque al aire. Examine el portaobjetos que contiene el frotis secado al aire por debajo del objetivo de inmersión en aceite 1, 000X.
Estimar el recuento diferencial de células contando 100 células consecutivas mientras se distinguen las células polimorfonucleares, los monocitos y los linfocitos entre sí. Limpie un portaobjetos de vidrio con papel óptico o blando embebido con etanol. Aplique una pequeña gota de la muestra no mezclada con ningún aditivo en el portaobjetos de vidrio y cúbralo con un cubreobjetos antes de colocar el portaobjetos bajo el microscopio.
Enfoque el portaobjetos bajo el microscopio utilizando un objetivo de aumento de baja potencia y examínelo cuidadosamente bajo un campo brillante con un objetivo de 40X. Mire dentro y fuera de las células para identificar los cristales de acuerdo con su tamaño y forma, que pueden ser romboidales, en forma de aguja o en forma de varilla. Luego inserte el filtro polarizador entre la fuente de luz y la muestra.
Para crear un fondo oscuro, gire el polarizador hasta que su eje óptico sea perpendicular al analizador. Una vez que se haya identificado un cristal birrefringente, inserte el compensador entre el polarizador y la muestra y muévalo paralelo o perpendicular al eje óptico del cristal. Observa el color revelado por el cristal.
Para la tinción de Alizarin Red, mezcle una gota de la muestra de líquido sinovial con un volumen igual de solución previamente preparada de Alizarin Red en un portaobjetos limpio. Cubra el portaobjetos con un cubreobjetos y examine con un aumento de 400X bajo un microscopio para identificar los cristales. Las características macroscópicas de las muestras de líquido sinovial indicaron el grado de inflamación.
Una muestra con color amarillo pálido y más claridad generalmente se asocia con afecciones no inflamatorias como la osteoartritis. Por otro lado, una muestra de color amarillo oscuro y aspecto turbio indica la presencia de células, desechos, ácido hialurónico y fragmentos de fibrina que están asociados con derrames inflamatorios. Los leucocitos observados en muestras de líquido sinovial de pacientes con osteoartritis eran en su mayoría monocitos y otras células mononucleares como sinoviocitos.
Se detectaron cristales de pirofosfato de calcio en muestras de líquido sinovial que indican niveles relativamente más altos de citoquinas inflamatorias. Además, una tinción positiva de Alizarin Red reveló la presencia de cristales básicos de fosfato de calcio en las muestras. Es muy importante examinar cuidadosamente la diapositiva bajo luz ordinaria cuando busque cristales.
Recuerde que los cristales de pirofosfato a menudo son débilmente birrefringentes y pueden perderse bajo luz polarizada. La presencia de cristales de calcio en el líquido sinovial y su asociación con una forma más grave de enfermedad han llevado a los investigadores a explorar nuevos mecanismos en la patogénesis y la progresión de la osteoartritis.
